本發明屬于藥物制劑技術領域，涉及一種磷酸特地唑胺脂質體的制備方法和應用。

背景技術：

如今，抗生素的濫用導致多藥耐藥性的現象愈演愈烈，為了應對此種現象繼續惡化，新抗生素的研究刻不容緩。作為新型唑烷酮類抗菌藥，磷酸特地唑胺于2013年獲得美國fda優先評審資格，并于2014年6月20日批準上市，常被用于耐甲氧西林菌株(mrsa)和甲氧西林敏感菌株（mssa）等引起的急性、細菌性皮膚和皮膚結構感染(absssi)。上市的商品名為sivextro^tm，有靜脈注射用凍干粉針劑和片劑兩種劑型，規格均為200mg。注射用粉針劑在注射后1h就可達到血藥濃度峰值，而口服片劑需要3h，絕對生物利用度約91%。

脂質體是一種由類脂質雙分子層形成的微形泡囊，又稱為類脂小球或液晶微囊，根據藥物的溶解特性，油溶性藥物被包封于磷脂雙分子層中，而水溶性藥物則存在于中央的空腔中。脂質體由于具有被動靶向性、緩釋性、細胞親和性與組織相容性、降低藥物的毒性、提高藥物的穩定性等特點，因而在醫藥領域廣泛應用。

制備脂質體的方法多種多樣，分為主動載藥法和被動載藥法兩個大類。主動載藥法又稱化學梯度法，首先將一定濃度的離子溶液包封于空白脂質體中，透析除去外相離子，形成化學梯度，再加入藥物溶液孵育，利用化學梯度將藥物遞送到脂質體中。被動載藥法包括：（1）薄膜分散法：將脂質在二氯甲烷、氯仿、甲醇及乙醇等有機溶劑溶解，再利用旋轉蒸發儀使圓底瓶內的溶劑揮發，在瓶壁上形成均勻的脂質膜，在臨界溫度以上的溫度條件下，將欲包覆藥物的水溶液和脂質膜混合，借助手搖或超聲等機械力，將瓶壁上的脂質膜振搖下來，在水溶液中就會形成多層脂質體（mlv）。（2）反復凍融法：利用脂質體破裂后會再自行密合的特性，以多次冷凍、再解凍的方式，造成脂質體的破裂及重組再密合，最后可形成大小較均勻的單層脂質體。（3）逆相蒸發法：以有機溶劑溶解高濃度的脂質，與藥物水溶液超聲或剪切成初乳，再以旋轉蒸發儀使有機溶劑揮發，形成包封率較高的脂質體。這種方法對于水溶性藥物的包封率相對較高。（4）前體脂質體法：載體顆粒與脂質溶液的混懸液經旋轉蒸發儀使有機溶劑揮發，脂質均勻吸附于載體顆粒上，形成脂質體前體。再將藥物溶液，加入到脂質體前體中，攪拌，超聲，形成大小均一的脂質體。

由于磷酸特地唑胺在室溫下不穩定，易水解，因此貯藏和運輸極為不便，也增加了產品貯藏成本和運輸成本。本發明，提供了一種醋酸鈣梯度法制備磷酸特地唑胺脂質體，不僅能夠提高藥物的穩定性，細胞親和性，還可以實現連續化生產，更好地適應工業化需求，因此在醫藥領域有廣泛應用的前景。

技術實現要素：

本發明提供了一種磷酸特地唑胺脂質體的制備方法及其應用。制備所述的磷酸特地唑胺脂質體的方法，步驟如下：按比例稱取大豆卵磷脂、膽固醇，加入2ml無水乙醇于50～60℃旋轉蒸發（真空度0.02～0.07mpa）成干膜，加5ml醋酸鈣水溶液（120mmol/l），水化3～7min分散均勻（必要時超聲分散），制成空白脂質體。將制備好的空白脂質體置于透析袋（8000～14000da）中，用生理鹽水透析三次，每次持續1h。透析后的空白脂質體加入磷酸特地唑胺溶液（為增加水溶性，與naoh反應成二鈉鹽），45～55℃水浴孵育10～20min后即得，其理化性質如圖1～4。

本發明的一種磷酸特地唑胺脂質體的優勢有：1.該磷酸特地唑胺脂質體具有良好的細胞親和性與組織相容性。無溶血現象發生，注射安全性高，如圖5～6。同時提高藥物的穩定性；2.該磷酸特地唑胺脂質體具有緩釋效果，如圖7。同時它還具有一定的靶向性，降低了其對機體的耐藥性。

