本發明涉及制劑制備領域，特別涉及一種美白、鎮靜及改善睡眠的褪黑素納米組合物。
背景技術：
：褪黑激素是從哺乳動物大腦部深處像松果般大小的“松果體”分泌的一種天然吲哚類激素，人稱“松果體素”。據研究表明褪黑素可使人黑色素細胞生長受阻，抑制酪氨酸酶活性使黑色素減退，并能促進細胞新陳代謝；通過清除機體自由基，抗氧化和抑制脂質的過氧化反應保護細胞結構、防止損傷、降低體內過氧化物的含量，對外源性毒物造成的損傷有明顯的保護作用，有廣泛的生理活性參與鎮靜、催眠、鎮痛和免疫效應等活動。褪黑素口服產品有顯著的肝臟“首過效應”，口服生物利用度低。目前市場已有少量直接添加褪黑素的市售護膚品，但是，由于褪黑素為高結晶性物質，溶解度低、水分散性差，市售護膚品中褪黑素的含量低，皮膚透過性能差，難以有效發揮其功效。同時，普通制劑在放置過程中褪黑素易結晶析出，放置穩定性差。技術實現要素：有鑒于此，本發明目的在于提供一種穩定性好、載藥量大、皮膚透過性好，應用范圍廣的褪黑素納米組合物及其制備方法和應用。為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：本發明提供了一種褪黑素納米組合物，包括如下質量百分含量的組分：褪黑素0.1％～8.0％，乳化劑2.0％～12.0％，助乳化劑10.0％～50.0％，液體脂質1.0％～10.0％，保濕劑0.01％～5.0％，穩定劑0.01％～5.0％，余量的水。優選的，所述乳化劑為吐溫80、吐溫60、吐溫40、吐溫20、聚氧乙烯蓖麻油-20、聚氧乙烯蓖麻油-30、聚氧乙烯蓖麻油-35、聚氧乙烯蓖麻油-40、PEG40氫化蓖麻油、PEG30氫化蓖麻油、PEG20氫化蓖麻油、PEG10氫化蓖麻油、PEG5氫化蓖麻油、聚乙二醇400單甘油酯、聚乙二醇400雙甘油酯、聚乙二醇600單甘油酯、聚乙二醇600雙甘油酯、椰油基葡糖苷、鯨蠟硬脂醇聚醚-20、鯨蠟硬脂醇聚醚-25中的一種或幾種的混合物。優選的，所述助乳化劑為聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、甘油、1,2-己二醇、1,3-丁二醇、1,2-戊二醇、二乙二醇單乙基醚、乙二醇單芐醚、乙氧基二甘醇、丁醇聚醚-9、丁醇聚醚-12、丁醇聚醚-26、丁醇聚醚-35、PPG-26-丁醇聚醚-26和泊洛沙姆中的一種或幾種的混合物。優選的，所述液體脂質為肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸癸酸甘油三酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯、亞油酸甘油酯、油酸、丙二醇單辛酸酯、二辛癸酸丙二醇酯、癸二酸二乙酯、辛癸酸可可脂、異壬酸異壬酯、三乙酸甘油酯、二甲基硅油、維生素E、角鯊烯和大豆油中的一種或幾種的混合物。優選的，所述保濕劑為尿囊素、透明質酸、神經酰胺、殼聚糖、山梨醇、乳酸鈉、硫酸軟骨素、氨基酸和維生素B5的一種或幾種的混合物。優選的，所述穩定劑為黃原膠、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、明膠、瓜爾膠、阿拉伯膠、卡波姆、酪氨酸、酪氨酸甲酯鹽酸鹽、酪氨酸乙酯鹽酸鹽和酪氨酸丙酯鹽酸鹽的一種或幾種的混合物。優選的，所述褪黑素納米組合物的粒徑為10～100nm。本發明提供了一種上述技術方案所述褪黑素納米組合物的制備方法，包括如下步驟：(1)將褪黑素、乳化劑、助乳化劑和液體脂質溶解，得到油相；(2)將穩定劑、保濕劑和水混合溶解，得到的溶液過濾后，得水相；(3)將所述步驟(2)得到的水相與所述步驟(1)所得油相以10～60rpm的轉速進行攪拌混合15～40min，邊攪拌邊混合，得到褪黑素納米組合物；所述步驟(1)和步驟(2)之間沒有時間順序限定。本發明提供了上述技術方案所述褪黑素納米組合物或上述技術方案所述制備方法得到的褪黑素納米組合物在化妝品、保健品、藥品、食品制備中的應用，具體為在美白、鎮靜、改善睡眠中的應用。