專利名稱：美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產品研究開發(fā)技術領域。本發(fā)明涉及美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝。
背景技術：
美漢草為唇形科(Labiatae)龍頭草屬(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq.)Makino的干燥地上部分，別名蕁麻葉龍頭草，芝麻花(遼寧)、美漢花， 異名水升麻(四川)，為多年生草本植物，分布于通化、渾江、柳河、集安、撫松、靖宇、蛟河、 舒蘭、安圖、敦化、長白朝鮮族自治區(qū)、通化縣等地，朝鮮、日本也有分布。美漢草味辛、苦、性微寒，全草入藥，可作為民間藥，具有清熱解表，利水消腫等功效。用于感冒發(fā)熱，瀉痢腹痛， 肝炎，膽囊炎，小便不利，蛇咬傷等癥。在民間作美漢草藥用，全草可入藥，作為寒藥，具有發(fā)表清熱，利濕解毒等功效，其天然資源極為豐富，且蘊含量大。有關美漢草化學成分的研究資料較少。目前，從植物美漢草的花瓣中鑒定出含有花青素。從植物美漢草中分離得到迷迭香酸紫草酸B、精脒生物堿的糖苷類。

發(fā)明內容
1、美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg_23. Okg的50%乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟O)將步驟(1)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物^g ；步驟(3)將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28g 100 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4)采用不同梯度氯仿-甲醇=50 1 氯仿-甲醇=1 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=7 1處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物IOmg ；步驟(6)結合光譜分析鑒定其結構為5，3' - 二羥基-4'-甲氧基-黃酮-7-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。根據本發(fā)明，本發(fā)明中的“ ％，，是重量百分比。
具體實施例方式本發(fā)明所述的美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。實施例1 1、美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg的50 %乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min，超聲溫度為30°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟O)將步驟(1)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物^g ；步驟(3)將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28g 100 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4)采用不同梯度氯仿-甲醇=50 1 氯仿-甲醇=1 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=7 1處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物IOmg ；步驟(6)結合光譜分析鑒定其結構為5，3' - 二羥基-4'-甲氧基-黃酮-7-0-a-L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。實施例2:1、美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入23. Okg的50 %乙醇浸泡過夜，然后超聲提取35min，超聲溫度為32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟O)將步驟(1)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物^g ；步驟(3)將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28g 100 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4)采用不同梯度氯仿-甲醇=50 1 氯仿-甲醇=1 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=7 1處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物IOmg ；步驟(6)結合光譜分析鑒定其結構為5，3' - 二羥基-4'-甲氧基-黃酮-7-0-a-L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷?；衔锏慕Y構鑒定白色粉末，易溶于DMS0，難溶于水、乙醇及丙酮、氯仿、乙醚、苯等，部分溶于甲醇。 鹽酸-鎂粉反應呈陽性，Molish反應呈陽性，有黃酮類特征顯色反應，可為黃酮類化合物。 薄層層板將樣品溶于DMS0，硅膠板為固定相，以氯仿甲醇甲酸=5 1 1為流動相， 展開后，在可見光與紫外光下觀察出現熒光現象，10%濃硫酸乙醇溶液顯色后，展開的薄層板上顯示為單一黃色清晰斑點。酸水解后，檢出有葡萄糖(& = 0. 16)、鼠李糖(& = 0. 40)，高碘酸鹽氧化反應結果表明這兩種糖均為吡喃型糖。ESI-MS顯示分子量為607，分子式為 C28H31O15O 1H-Wr^oomHzADCI3)譜中，12. 92 (s)和 9. 43 (s)分別是 5-0H 禾口 3' -OH 酚羥基特別信號。在A環(huán)上，H-6和H-8分別以雙重峰出現在6.8-6.4ppm之間，其化學位移值分別為 6. 82(lH，d，J = 2. 0Hz, H-8) ,6. 46(lH，d，J = 9. 6Hz，H_6)。在 B 環(huán)上，3. 87 為 4' -C 上的 OMe 的氫質子信號。7. 45(lH，d d，J = 8. 4Hz)、7. 14(lH，d，J = 8. 5Hz)、7. 44 (1H，d，J =2. 5Hz)化學位移值分別為 H-6'，H-5'，H_2。5. 08 (1H，d，J = 7. 2Hz，H_l)和 4. 54 (1H， br s)分別是葡萄糖和鼠李糖的端基氫質子的信號，又因為其偶合常數7. 2Hz大于4. OHz, 所以說明為β-D-葡萄糖型。1.08(3H，d，J = 6Hz)是鼠李糖末端基上的C-CH3化學信號。 13C-NMR(150MHz, CDCl3)譜中有15個芳香碳原子，其中103. 80 (s)為C-3化學位移信號，說明糖部不可能結合在 C-3 位置。164. 15(s)、181.90(s)、99. 87(s)、94. 75(s)為 A 環(huán)上 C_7、
04、06、(-8的化學位移信號，151.27(8)、146.74(8)為B環(huán)上C_4'和C-3‘的化學位移信號，其母核結構與文獻相吻合，這表明糖部連接在C-7位置上。100. 49 (d) ,99. 55 (d) 分別是鼠李糖和葡萄糖的端基碳原子的信號；17. 76(t)、66.01(t)分別是鼠李糖和葡萄糖的6位碳原子的信號。波譜中100. 49為鼠李糖端基碳原子的化學信號并向低場位移了
5.49ppm，66. 01為葡萄糖6位碳原子的化學信號，這表明雙糖連接方式為鼠李糖(1 — 6)葡萄糖。β -D-葡萄糖和α -L-鼠李糖的1H-NMR和13C-NMR波譜中化學位移信號與文獻對照基本一致，數據歸屬如表1。 表1化合物1的NMR數據歸屬
權利要求
1.美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程 步驟(1)稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg-23. Okg的50%乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液； 步驟O):將步驟(1)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物^g ；步驟(3)將步驟( 中正丁醇提取物觀8溶于IOOml無水乙醇中，拌以^g 100 200 目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟⑷采用不同梯度氯仿-甲醇=50 1 氯仿-甲醇=1 3對步驟(3)中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5)在分離到洗脫液氯仿-甲醇=7 1處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物IOmg ；步驟(6)結合光譜分析鑒定其結構為5，3' - 二羥基-4'-甲氧基-黃酮-7-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。
全文摘要
本發(fā)明所屬醫(yī)藥產品研究開發(fā)技術領域。本發(fā)明涉及美漢草中一種黃酮苷的提取分離工藝。稱取美漢草干燥粗粉加入50％乙醇浸泡過夜，然后超聲提取，合并提取液并減壓濃縮，將濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取，由此得到正丁醇提取物；選用硅膠柱層析，采用不同梯度氯仿-甲醇對正丁醇提取物進行洗脫，分離得到白色沉淀，再經甲醇反復結晶得到單體化合物；結合光譜分析鑒定其結構為5，3′-二羥基-4′-甲氧基-黃酮-7-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡哺葡萄糖苷。本發(fā)明的目的是為滿足生產和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文檔編號C07H17/07GK102558260SQ201210009900
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月1日 優(yōu)先權日2012年1月1日
發(fā)明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 李小葉, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校