本發明屬于生物材料及生物醫藥，具體涉及基于銀屑病治療的一種含硒的可溶性復合微針及其制備方法和應用。

背景技術：

1、銀屑病是一種慢性炎癥性皮膚病，其治療方法在近年來有了顯著的進步。目前的治療方法主要包括局部療法、光療、全身免疫調節劑和生物制劑。這些方法旨在緩解癥狀并提高患者的生活質量。然而，仍存在一些挑戰，如不良反應、治療耐藥性、高成本以及個體反應的差異。近年來，隨著對銀屑病發病機制的深入研究，新藥研發取得了快速發展。傳統治療方法包括藥物治療、光療和生物制劑等，雖然能在一定程度上緩解癥狀，但存在療效有限、副作用大、復發率高等問題。

2、微針治療則提供了一種新的治療思路，它通過使用細小的針具在皮膚表面制造微小的通道，以促進藥物滲透和皮膚修復。微針治療作為一種創新的物理治療方法，在銀屑病的治療領域展現出獨特的優勢和應用前景。專利cn202110836016.6利用人角質形成細胞膜包覆的ph響應性聚合物膠束，構建了一種表皮主動靶向的載藥系統，并通過微針技術輔助透皮遞送抗炎藥物紫草素（shikonin），延長了作用時間。專利cn202010809588.0公開了一種有效實現銀屑病治療藥物的程序化釋放的可溶性微針制備，將緩釋性粒子留在皮內保持長時間有效的藥物治療效果。但目前公開的專利中微針僅作為藥物遞送系統，微針本身缺少功能化。

3、銀屑病患者體內的氧化應激水平較高。氧化應激是指體內自由基產生過多或抗氧化能力下降，導致細胞和組織受到損害。銀屑病患者的皮膚和血液中自由基水平升高，這些自由基可以損傷皮膚細胞，加劇炎癥反應。硒作為一種必需微量元素，在治療銀屑病的過程中發揮著重要作用，其原理主要涉及抗氧化、免疫調節和細胞保護三個方面。硒元素能夠增強機體內源性抗氧化系統的功能，通過提高谷胱甘肽過氧化物酶等抗氧化酶的活性，有效清除自由基和過氧化物，減少氧化應激對皮膚的損害。硒的免疫調節作用體現在它能夠平衡th1/th2細胞亞群的失衡，抑制th1細胞過度活化所引發的炎癥因子如ifn-γ的釋放，同時促進抗炎細胞因子如il-4的產生，從而減輕銀屑病患者的皮膚炎癥。此外，硒還能直接作用于皮膚細胞，保護細胞膜免受氧化損傷，維持細胞結構和功能的完整性，有助于抑制表皮細胞的異常增殖和分化，改善銀屑病患者的皮損癥狀。目前尚未見有含硒的微針應用于銀屑病的治療。

技術實現思路

1、有鑒于此，本發明的目的是提供一種含硒的可溶性復合微針及其制備方法和其在銀屑病治療中的應用。本發明提供的含硒的可溶性復合微針，可發揮抗氧化功效，有效清除活性氧，調節免疫微環境，減少炎癥，控制銀屑病的慢性炎癥狀態，同時可攜載藥物、納米制劑，對銀屑病具有良好的治療效果。同時為提高藥物的緩控釋效果，本發明還提供了四面體框架核酸（tfna）作為藥物遞送載體，達到藥物的緩控釋的目的，實現藥物的高效透皮傳遞。

2、本發明的一種含硒的可溶性復合微針，所述微針成型基質為硒化透明質酸，裝載載藥的四面體框架核酸，基底部分為生物相容性良好的聚乙烯醇。

3、本發明還提供上述一種含硒的可溶性復合微針的制備方法，包括以下步驟：

4、步驟1、硒化透明質酸的制備：

5、向透明質酸溶液中加入1-[3-二甲氨基丙基]-3-乙基碳二亞胺（edc）和n-羥基琥珀酰亞胺（nhs），攪拌0.5h～24h活化。向溶液中繼續加入含硒的小分子化合物，在惰性氣體保護條件下暗反應8h～48h。反應完成后采用透析袋（mw?3000）蒸餾水進行透析2～3次，通過-60℃凍干40h～48h得到硒化透明質酸。

6、步驟2、四面體框架核酸制備及藥物負載：

7、（1）序列設計：設計四條單鏈dna，每條鏈包含三個互補區域和一個非互補區域。互補區域的長度為20-30個堿基，確保穩定的雙鏈形成，非互補區域的長度為5-10個堿基，形成四面體的頂點；

8、（2）退火組裝：將單鏈dna溶解在含有10mm?tris-hcl和50mm?mgcl2的緩沖液中，然后將混合物在80℃～105℃下維持5min～15min，緩慢降溫至2℃～8℃維持10min～60min，使dna自組裝形成四面體框架結構，產物在4℃下保存；

9、（3）藥物負載：向制得的四面體框架核酸溶液中緩慢滴加疏水藥物的dmso溶液，避光攪拌混勻1h～24h，超濾管（10kda～50kda）離心除去未負載藥物，得到載藥四面體框架核酸。