優選的，所述褪黑素納米組合物的產品形式包括：霜劑、水劑、乳劑、噴劑、凝膠劑。本發明中的褪黑素納米組合物應用乳化劑、助乳化劑、液體脂質形成熱力學穩定的均相分散體系，穩定性良好，皮膚吸收快，生物相容性好，具有良好的美白、鎮靜及改善睡眠的作用。本發明提供的褪黑素納米組合物載藥量大，活性成分褪黑素的濃度可達8.0％，褪黑素納米組合物作為透過皮膚的儲庫，持續釋放褪黑素，能夠長時間維持在有效濃度，更好地發揮護膚功效。實驗結果表明，本發明提供的褪黑素納米組合物放置30天后，性狀及粒徑未發生顯著性變化，穩定性好；12h累積皮膚透過量可以達到3755μg/cm2以上，具有優異的皮膚透過性。本發明提供的褪黑素納米組合物穩定性好、載藥量大、皮膚透過性好，可以廣泛的應用于化妝品領域中。本發明提供的褪黑素納米組合物的制備方法簡單，工藝易于控制，適宜工業化、規模化生產，且整個過程中未使用有機溶劑，對皮膚刺激小，安全性高。附圖說明圖1是本發明實施例4-7及對比例1-2的體外皮膚累積透過曲線。具體實施方式本發明提供了一種褪黑素納米組合物，包括如下質量百分含量的組分：褪黑素0.1％～8.0％，乳化劑2.0％～12.0％，助乳化劑10.0％～50.0％，液體脂質1.0％～8.0％，保濕劑0.01％～5.0％，穩定劑0.01％～5.0％，余量的水。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為0.1％～8.0％的褪黑素，優選為0.5％～6％，更優選為2.0％～5.0％。褪黑激素具有使人黑色素細胞生長受阻，抑制酪氨酸酶活性使黑色素減退；同時通過清除機體自由基、抗氧化和抑制脂質的過氧化反應，參與鎮靜、催眠、鎮痛和免疫效應等生理活動。本發明對褪黑素的來源沒有限定，采用市售褪黑素即可。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為2.0％～12.0％的乳化劑，優選為3.0％～10％，更優選為3.5％～8.0％。在本發明中，所述乳化劑優選為吐溫80、吐溫60、吐溫40、吐溫20、聚氧乙烯蓖麻油-20、聚氧乙烯蓖麻油-30、聚氧乙烯蓖麻油-35、聚氧乙烯蓖麻油-40、PEG40氫化蓖麻油、PEG30氫化蓖麻油、PEG20氫化蓖麻油、PEG10氫化蓖麻油、PEG5氫化蓖麻油、聚乙二醇400單甘油酯、聚乙二醇400雙甘油酯、聚乙二醇600單甘油酯、聚乙二醇600雙甘油酯、椰油基葡糖苷、鯨蠟硬脂醇聚醚-20、鯨蠟硬脂醇聚醚-25中的一種或幾種的混合物。所述的混合物優選為1～4種乳化劑的混合物，更優選為吐溫60、吐溫40、吐溫20、聚氧乙烯蓖麻油-20、聚氧乙烯蓖麻油-30、聚氧乙烯蓖麻油-35、聚氧乙烯蓖麻油-40、PEG40氫化蓖麻油、PEG30氫化蓖麻油、PEG20氫化蓖麻油、聚乙二醇400單甘油酯、聚乙二醇400雙甘油酯、鯨蠟硬脂醇聚醚-20、鯨蠟硬脂醇聚醚-25混合物。在本發明中，對混合物中各種乳化劑的質量比沒有限制。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為10.0％～50.0％的助乳化劑，優選為15.0％～45.0％，更優選為22.0％～40.0％。在本發明中，所述助乳化劑優選為聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、甘油、1,3-丁二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、二乙二醇單乙基醚、乙二醇單芐醚、乙氧基二甘醇、丁醇聚醚-9、丁醇聚醚-12、丁醇聚醚-26、丁醇聚醚-35、PPG-26-丁醇聚醚-26、泊洛沙姆的一種或幾種的混合物；所述的混合物優選為1～4種助乳化劑的混合物，更優選為聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、甘油、1,3-丁二醇、1,2-己二醇、1,2-戊二醇、二乙二醇單乙基醚、丁醇聚醚-26的混合物。