本發明涉及醫藥學領域，特別是涉及一種植物提取物及其制備方法和用途。

背景技術：

葵花盤為脫去葵花籽的向日葵(helianthusannuusl.)，向日葵屬于菊科向日葵屬，為一年生草本植物，別名葵花，我國古籍上又叫西番蓮、丈菊、迎陽花等。我國栽培向日葵至少已有近四百年的歷史，過往人們會將脫去葵花籽的葵花盤當作廢棄物燃燒掉，近年來葵花盤由于含有多種營養成分多被制作為飼料或用來提取果膠。葵花盤其實也是一味中藥材，葵花盤，味甘、性寒、無毒，歸肝經。功能祛風，平肝，清濕熱，散滯氣，益氣補腎。《中華本草》中記載其有治療高血壓、頭痛、頭暈、耳鳴等癥狀的作用。

向日葵作為我國重要的油料作物，種植面積廣泛，其種子用作榨油，而花盤尚未開發利用，只是在民間驗方中用作藥物。研究表明，葵花盤具有降低血壓的作用，然而目前對于其舒張血管的作用并無相關報道。

技術實現要素：

本發明的目的旨在提供一種葵花盤提取物及其制備方法和舒張血管效果。

具體而言，本發明的第一方面是提供了一種葵花盤提取物，所述葵花盤提取物含總黃酮16.9～17.3wt％、綠原酸6.6～6.8wt％。

在一優選例中，所述葵花盤提取物由如下方法制得：將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，所述石油醚與乙酸乙酯萃取步驟保留下層液體，最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到正丁醇相提取物。

本發明的第二方面是提供了一種上述的葵花盤提取物的制備方法，所述方法包括：將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，所述石油醚與乙酸乙酯萃取步驟保留下層液體，最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到正丁醇相提取物。

本發明還提供了上述葵花盤提取物在制備擴血管藥物中的用途。

本發明各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。

附圖說明

圖1本發明的葵花盤正丁醇相提取物的蘆丁標準曲線，說明蘆丁濃度在0～640ug/ml范圍內與吸光度線性良好；

圖2本發明的葵花盤正丁醇相提取物的綠原酸標準曲線，說明綠原酸濃度在0～128ug/ml范圍內與吸光度線性良好；

圖3本發明的葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈具有舒張作用，并且其舒張血管作用呈現濃度依賴性，舒張作用效果較蘆丁和綠原酸強；

圖4本發明的葵花盤正丁醇相提取物的舒張血管主要通過no途徑。

具體實施方式

實施例一葵花盤正丁醇相的提取和定量分析

1.材料與方法

1.1材料

葵花盤，購買產地為河北國安的栽培品種，經上海中醫藥大學教學實驗中心可燕教授鑒定為菊科向日葵屬向日葵(helianthusannuusl.)；蘆丁、綠原酸標準品(上海源葉生物科技有限公司)；75％乙醇、正丁醇(國藥集團化學試劑有限公司)；722可見光分光光度計(上海精密儀器有限公司)；鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)。

1.2方法

1.2.1葵花盤正丁醇相的提取

采集來的新鮮葵花盤至鼓風干燥箱中60℃烘干，直接粉碎機粉碎；取1kg葵花盤粉末，將葵花盤粉碎，通過回流裝置以75％乙醇提取；將提取物旋蒸、離心去沉淀；石油醚—乙酸乙酯—正丁醇依次萃取，石油醚與乙酸乙酯萃取保留的是下層液體,最后加入正丁醇，靜置后分層，保留其上層提取液；將所得上層提取液旋蒸、離心去沉淀，得到其正丁醇相提取物1.024克，配制成1mg/ml，用于葵花盤正丁醇相提取物中總黃酮和綠原酸的定量分析。

1.2.2葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮定量分析

1.2.2.1蘆丁標準曲線的制作

準確稱取蘆丁標準品10mg，用90％乙醇溶解并定容至10ml，置于棕色瓶中4℃保存備用(1000μg/ml)。分別吸取標準品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、0.16、0.32、0.64ml于10ml容量瓶中，加入0.3ml5％nano2溶液，混合均勻，6min后加0.3ml10％al(no3)3，混合均勻后靜置6min，然后加入4ml4％naoh溶液，靜置15min后用90％乙醇溶液定容至10ml，混勻，15min后于510nm處測定吸光值。以蘆丁濃度(x)對吸光度(y)進行線性回歸分析，繪制蘆丁標準曲線。

1.2.2.2葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮定量分析

上述1.2.1中提取液稀釋后，參照標準曲線的制作方法，分別按比加入5％nano2溶液、10％al(no3)3和4％naoh溶液，定容制成樣品液，在510nm處測其吸光度。提取率計算公式為：

w＝c×v×n/m

其中：c－樣品的濃度，根據標準曲線算出；v－樣品稀釋后的體積；

n－稀釋的倍數；m－樣品的質量。

1.2.3葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸定量分析

1.2.3.1綠原酸標準曲線的制作

精密稱取綠原酸對照品5.12mg置于10ml棕色容量瓶中，加入50％甲醇溶液定容至刻度，制成濃度為512μg/ml的綠原酸對照品溶液(10℃以下保存)。分別取綠原酸標準品溶液0.039ml、0.078ml、0.156ml、0.313ml、0.625ml、1.25ml、2.5m、l5ml于10ml棕色容量瓶中，加50％甲醇定容，配成濃度為2、4、8、16、32、64、128、256μg/ml的綠原酸標準品溶液，50％甲醇為空白對照。327nm波長下測不同濃度標準品溶液的吸光度值，以綠原酸濃度(x)對吸光度(y)進行線性回歸分析，繪制綠原酸標準曲線。