10、步驟3、含硒及載藥微針貼片的制備：

11、（1）在超凈工作臺中，稱取步驟1中得到的硒化透明質酸于無菌容器中，混入步驟2中得到的載藥四面體框架核酸，加入超純水超聲溶解配成溶液，作為針層凝膠溶液；

12、（2）稱取聚乙烯醇（pva）溶于純水中制成的聚乙烯醇溶液作為背襯層凝膠溶液；

13、（3）將針層凝膠溶液、背襯層凝膠溶液均置于離心進行脫氣泡處理；

14、（4）將脫氣泡處理后的針層凝膠溶液使用注射器添加到微針模具微針孔洞中，置于真空干燥箱中抽真空，將模具離心，刮去表面多余膠體；

15、（5）重新添加針層凝膠溶液，重復步驟（4）-（5）直至每個針孔填滿，而后放入真空干燥箱或恒溫恒濕箱中進行干燥；

16、（6）將背襯層凝膠溶液添加到微針模具凹槽中作為微針的背襯層，然后置于37℃干燥，脫模即得微針貼片。

17、上述一種含硒的可溶性復合微針的制備方法，其中：

18、進一步地，所述步驟1中，所述透明質酸溶液的溶劑選自水、dmso、dmf或其任意比例的混合液。

19、進一步地，所述步驟1中，所述含硒的小分子化合物選自硒代胱胺、se-（甲基）硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代半胱氨酸及其相應的鹽酸鹽。透明質酸與含硒的小分子化合物摩爾比為(0.1～5):1。透明質酸選自分子量為3kda-10kda、10kda-100kda、200kda-400kda、1100kda-1300kda中一種。

20、進一步地，所述步驟2（1）中，四條互補的單鏈dna序列（5′→3′）如seq?id?no.1～4所示。

21、進一步地，所述步驟2（2）中，四條單鏈dna的摩爾比為1:1:1:1。所述緩沖液的ph值為7.5-8.5，最優為8.0。混合物加熱溫度為80℃～105℃，最優為95℃，加熱時間為5min～15min，最優為10min。緩慢降溫至2℃～8℃，最優為4℃，降溫速率為1℃/min～3℃/min，維持時間為10min～60min，最優為30min。

22、進一步地，所述步驟2（3）中，所述疏水藥物主要是指含有芳香環的能夠治療銀屑病的藥物，包括但不限于甲氨蝶呤，托法替布，阿普斯特，他克莫司，他扎羅汀，雷帕霉素，紫草素。

23、進一步地，所述步驟2（3）中，藥物與四面體框架核酸的摩爾比為(100～1000):1。避光攪拌溫度為4℃～25℃，最優為4℃，攪拌時間為1h～24h，最優為6h。超濾管截斷分子量為10kda～50kda，依據藥物分子量選取適合大小。

24、進一步地，所述步驟3（1）中，所述硒化透明質酸的濃度為5%～50%?(w/v)。載藥四面體框架核酸中的藥物與硒化透明質酸的比例為(1～10):100。

25、進一步地，所述步驟3（2）中，所述聚乙烯醇濃度為5%～30%?(w/v)。

26、進一步地，所述步驟3（3）中，離心脫氣的轉速為2000rpm～5000rpm，最優為3000rpm，脫氣時間為2min～3min。

27、進一步地，所述步驟3（4）中，真空壓力為0.09mpa～0.1mpa，放置時間為2min～3min。離心調節轉速為2000rpm～5000pm，最優為4000rpm，離心時間為2min～3min。

28、進一步地，所述步驟3（5）中，干燥時間為6h～24h。

29、進一步地，所述步驟3（6）中，干燥可在真空干燥箱或在恒溫恒濕箱中進行，干燥時間為24h～72h。

30、本發明公開的一種含硒的可溶性復合微針在制備銀屑病的治療給藥貼中的應用。

31、本發明含硒的可溶性復合微針亦可應用于制備治療其他氧化應激的皮膚疾病，如潰瘍、感染傷口愈合藥物。

32、本發明的關鍵點：

33、本發明通過特定的化學方法合成了硒化透明質酸，并以硒化透明質酸為基底制備微針。與傳統的微針材料相比，本發明制備的微針除具備遞藥功能外，還具有顯著的抗氧化能力，可有效清除活性氧，改善免疫環境。同時，利用四面體框架核酸的高滲透性、良好的生物相容性、可編輯性、高穩定性及易制備性等優勢，提高了微針的緩控釋能力，實現藥物的高效透皮傳遞，減少了傳統給藥方式可能帶來的疼痛和不適。

34、本發明的有益效果：

35、本發明通過硒化透明質酸和四面體框架核酸的結合，提高了藥物的負載能力和遞送效率，使得藥物能夠更有效地到達目標部位。硒化透明質酸的抗氧化和免疫調節作用有助于緩解銀屑病的炎癥反應，提高治療效果。可溶性微針技術減少了傳統給藥方式可能帶來的疼痛和不適，提高了患者的依從性。無痛的經皮給藥系統提高了患者的舒適度，使得治療過程更加人性化。四面體框架核酸的高滲透性、良好的生物相容性、可編輯性、高穩定性及易制備性等優勢提高了藥物的負載能力和遞送效率。

36、本發明技術方案結合了多種先進技術，在銀屑病治療領域提供了一種新的、有效的藥物遞送系統，有望改善現有的治療方法，提高治療效果，減少副作用，提高患者的生活質量。