在本發明中，對混合物中各種助乳化劑的質量比沒有限制。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為1.0％～10.0％的液體脂質；優選為1.0％～8.0％，更優選為1.5％～6.0％。在本發明中，所述液體脂質為肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸癸酸甘油三酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯、亞油酸甘油酯、油酸、丙二醇單辛酸酯、二辛癸酸丙二醇酯、癸二酸二乙酯、辛癸酸可可脂、異壬酸異壬酯、三乙酸甘油酯、二甲基硅油、維生素E、角鯊烯和大豆油中的一種或幾種的混合物；所述的混合物優選為1～4種液體脂質的混合物，更優選為肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、辛酸癸酸甘油三酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸甘油酯、亞油酸甘油酯、油酸、丙二醇單辛酸酯、二辛癸酸丙二醇酯、癸二酸二乙酯、三乙酸甘油酯、二甲基硅油、維生素E、角鯊烯。在本發明中，對混合物中各種液體脂質的質量比沒有限制。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為0.01％～5.0％的保濕劑，優選為0.05％～4.5％，更優選為0.1％～4.0％。在本發明中，所述保濕劑優選為尿囊素、透明質酸、神經酰胺、殼聚糖、山梨醇、乳酸鈉、硫酸軟骨素、氨基酸、維生素B5的一種或幾種的混合物；所述的混合物優選為1～3種保濕劑的混合物，更優選為尿囊素、透明質酸、神經酰胺、殼聚糖、氨基酸、維生素B5。在本發明中，對混合物中各種保濕劑的質量比沒有限制。本發明提供的褪黑素納米組合物包括質量百分含量為0.01％～5.0％的穩定劑，優選為0.05％～4.5％，更優選為0.1％～4.0％。在本發明中，所述穩定劑優先為黃原膠、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、明膠、瓜爾膠、阿拉伯膠、卡波姆、酪氨酸、酪氨酸甲酯鹽酸鹽、酪氨酸乙酯鹽酸鹽、酪氨酸丙酯鹽酸鹽的一種或幾種的混合物；所述的混合物優選為1～3種保濕劑的混合物，更優選為聚乙烯吡咯烷酮、羥丙甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、瓜爾膠、阿拉伯膠、酪氨酸、酪氨酸甲酯鹽酸鹽、酪氨酸乙酯鹽酸鹽、酪氨酸丙酯鹽酸鹽。在本發明中，對混合物中各種穩定劑的質量比沒有限制。本發明提供的褪黑素納米組合物包括余量的水，所述的水優選為純化水。本發明提供的褪黑素納米組合物的粒徑為10～100nm，優選為15～80nm，更優選為20～60nm，進一步優選為30～50nm。本發明提供了上述褪黑素納米組合物的制備方法，包括如下步驟：(1)將褪黑素、乳化劑、助乳化劑、液體脂質溶解，得到油相；(2)將穩定劑、保濕劑和水混合攪拌溶解，得到的溶液過濾后，得水相；(3)將所述步驟(2)得到的水相與所述步驟(1)所得油相，邊攪拌邊混合，得到本發明的褪黑素納米組合物；(4)將所述步驟(3)得到的褪黑素納米乳液過濾后即得成品；所述步驟(1)和步驟(2)之間沒有時間順序限定。本發明將褪黑素、乳化劑、助乳化劑、液體脂質溶解，得到油相。在本發明中，所述溶解的溫度優選為35～80℃，更優選為38～70℃，進一步優選為40～65℃；所述溶解的時間優選為10～30min，更優選為12～25min，進一步優選為15～20min。在本發明中，對加熱方式沒有具體的限定，可以采用本領域常規的方式，如水浴加熱。優選使用夾層鍋水浴加熱的方式進行溶解。所述褪黑素、乳化劑、助乳化劑、液體脂質的用量和種類與上述技術方案所述一致，在此不再贅述。本發明將穩定劑、保濕劑和水混合攪拌溶解過濾后，得到水相。