本發明涉及生物醫學領域，具體而言，涉及cebpd和fos作為zfp36l2轉錄調控因子在放射性損傷治療藥物靶點開發中的應用。

背景技術：

1、放射治療是利用放射線治療腫瘤的一種局部治療方法。然而，放射治療在殺死腫瘤細胞的同時，也不可避免地對正常組織造成損害，破壞機體的免疫功能，產生一系列的放射性損傷。隨著放射劑量的提高或放射治療的持續進行，放射性損傷也逐漸加重。如果不及時進行干預治療，不僅會降低治療效果，還可能加重患者病情，嚴重影響患者的生活質量。

2、zfp36l2（zincfingerprotein36,c3htype-like2）屬于zfp36蛋白家族，承擔著調節rna后轉錄過程的關鍵任務。該蛋白通過其特有的鋅指結構精準地維護基因表達的穩定性。在發明人此前的研究中（詳見申請號為cn202411146999.0的中國專利）發現，zfp36l2過表達在減緩輻射/放射性損傷中具有重要作用。通過調整巨噬細胞中zfp36l2的表達水平，可以抵抗輻射引起的線粒體功能障礙。體外實驗驗證表明，zfp36l2過表達的巨噬細胞上清液顯著改善了huvec在輻照條件下的劃痕愈合能力。此外，zfp36l2過表達的巨噬細胞能夠顯著減輕接受移植的小鼠在輻射環境下腹腔組織的損傷。因此，研究與zfp36l2直接作用的轉錄因子和上游通路，不僅有助于揭示其在輻射應激中的精準調控機制，更能為放射性損傷的靶向干預提供關鍵理論依據。

3、cebpd（ccaat/enhancer-bindingproteindelta）屬于ccaat增強子結合蛋白（c/ebp）家族，是一種轉錄因子。cebpd在免疫和炎癥反應相關基因的調節中起著重要作用。部分文獻報道其在輻射誘導的腸道損傷中通過調控炎癥因子表達發揮作用。此外，cebpd在低氧條件下對膠質母細胞瘤（gbm）的侵襲性有重要影響，它通過激活egfr/pi3k信號通路促進腫瘤的發生和發展。fos（fbjosteosarcomaoncogene）作為ap-1轉錄因子復合物的成員，有研究顯示其通過電離輻射可激活fos/jun通路，促進細胞存活。但cebpd和fos是否對zfp36l2基因的表達起調控作用目前還不清楚。

技術實現思路

1、本發明的目的在于提供cebpd和fos作為zfp36l2轉錄調控因子在放射性損傷治療藥物靶點開發中的應用。

2、發明人通過單細胞測序結合scenic調控網絡分析發現，cebpd和fos是調控zfp36l2的核心轉錄因子，genie3算法顯示二者在放療后單核細胞中對zfp36l2的調控貢獻度居前兩位。regulon特異性評分（rss）及活性熱圖表明，cebpd和/或fos在經典單核細胞中呈現高特異性調控活性和開放狀態，提示其通過驅動zfp36l2轉錄參與放射性損傷修復的分子機制，并通過雙熒光素酶報告驗證了cebpd和fos可與zfp36l2啟動子特定位點結合并發揮調控作用。基于此，發明人完成了以下發明。

3、本發明的第一方面在于提供cebpd和/或fos作為zfp36l2轉錄調控因子在放射性損傷治療藥物靶點開發中的應用；cebpd和/或fos通過結合zfp36l2啟動子區域如seqidno:1和/或seqidno:2所示核苷酸序列的結合位點，可以正向調控zfp36l2基因表達；發明人前期研究（cn202411146999.0）已證實，zfp36l2過表達具有減緩輻射誘導下的細胞損傷的作用，因而本領域技術人員能夠理解，對zfp36l2表達具有正向調控作用的cebpd和/或fos，有助于增強其下游修復功能，cebpd和/或fos作為調控zfp36l2的轉錄因子，有助于為放射性損傷治療藥物的靶點開發提供了新的路徑。

4、在該應用中，cebpd和/或fos是通過與zfp36l2上游3879bp-3856bp和/或2854bp-2832bp的特定結合位點進行結合，發揮對zfp36l2的調控作用，所述特定結合位點的核苷酸序列如seqidno.1和/或seqidno.2所示，或者具有與seqidno.1和/或seqidno.2至少90％同一性的核苷酸序列。