該磷酸特地唑胺脂質體對耐甲氧西林菌株（mrsa）和甲氧西林敏感菌株(mssa)等引起的感染有效。

采用醋酸鈣梯度法制備磷酸特地唑胺脂質體，包封率高，不僅可以實現連續化生產，還能更好的適應工業化需求，因此在醫藥領域有廣泛應用的前景。

附圖說明

圖1磷酸特地唑胺脂質體照片（a新鮮制備脂質體，b凍干粉，c凍干復溶后脂質體）；

圖2磷酸特地唑胺脂質體透射電鏡照片；

圖3磷酸特地唑胺脂質體粒徑分布圖；

圖4磷酸特地唑胺脂質體電位分布圖；

圖5磷酸特地唑胺脂質體溶血試驗結果（1.陰性對照，2～6.不同濃度的tdza-lips組，7.陽性對照）；

圖6磷酸特地唑胺脂質體溶血率結果；

圖7磷酸特地唑胺脂質體體外釋放曲線。

具體實施方式

實施例1按質量比6：1稱取大豆卵磷脂、膽固醇，加入2ml無水乙醇于55℃旋轉蒸發（真空度0.05mpa）成干膜，加5ml醋酸鈣水溶液（120mmol/l），水化5min分散均勻（必要時超聲分散），制成空白脂質體。將制備好的空白脂質體置于透析袋（8000～14000da）中，用生理鹽水透析三次，每次持續1h。透析后的空白脂質體加入磷酸特地唑胺溶液（為增加水溶性，與naoh反應成二鈉鹽），50℃水浴孵育15min后即得。

實施例2按質量比6：1稱取蛋黃卵磷脂、膽固醇，加入2ml無水乙醇于55℃旋轉蒸發（真空度0.05mpa）成干膜，加5ml醋酸鈣水溶液（120mmol/l），水化5min分散均勻（必要時超聲分散），制成空白脂質體。將制備好的空白脂質體置于透析袋（8000～14000da）中，用生理鹽水透析三次，每次持續1h。透析后的空白脂質體加入磷酸特地唑胺溶液（為增加水溶性，與naoh反應成二鈉鹽），50℃水浴孵育15min后即得。

實施例3按質量比6：1稱取大豆卵磷脂、膽固醇，加入2ml二氯甲烷于42℃旋轉蒸發（真空度0.04mpa）成干膜，加5ml醋酸鈣水溶液（120mmol/l），水化5min分散均勻（必要時超聲分散），制成空白脂質體。將制備好的空白脂質體置于透析袋（8000-14000da）中，用生理鹽水透析三次，每次持續1h。透析后的空白脂質體加入磷酸特地唑胺溶液（為增加水溶性，與naoh反應成二鈉鹽），50℃水浴孵育15min后即得。

實施例4將含有3%甘露糖的脂質體混懸液過0.22μm濾膜除菌，放入超低溫冰箱-80℃預凍24h，然后將得到的樣品轉移到冷凍干燥機中凍干-50℃，48h，制得凍干粉針劑。

實施例5將含有3%蔗糖的脂質體混懸液過0.22μm濾膜除菌，放入超低溫冰箱-80℃預凍24h，然后將得到的樣品轉移到冷凍干燥機中凍干-50℃，48h，制得凍干粉針劑。

技術特征：

技術總結
本發明提供了一種磷酸特地唑胺脂質體的制備方法及其應用，其特征是在于以大豆卵磷脂、膽固醇為膜材，采用醋酸鈣梯度法，將磷酸特地唑胺包封制備成磷酸特地唑胺脂質體。平均粒徑183.7nm，其包封率可達70%～75%。該脂質體具有被動靶向性、緩釋性、細胞親和性與組織相容性，無毒，同時提高藥物的穩定性。醋酸鈣梯度法制備磷酸特地唑胺脂質體不僅可以實現連續化生產，還能更好的適應工業化需求，因此在醫藥領域有廣泛應用的前景。

技術研發人員：黃桂華;楊振磊;邵愛霞
受保護的技術使用者：濟南維瑞醫藥科技開發有限公司
技術研發日：2017.08.04
技術公布日：2017.10.20