在本發明中，所述穩定劑、保濕劑和水混合攪拌溶解的溫度優選為35～80℃，更優選為38～70℃，進一步優選為40～65℃；所述攪拌溶解的時間優選為10～30min，更優選為12～25min，進一步優選為15～20min；本申請對過濾的方式沒有特殊限定，優選使用濾膜進行過濾，過濾掉未溶解的雜質。所述濾膜的孔徑優選為0.22～1.0μm，更優選為0.45μm。本發明對濾膜的來源沒有特殊限定，采用市售濾膜即可。在本發明中，所述穩定劑、保濕劑、水的用量和種類與上述技術方案所述一致，在此不再贅述。在本發明中，所述油相、水相溶解的制備過程沒有時間順序的限制。本發明將油相和水相混合攪拌得褪黑素納米乳液。在本發明中，所述油水相混合過程中的攪拌速度優選為10～60rpm，更優選為15～55rpm，進一步的為20～50rpm。所述油水相混合過程中的時間優選為15～40min，更優選為20～30min。混合后得到分散穩定性好的褪黑素納米乳液，即為褪黑素納米組合物。所述油相和水相混合后，本發明優選將得到的混合物過濾得到褪黑素納米組合物。本申請對過濾的方式沒有特殊限定，優選使用濾膜進行過濾。所述濾膜孔徑優選為0.22～1.0μm，更優選為0.45μm。在本發明中，經過濾后得到的成品褪黑素納米組合物的粒徑為10～100nm，優選為15～80nm，更優選為20～60nm，進一步為30～50nm。本發明提供了一種褪黑素納米組合物在化妝品、保健品、藥品、食品中的應用，起到美白、鎮靜及改善睡眠的作用。所述褪黑素納米組合物的產品形式包括：霜劑、水劑、乳劑、噴劑、凝膠劑。本發明提供的褪黑素納米組合物添加到化妝品、保健品、藥品、食品中能夠使人黑色素細胞生長受阻，抑制酪氨酸酶活性使黑色素減退，并能促進細胞新陳代謝；通過清除機體自由基、抗氧化和抑制脂質的過氧化反應保護細胞結構、防止損傷、降低體內過氧化物的含量，對外源性毒物造成的損傷有明顯的保護作用。在本發明的褪黑素納米組合物粒徑低，能夠提高褪黑素納米組合物產品的皮膚透過性，能夠廣泛的應用于化妝品、保健品、藥品、食品中，尤其是美白類化妝品中。本發明提供的褪黑素納米組合物還具有參與鎮靜、催眠、鎮痛和免疫效應等生理活動的作用，可以應用到保健品、藥品、食品中。下面結合實施例對本發明提供的褪黑素納米組合物進行詳細的說明，但是不能把它們理解為對本發明保護范圍的限定。實施例1將0.1％褪黑素、1.0％吐溫60、2.0％聚氧乙烯蓖麻油-20、15.0％丙二醇、1.0％肉豆蔻酸異丙酯，在35℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.05％羥丙甲基纖維素、4.0％尿囊素加入到76.85％的水中，于35℃水浴條件下以15rpm的轉速攪拌10min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于35℃水浴條件下攪拌以15rpm的轉速攪拌10min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為10.8nm。實施例2將1.0％褪黑素、2.0％吐溫40、2.0％聚氧乙烯蓖麻油-30、1.0％聚乙二醇400單甘油酯、5.0％二丙二醇、11.0％1,2-己二醇、3.0％聚乙二醇、3.0％1,2-戊二醇、1.0％棕櫚酸異丙酯、2.0％辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯，在50℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％聚乙烯吡咯烷酮、1.0％酪氨酸乙酯鹽酸鹽、0.5％殼聚糖、2.0％維生素B5加入到65.4％的水中，于50℃水浴條件下以30rpm的轉速攪拌15min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于50℃水浴條件下攪拌以30rpm的轉速攪拌10min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為25.5nm。