5、在該應用中，cebpd和/或fos通過與zfp36l2上游如seqidno.3和/或seqidno.4所示的核苷酸序列結合，發揮對zfp36l2的調控作用；所述seqidno.3和seqidno.4所示的核苷酸序列分別是seqidno.1和seqidno.2所示核苷酸序列的核心序列，或者是具有與seqidno.1和/或seqidno.2至少90％同一性的核苷酸序列的核心序列。

6、在該應用中，所述藥物靶點開發方法，可以是用于篩選或驗證能夠調控cebpd和/或fos與zfp36l2啟動子結合活性的化合物，其可能通過包括或至少部分以下步驟實現：

7、(a)構建含seqidno:1或seqidno:2的報告基因載體，例如以zfp36l2啟動子區含seqidno:1和/或seqidno:2的核心調控序列為模板，構建報告基因載體；將構建好的載體轉染至合適的細胞系中，例如thp-1細胞等，建立穩定表達報告基因的細胞模型，用于后續的篩選實驗；

8、(b)檢測候選化合物對cebpd和/或fos與zfp36l2啟動子結合活性的影響，例如將候選化合物加入到上述轉染好的細胞中進行孵育處理，其可以采用熒光素酶報告基因檢測法，反映cebpd和/或fos與zfp36l2啟動子結合活性的改變，或者是利用電泳遷移率變動分析技術，判斷候選化合物是否影響了cebpd和/或fos與含seqidno:1或seqidno:2的zfp36l2啟動子片段的結合，或者利用染色質免疫沉淀技術，評估候選化合物對結合活性的影響；

9、(c)篩選出通過調控cebpd和/或fos活性改變zfp36l2轉錄水平的化合物，例如對于在上述檢測中顯示出能顯著影響cebpd/fos與zfp36l2啟動子結合活性的候選化合物，采用例如qpcr、westernblot進一步驗證化合物對zfp36l2轉錄調控的效果，以確定該化合物在放射性損傷治療中的潛在應用影響。

10、本發明的第二方面在于提供cebpd和/或fos在制備調控zfp36l2啟動子活性和/或調控zfp36l2表達的產品中的應用；所述調控為正向調控，所述產品通過過表達cebpd和/或fos蛋白、過表達cebpd和/或fos基因，或者激活內源性cebpd和/或fos活性等方式，調控zfp36l2轉錄；例如，所述產品可以包括表達cebpd和/或fos的蛋白，或者編碼cebpd和/或fos的核酸，或者活化zfp36l2基因轉錄的藥物，以及藥學上可接受的輔料試劑如緩沖劑、穩定劑等。

11、本發明的第三方面在于提供促進cebpd和/或fos表達的物質制備調控zfp36l2啟動子活性和/或調控zfp36l2表達的產品中的應用，所述調控為正向調控；所述物質可以包括激活cebpd和/或fos活性的小分子化合物，或者編碼cebpd和/或fos的mrna或dna核酸序列，或者過表達cebpd和/或fos的細胞以及增強cebpd和/或fos活性的功能性抗體中的至少一種。

12、本發明的第四方面在于提供一種基因編輯工具，包括靶向zfp36l2啟動子上如seqidno:1和/或seqidno:2和/或seqidno:3和/或seqidno:4所示的核苷酸序列，或至少具有與seqidno.1和/或seqidno.2至少90％同一性的核苷酸序列；用于調控cebpd和/或fos的結合活性，通過改變染色質開放性（如去甲基化）或募集輔助因子（如共激活蛋白）增強cebpd和/或fos與zfp36l2的結合。

13、本發明的顯著優點在于：本發明首次通過經典單核細胞揭示了轉錄因子cebpd和fos對zfp36l2表達的調控作用。本發明采用單細胞分析篩選出cebpd和fos為zfp36l2的潛在調控因子，通過雙熒光素酶報告驗證了cebpd和fos能夠與zfp36l2的啟動子區域特定位點結合；發明人前期研究（cn202411146999.0）已證實，zfp36l2過表達具有減緩輻射誘導下的細胞損傷的作用，因而揭示cebpd和fos能夠與zfp36l2的啟動子區域特定位點結合，有望為放射性損傷治療藥物的開發提供全新的分子靶點。