1.2.3.2葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸定量分析

上述1.2.1中提取液稀釋后，精密稱取葵花盤正丁醇相提取物樣品5mg置于10ml棕色容量瓶中，加入50％甲醇溶液定容至刻度，制成濃度為500μg/ml的樣品溶液。在327nm處測其吸光度。提取率計算公式為：

w＝c×v×n/m

其中：c－樣品的濃度，根據標準曲線算出；v－樣品稀釋后的體積；

n－稀釋的倍數；m－樣品的質量。

2.結果

2.1蘆丁濃度在0～640ug/ml范圍內與吸光度線性良好。標準曲線為y＝0.0013x+0.0429。見表1和圖1。

表1蘆丁標準曲線

2.2根據2.1中標準曲線，代入得葵花盤正丁醇相提取物中的總黃酮含量＝17.1±0.2wt％。

2.3綠原酸濃度在0～128ug/ml范圍內與吸光度線性良好。標準曲線為y＝0.0177x+0.1827。見表2和圖2。

表2綠原酸標準曲線

2.4根據2.3中標準曲線，代入得葵花盤正丁醇相提取物中的綠原酸含量＝6.7±0.1wt％。

實施例二葵花盤正丁醇相提取物的舒張血管作用研究

1.材料與方法

1.1材料

乙酰膽堿(acetylcholine，ach)、苯腎上腺素(phenylephrine，pe)、硝普鈉(sodiumnitroprusside，snp)等均購于sigma公司，nacl等無機試劑為國產分析純。kreb-henseleit(k-h)液(mmol·l-1)：nacl118,kcl4.7,kh2po41.2,mgcl21.2,nahco325,cacl22.5,glucose11,ph＝7.4)。動物：200±20g，大鼠30只，購買于上海斯萊克實驗動物有限公司，飼養于上海中醫藥大學動物實驗中心。分液漏斗、解剖板、大頭釘、解剖剪、鑷子、棉球(脫脂棉)、培養皿等。powerlab八通道多功能生理記錄儀(adinstruments公司，澳大利亞)。

1.2方法

1.2.1胸主動脈環的制備

大鼠麻醉處死，迅速取出胸主動脈置于4℃k-h液中，剝除周圍結締組織后制成2-3mm的血管環。將血管環懸掛于4mlk-h液的浴槽內，37℃恒溫，并持續通入95％o2+5％co2的混合氣體。

每個血管環給予2.0g拉力，每15min更換k-h液一次，平衡60min。以60mmol·l^-1的kcl預收縮兩次，以誘發最大收縮度,用k-h液洗脫拉力穩定后，加入10^-6mol·l^-1的pe收縮，待拉力達坪值后，加入10^-5mol/lach，若血管舒張達80％以上，可認為內皮完整，可用于下一步實驗。

1.2.2葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈內皮依賴舒張的作用

制成內皮完整的大鼠胸主動脈血管環，等劑量的pe收縮，加入不同濃度葵花盤正丁醇相提取物(按實施例一制備)，觀察不同濃度梯度組對胸主動脈內皮依賴舒張的作用。根據以上實驗步驟進行重復實驗3次以上。

1.2.3葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈內皮依賴舒張的機制

制成內皮完整的大鼠胸主動脈血管環，分別用l-name(0.1mmol·l^-1)、吲哚美辛(0.1mmol·l^-1)、tea(5mmol·l^-1)預處理20min，以pe預收縮，加入葵花盤正丁醇相提取物(按實施例一制備)觀察其作用，對照組加入相同劑量k-h液。

2結果

2.1本發明的葵花盤正丁醇相提取物對大鼠胸主動脈具有舒張作用，并且其舒張血管作用呈現濃度依賴性，作用效果優于其含有的蘆丁和綠原酸(見表3和圖3)。

表3不同濃度葵花盤正丁醇相提取物對血管舒張的作用

與0.1mg/μl葵花盤正丁醇相比較，^**p<0.01

2.2葵花盤正丁醇提取相對大鼠胸主動脈的舒張作用主要通過no途徑(見表4和圖4)。

表4不同濃度葵花盤正丁醇相提取物對血管舒張的作用

與0.1mg/μl葵花盤正丁醇相比較，^**p<0.01

本發明所涉及的多個方面已做如上闡述。然而，應理解的是，在不偏離本發明精神之前提下，本領域專業人員可對其進行等同改變和修飾，所述改變和修飾同樣落入本申請所附權利要求的覆蓋范圍。