實施例3將8.0％褪黑素、2.0％聚氧乙烯蓖麻油-35、3.0％PEG30氫化蓖麻油、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-25、2.0％丁醇聚醚-26、7.0％1,2-戊二醇、15.0％聚乙二醇、10.0％1,3-丁二醇、3.0％油酸、10.0％二乙二醇單乙基醚、1.0％聚乙二醇月桂酸甘油酯、3.0％亞油酸甘油酯、1.0％丙二醇單辛酸酯、1.0％癸二酸二乙酯，在60℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將4.0％酪氨酸丙酯鹽酸鹽、0.1％神經酰胺加入到28.9％的水中，于60℃水浴條件下以45rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于60℃水浴條件下攪拌以45rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為80.3nm。實施例4將6.0％褪黑素、1.0％吐溫20、3.0％聚氧乙烯蓖麻油-40、2.0％聚乙二醇400雙甘油酯、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-20、8.0％1,3-丁二醇、11.0％1,2-己二醇、10.0％丙二醇、2.0％聚乙二醇硬脂酸甘油酯、1.0％三乙酸甘油酯、1.0％二甲基硅油，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.2％羧甲基纖維素鈉、0.1％透明質酸、1.0％氨基酸加入到52.7％的水中，于45℃水浴條件下以35rpm的轉速攪拌15min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以35rpm的轉速攪拌15min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為66.7nm。實施例5將3.5％褪黑素、6.0％PEG40氫化蓖麻油、1.0％丁醇聚醚-26、15.0％二乙二醇單乙基醚、20.0％丙二醇、1.0％辛酸癸酸甘油三酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將3.0％酪氨酸甲酯鹽酸鹽、0.1％透明質酸加入到50.4％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌15min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌15min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為21.2nm。實施例6將2.0％褪黑素、1.0％聚氧乙烯蓖麻油-40、5.0％PEG20氫化蓖麻油、2.0％丁醇聚醚-26、8.0％丙二醇、5.0％甘油、10.0％1,3-丁二醇、4.0％二乙二醇單乙基醚、3.0％二辛癸酸丙二醇酯、1.0％維生素E、1.0％角鯊烯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％瓜爾膠、1.0％酪氨酸甲酯鹽酸鹽、2.0％尿囊素、1.0％氨基酸加入到53.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為32.7nm。實施例7將4.0％褪黑素、4.0％聚氧乙烯蓖麻油-35、1.0％聚乙二醇400單甘油酯、12.0％二丙二醇、10.0％聚乙二醇、10.0％1,2-戊二醇、5.0％油酸、2.0％肉豆蔻酸異丙酯、1.0％維生素E，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％阿拉伯膠、2.0％酪氨酸乙酯鹽酸鹽、0.1％神經酰胺、0.5％殼聚糖加入到45.3％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為29.5nm。