專利名稱：美漢草中乙基-α-D-葡萄糖苷的提取分離工藝的制作方法
技術領域：
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及美漢草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分離工藝。
背景技術：
美漢草為唇形科(Labiatae)龍頭草屬(Meehania)植物芝麻花Meehania urticifolia(Miq. )Makino的干燥地上部分,別名蕁麻葉龍頭草,芝麻花(遼寧)、美漢花， 異名水升麻(四川)，為多年生草本植物，分布于通化、渾江、柳河、集安、撫松、靖宇、蚊河、 舒蘭、安圖、敦化、長白朝鮮族自治區、通化縣等地，朝鮮、日本也有分布。美漢草味辛、苦、性微寒，全草入藥，可作為民間藥，具有清熱解表，利水消腫等功效。用于感冒發熱，瀉痢腹痛， 肝炎，膽囊炎，小便不利，蛇咬傷等癥。在民間作美漢草藥用，全草可入藥，作為寒藥，具有發表清熱，利濕解毒等功效，其天然資源極為豐富，且蘊含量大。有關美漢草化學成分的研究資料較少。目前，從植物美漢草的花瓣中鑒定出含有花青素。從植物美漢草中分離得到迷迭香酸、紫草酸B、精脒生物堿的糖苷類。

發明內容
I、美漢草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(I):稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg_23. Okg的50%乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物28g ；步驟(3):將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28gl00 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=15 I處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物24mg ；步驟(6):結合光譜分析鑒定其結構為乙基-α-D-葡萄糖苷。根據本發明，本發明中的“ ％ ”是重量百分比。
具體實施例方式本發明所述的美漢草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分離工藝包括以下實施例，下面的實施例可進一步說明本發明，但不以任何方式限制本發明。實施例I :I、美漢草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(I):稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg的50 %乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min，超聲溫度為30°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物28g ；步驟(3):將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28gl00 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=15 I處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物24mg ；步驟(6):結合光譜分析鑒定其結構為乙基-α-D-葡萄糖苷。實施例2:I、美漢草中乙基-Ci-D-葡萄糖苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程步驟(I):稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入23. Okg的50 %乙醇浸泡過夜，然后超聲提取35min，超聲溫度為32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液；步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物28g ；步驟⑶將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28gl00 200目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟(4):采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3對步驟(3) 中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=15 I處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物24mg ；步驟(6):結合光譜分析鑒定其結構為乙基-α-D-葡萄糖苷。化合物的結構鑒定白色針狀結晶，mp :150 152°C，易溶于DMS0，甲醇，乙醇及丙酮，微溶于乙酸乙酯，難溶于氯仿、乙醚、苯等親脂性有機溶劑。Molish反應陽性。薄層層板將樣品溶于甲醇，硅膠板為固定相，以氯仿甲醇甲酸=7 I I為流動相，展開后，在可見光與紫外光下觀察無熒光現象，用碘蒸氣熏，顯示為單一黃色斑點，以10%濃硫酸乙醇溶液顯色后， 展開的薄層板上顯示為單一黃色清晰斑點。酸水解后，檢出有葡萄糖(Rf = O. 16)。ESI-MS顯示分子量為 208，分子式為 C8H16O60 1H-NMR(600MHz, CDCl3)譜中，I. 15 (3H, t, J = 7. 5Hz) 是乙基上的C-CH3化學信號。3. 40 (2H, d，J = 7. 5Hz)是乙氧基化學位移信號。4. 45 (1H， d,J = 5. OHz)是葡萄糖的端基氫質子的信號且表明為α構型[50]。13C-NMR(150MHz,CDCl3) 譜中，15.02(s)為乙基端基碳原子的化學位移信號，98. 68(s)是葡萄糖的端基碳原子的化學位移信號，62. 28 (s)是葡萄糖的6位碳原子信號。 1H-NMlUeOOMHz, CDCl3) δ 4. 45 (1Η, d, J = 5. OHz, H-l), 4. 37 (1H, dd, J = 5. OHz, H-2)，4. 29 (1H, dd, J = 6. OHz, H_3)，3. 53 (1H, H_4)，3. 48 (1H, H_5)，3. 69 (1H, dd, J = 6. OHz, H-6)，3. 57 (1H, dd, J = 6. 0，3. 5Hz, H_7)，3. 40 (2H, d, J = 7. 5Hz, H_8)，I. 15 (3H, t, J = 7. 5Hz, H-9) o 13C-NMR (150MHz, CDCl3) δ :98. 68 (C_l)，71. 12 (C_2)，69. 60 (C_3)， 68. 83 (C-4)，68. 35 (C_5)，62. 28 (C_6)，55. 13 (C_7)，15. 02 (C_8)。與文獻進行對照，鑒定化合物為乙基-a-D-葡萄糖苷。
權利要求
1.美漢草中乙基-a-D-葡萄糖苷的提取分離工藝，其特征在于該工藝包括以下過程 步驟(I):稱取美漢草干燥粗粉2. 25kg，加入22. 5kg-23. Okg的50%乙醇浸泡過夜，然后超聲提取30min-35min，超聲溫度為30°C -32°C，超聲功率為80W，超聲提取三次，合并提取液并減壓濃縮，濃縮液置于4°C冰箱中48h-60h，抽濾，得到除去部分色素沉淀的濃縮液； 步驟(2):將步驟(I)中的濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取三次，每個萃取部分濃縮至稠膏狀浸膏，回收溶劑，由此得到正丁醇提取物28g ；步驟⑶將步驟⑵中正丁醇提取物28g溶于IOOml無水乙醇中，拌以28gl00 200 目硅膠，揮干溶劑，選用280gl00 200目硅膠用氯仿拌勻，濕法裝柱，干法上樣；步驟⑷采用不同梯度氯仿-甲醇=50 I 氯仿-甲醇=I 3對步驟(3)中的正丁醇提取物進行洗脫層析，以每50ml洗脫液收集一瓶，用薄層色譜TLC檢測，合并相同組分，濃縮至小體積；步驟(5):在分離到洗脫液氯仿-甲醇=15 I處時，出現白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物24mg ；步驟(6):結合光譜分析鑒定其結構為乙基-α-D-葡萄糖苷。
全文摘要
本發明所屬醫藥產品研究開發技術領域。本發明涉及美漢草中乙基-α-D-葡萄糖苷的提取分離工藝。稱取美漢草干燥粗粉加入50％乙醇浸泡過夜，然后超聲提取，合并提取液并減壓濃縮，將濃縮液分別用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇等溶劑各萃取，由此得到正丁醇提取物；選用硅膠柱層析，采用不同梯度氯仿-甲醇對正丁醇提取物進行洗脫，分離得到白色沉淀，此沉淀再經甲醇反復結晶得到單體化合物；結合光譜分析鑒定其結構為乙基-α-D-葡萄糖苷。本發明的目的是為滿足生產和科研上的需求量，提高收率，降低成本。
文檔編號C07H1/08GK102584913SQ20121000990
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月1日 優先權日2012年1月1日
發明者侯欣池, 張崇禧, 張成城, 李小葉, 鄭友蘭 申請人:山東大學威海分校