實施例8將4.0％褪黑素、5.0％吐溫60、2.0％PEG40氫化蓖麻油、13.0％1,3-丁二醇、10.0％1,2-己二醇、9.0％二乙二醇單乙基醚、2.0％辛酸癸酸甘油三酯、1.0％角鯊烯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.05％聚乙烯吡咯烷酮、3.0％尿囊素、0.1％透明質酸加入到50.85％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為35.9nm。實施例9將4.0％褪黑素、6.0％聚氧乙烯蓖麻油-35、10.0％丙二醇、5.0％1,2-己二醇、10.0％甘油、10.0％1,2-戊二醇、5.0％油酸、2.0％棕櫚酸異丙酯、1.0％丙二醇單辛酸酯、1.0％二甲基硅油，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％羥丙甲基纖維素、2.0％酪氨酸丙酯鹽酸鹽、1.0％氨基酸加入到42.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為44.1nm。實施例10將4.0％褪黑素、2.0％吐溫40、4.0％聚氧乙烯蓖麻油-20、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-20、7.0％1,2-戊二醇、10.0％丙二醇、5.0％1,2-己二醇、3.0％油酸、1.0％辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、1.0％聚乙二醇硬脂酸甘油酯、1％三乙酸甘油酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.05％羧甲基纖維素鈉、1.0％酪氨酸甲酯鹽酸鹽、2.0％尿囊素、0.5％殼聚糖加入到57.45％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為26.3nm。實施例11將4.0％褪黑素、2.0％吐溫20、6.0％聚氧乙烯蓖麻油-40、5.0％聚乙二醇、10.0％1,3-丁二醇、5.0％油酸、10.0％二乙二醇單乙基醚、1.0％聚乙二醇月桂酸甘油酯、1.0％亞油酸甘油酯、2.0％癸二酸二乙酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％阿拉伯膠、3.0％維生素B5加入到50.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為72.6nm。實施例12將4.0％褪黑素、3.0％聚氧乙烯蓖麻油-30、3.0％PEG30氫化蓖麻油、5.0％二丙二醇、7.0％1,2-己二醇、5.0％1,3-丁二醇、10.0％1,2-戊二醇、2.0％二辛癸酸丙二醇酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將1.0％酪氨酸乙酯鹽酸鹽、0.1％透明質酸加入到59.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為55.1nm。實施例13將4.0％褪黑素、5.0％PEG40氫化蓖麻油、2.0％PEG20氫化蓖麻油、5.0％丙二醇、5.0％1,2-戊二醇、5.0％聚乙二醇、10.0％甘油、3.0％棕櫚酸異丙酯、1.0％維生素E，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％瓜爾膠、0.1％神經酰胺加入到59.8％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為36.5nm。實施例14將4.0％褪黑素、5.0％吐溫60、2.0％聚乙二醇400雙甘油酯、4.0％1,3-丁二醇、15.0％1,2-己二醇、1.0％油酸、6.0％二乙二醇單乙基醚、1.0％肉豆蔻酸異丙酯、1.0％角鯊烯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.2％聚乙烯吡咯烷酮、2.0％氨基酸加入到58.8％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為28.9nm。實施例15將4.0％褪黑素、5.0％聚氧乙烯蓖麻油-20、2.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-25、13.0％丙二醇、3.0％1,3-丁二醇、8.0％1,2-戊二醇、8.0％二乙二醇單乙基醚、1.0％肉豆蔻酸異丙酯、2.0％辛酸癸酸甘油三酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將0.1％羥丙甲基纖維素、1.0％酪氨酸甲酯鹽酸鹽、1.0％尿囊素、2％維生素B5加入到49.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為47.4nm。實施例16將4.0％褪黑素、4.0％聚氧乙烯蓖麻油-30、1.0％聚乙二醇400單甘油酯、1.0％鯨蠟硬脂醇聚醚-25、8.0％丙二醇、5.0％1,2-己二醇、8.0％1,2-戊二醇、2.0％油酸、2.0％辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯、1.0％聚乙二醇硬脂酸甘油酯，在45℃水浴條件下溶解，得到油相，備用；將1.0％尿囊素、0.1％神經酰胺、1.0％酪氨酸加入到61.9％的水中，于45℃水浴條件下以20rpm的轉速攪拌20min，用0.45μm的微孔濾膜過濾，得到水相，備用；將水相加至油相中，于45℃水浴條件下攪拌以20rpm的轉速攪拌20min，再用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得褪黑素納米組合物成品。對褪黑素納米組合物的粒徑進行檢測，可得該褪黑素納米組合物粒徑為55.7nm。實施例17將實施例1～16得到的褪黑素納米組合物在密閉容器、室溫條件下放置30天，檢查樣品的性狀及粒徑，實驗結果如表1所示。表1實施例1～20褪黑素納米組合物穩定性試驗結果穩定性試驗結果表明：本發明提供的褪黑素納米組合物在無團聚、分層現象，且粒徑在10～100nm之間，滿足實際應用要求，樣品在放置30天后也未出現團聚分層現象，樣品粒徑未發生顯著性變化，仍然滿足實際應用需求，尤其在藥物濃度高的情況下仍然較穩定，未發現褪黑素結晶析出現象，無藥物泄漏，因此，本發明提供的褪黑素納米組合物具有良好的穩定性。對比例1按照常規霜劑制備方法制備褪黑素霜劑：將2.0％褪黑素、3.0％硬脂酸、4.5％單硬脂酸甘油酯、5.0％十六十八醇、6.0％聚二甲基硅氧烷于75℃水浴中熔融，得到油相；將10.0％甘油、5.0％丙二醇、0.3％三乙醇胺和65.2％純化水于75℃水浴中溶解，得到水相；將油相和水相攪拌混合，并乳化，冷卻，即得含量為2.0％的褪黑素霜劑。對比例2按對比例1中的配方及方法制備不含有褪黑素的空白霜劑，與實施例7制備的褪黑素濃度為4％的褪黑素納米組合物，按照質量比1:1進行復配，得到含2.0％的褪黑素納米組合物的霜劑，作為霜劑對照。實施例18以體重為160～220g雄性SD大鼠腹部皮膚為透皮試驗的障礙層進行透皮試驗。將完整無破損的皮膚固定于接收池和供給池之間(皮膚內層面向接收池)；擴散池參數為：有效擴散面積3.14cm2，接收池容積約7.0ml，磁力攪拌速度600rpm；在接收池內充滿釋放介質4.5％鯨蠟硬脂醇聚醚-20％乙醇-生理鹽水，排除氣泡，開啟攪拌，并恒溫至(37.0±0.5)℃，向皮膚表面分別均勻涂布樣品1g，于1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h吸取接收液0.35ml，并補充釋放介質0.35ml，接收液使用0.22μm有機濾膜過濾，使用高效液相色譜測定經過濾的接收液中褪黑素的濃度，計算不同時間藥物累積透皮量。按以下公式計算褪黑素單位面積累積透皮量：其中：Qs為累積透皮量；S為有效擴散面積；V為接收池中生理鹽水體積；Ci為第1次至上次取樣時接收液中藥物濃度；n為第n次取樣體積；Cn為該次取樣時接收液中藥物濃度。將實施例4～7及對比例1、對比例2制備的樣品按照上述方法進行透皮試驗，試驗結果見圖1。由圖1可以看出，實施例4～7樣品的皮膚累積透過量都明顯高于對比例1樣品的皮膚累積透過量。實施例4～7的12h累積透過量分別為3755μg/cm2、2633μg/cm2、2233μg/cm2、2922μg/cm2，對比例1的12h累積透過量僅為535μg/cm2。本發明的褪黑素納米組合物的皮膚透過遠高于對比例1，具有優良的皮膚透過性。對比例2為含有2.0％本發明褪黑素納米組合物的霜劑，其組分除褪黑素之外與對比例1中的組分相同。通過圖1可以看出，對比例2樣品的皮膚累積透過量明顯高于對比例1樣品。實施例19采用日光模擬器人工光源，以2.0倍最小紅斑量(2MED)連續紫外線(波段290～400nm)在20名健康受試者上臂內側誘導皮膚黑化模型。各10名受試者分別涂抹實施例6樣品和對比例1樣品早晚各一次，30天后比較前后黑素值。采用分光測色計(CM-2600d)儀器測試上臂內側黑素值，通過前后數值的變化評估樣品皮膚美白的功效。表2實驗前后皮膚黑素值結果(n＝10)時間實施例6對比例10天208.5206.530天145.0181.7變化率(％)30.512.0從表2中的結果可以看出實施例6的黑素值的下降趨勢明顯優于對比例1的結果。說明本發明提供的褪黑素納米組合物有一定的美白功效。實施例20通過給藥前后小鼠在小動物自主活動儀中的活動次數來評價納米組合物的鎮靜作用。KM小鼠50只，雌雄各半，隨機分成5組：空白對照組、對比例1組、對比例2組、實施例6組、實施例7組，每組10只。腹部脫毛預適應一天，于實驗第2天給藥，各組分別取樣品1g均勻涂抹于腹部；每天2次，連續7天。末次給藥3h后，將各組小鼠分別放入自主活動儀中，適應5min后，觀察并記錄10min內小鼠自主活動次數。比較給藥組與空白組小鼠活動數，并按下公式計算給藥組小鼠10min內的自主活動抑制率。表3納米組合物對小鼠自主活動的影響組別動物數(只)活動次數抑制率(％)空白對照組1095.9±3.5——對比例1組1092.0±3.94.1對比例2組1081.7±3.514.8實施例6組1078.0±4.118.7實施例7組1066.7±2.130.5從上述結果表明含褪黑素納米組合物各組與空白組比較均能減少小鼠自主活動次數，隨褪黑素在納米組合物中濃度的增加實施例7組能顯著減少小鼠自主活動次數。說明本發明提供的褪黑素納米組合物透過皮膚有一定的鎮靜功效。實施例21取實施例4～7制備的褪黑素納米組合物樣品，分別與對比例1中的空白霜劑按照質量比1:1進行復配，進行皮膚刺激性試驗：取健康家兔18只，體重(2.0±0.2)kg，隨機分為6組，每組動物3只，于實驗前24h將家兔背部皮膚兩側去毛，去毛后24h檢查去毛皮膚是否受傷，受傷皮膚不宜做皮膚刺激性試驗。每天涂抹使用實施例4～7得到的褪黑素納米組合物制備的霜劑3次，連續涂抹7天，同時涂抹空白霜劑(不給予任何藥物)進行對照，觀察試驗結果，將試驗結果列于表4中。根據表4中的試驗結果可以看出，使用實施例4～7制備的褪黑素納米組合物制備的霜劑及空白霜劑涂抹于家兔皮膚后均無充血、紅腫現象，說明本發明提供的褪黑素納米組合物對皮膚沒有刺激性。表4實施例4～7納米組合物及空白組皮膚刺激性觀察結果“+”家兔皮膚充血、紅腫；“++”表示充血、紅腫現象仍在，但有增加趨勢；“—”表示無充血、紅腫現象。由以上實施例可知，本發明提供的褪黑素納米組合物穩定性好、載藥量大、皮膚透過性好，能夠很好的起到美白、鎮靜、改善睡眠等作用，且本發明制備方法簡單，易于控制，適宜工業化、規模化生產。以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3