專利名稱：一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法
技術領域：
本發明涉及一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法。
背景技術：
白藜蘆醇(resveratrol, Res.),化學名稱為3,4’，5_三輕基-二苯乙烯(3,4’，5-trihydroxystiIbene)。其別名為虎杖式元,又稱苗三酹,分子式為C14H12O3,其相對分子質量為228. 25，純品為無色針狀結晶，熔點為256-258°C，在261°C以上易升華。目前，提取白藜蘆醇的方法及報道很多，但都采用有機溶劑提取，萃取或者柱層析提純工藝，生產成本高，產品收率低、不適用于工業化大生產。中國專利201010127142. 6 —種高純度白藜蘆醇提取分離純化工藝，采用先發酵 酶解，再有機混合溶劑提取，經濃縮、醇沉、水沉、過濾、醇溶、柱層析、純化等步驟，精制得98%的產品。該方法生產周期長，由于發酵酶的不同選擇，酶解那塊就需4-10天時間，柱層析采用硅膠或者氧化鋁，生產成本高，再者加入有機溶劑，增加生產安全風險，不適用于大生產。中國專利200310112538. 3虎杖苷和白藜蘆醇的新制備方法，采用聚酰胺層析法分離純化虎杖苷和/或白藜蘆醇，此方法采用聚酰胺樹脂進行分離，生產成本高，對生產設備要求高，再者因為沒有對白藜蘆醇苷進行轉化，如生產白藜蘆醇收率非常低，不適用于大生產。中國專利99115156. 9 一種從中藥虎杖中提取白藜蘆醇的工藝，采用在原料中加入復合酶在恒溫下進行酶解反應4 8 7 2小時獲得酶解原料；再用溶劑萃取、濃縮獲得含白藜蘆醇的半成品，再經精制即得。此發明利用溶劑進行萃取，白藜蘆醇轉化低，生產成本高，不適用于大生產。

發明內容
本發明為解決現在技術中的問題，提供一種生產成本低、生產周期短、產品收率高，且未加入任何有機溶劑，更適用于大規模生產的從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法。本發明采用以下技術方案予以實現
本發明一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，它包括以下步驟；
a.粉碎將原藥材虎杖用藥材粉碎機粉碎成5-20目的細小顆粒。b.酶解將步驟a粉碎好的虎杖顆粒加入其1-5倍重量的水潤濕，并加入相當于原藥材虎杖O. 1-1%重量的酶解物，充分攪拌均勻，于30-40°C下酶解24小時，所述酶解物為酵母、釀酒曲、植物水解酶、纖維素酶的一種或幾種混合。C.提取將步驟b酶解好后的藥材虎杖每次加入其4-10倍重量、濃度為50-90%的乙醇，加熱回流提取I小時，提取三次，合并三次提取藥液，經回收乙醇，濃縮至藥液量為原藥材重量的1-10倍，靜置放冷。
d.離心將步驟c靜置放冷后的藥液經三足離心或者管式離心過濾，得濾液。e.上柱將步驟d的濾液直接上樹脂柱，先用水洗脫干凈，然后用3-10倍量樹脂體積的濃度為40-90%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為原藥材重量的O. 5-5倍，靜置放冷，產生淺黃白色結晶。.干燥將步驟e的結晶體用水沖洗干凈后，置于60°C真空干燥箱進行干燥1-5小時，干燥完后即得白色產品，白藜蘆醇含量在90%以上。優選的，所述的一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，所述步驟b為將步驟a粉碎好的虎杖顆粒加入5倍量水浸泡藥材，并加入相當于原藥材的O. 5%重量的酶解物，充分攪拌均勻，于35-40°C酶解24小時，最佳酶解溫度為38°C，最佳酶解物為釀酒曲。
優選的，所述的一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，所述步驟c為 將步驟b酶解好后的藥材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、濃度為60-80%的乙醇，力口
熱回流提取I小時，提取三次，合并三次提取藥液，經回收乙醇，濃縮至藥液量為原藥材重量的3-6倍，靜置放冷。更優選的，所述步驟c中，乙醇濃度為75%，藥液濃縮至藥液量為原藥材重量的5倍。本發明方案中，優選的步驟e為
將步驟d的濾液直接上樹脂柱，當進完藥液后，先用純化水洗至無色透明，然后用4-7倍量樹脂體積的濃度為50-70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為原藥材重量的I. 5-3. 5倍，靜置放冷，產生淺黃白色結晶，所述樹脂為D-101，AB-8, XC-7 或 LX-17 中的一種。所述步驟e最佳為將步驟d的濾液直接上樹脂柱，當進完藥液后，用純化水洗至無色透明后，用5倍量樹脂體積的65%濃度乙醇解吸，收集65%乙醇洗脫液，經回收乙醇后，所述藥液減壓濃縮至藥液量為原藥材重量的2倍。所述樹脂最佳為XC-7大孔吸附樹脂。本發明一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，最佳具體方案為以下步驟 取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入
相當于原藥材重量O. 5%的釀酒曲，溫度控制在38°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為75%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的XC-7大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%的乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為200公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥4小時，得產品白藜蘆醇。本發明與現有技術相比具有以下顯著的優點
(I)本發明純化工藝簡單，一改以前需要反復結晶或者高成本的柱層析，一次上柱就能得到高含量的白藜蘆醇，既提高了產品收率，又降低了生產成本。(2)本發明采用釀酒曲對原料進行酶解，24小時就能酶解完全，大大縮短了生產周期。(3)所用溶劑為乙醇和水，無污染，生產安全。(4)且未加入任何有機溶劑，更適用于大規模生產。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的說明。實施例I
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加300公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材O. 5%的酵母，溫度控制在35°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤濃度為65%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為400公斤，靜置放冷后，經三足離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的XC-7大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%的乙醇洗脫干凈，收集65%乙醇洗脫液，經回收乙醇 后，減壓濃縮至藥液量為200公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥4小時，稱重得產品I公斤，白藜蘆醇含量為90. 52%。實施例2
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成15目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材重量O. 5%的釀酒曲，溫度控制在38°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為75%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的XC-7大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%的乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為200公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥3小時，得，稱重得產品I. I公斤，白藜蘆醇含量為92. 68%。實施例3
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材O. 5%的釀酒曲，溫度控制在39°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為80%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的AB-8大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為100公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥4小時，稱重得產品I. I公斤，白藜蘆醇含量為85. 12%。實施例4
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成18目粗粉，加300公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材O. 5%的酵母，溫度控制在35°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為60%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的D-101大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為100公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥2小時，稱重得產品O. 9公斤，白藜蘆醇含量為86. 12%。
實施例5
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材O. 5%的纖維素酶，溫度控制在35°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為70%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的LX-17大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為100公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥4小時，稱重得產品I. O公斤，白藜蘆醇含量為90. 52%。實施例6
取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材O. 5%的植物水解酶，溫度控制在40°C，酶解24小時，酶解完后，加入500公斤、濃度為85%的乙醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收乙醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的XC-7大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%乙醇洗脫干凈，收集濃度為65%的乙醇洗脫液，經回收乙醇后，減壓濃縮至藥液量為100公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥5小時，稱重得產品I. I公斤，白藜蘆醇含量為91. 65%。本發明的方案中，所述酶解物優選為釀酒曲，用不同酶解物對虎杖原藥材進行對比酶解實驗，結果表明，在24小時內酶解最完全的為釀酒曲，見表I。表I不同酶解物酶解情況
酶解物 j酶解時間j酶解溫度j酶解后原藥材中虎杖苷含量 I酶解后原藥材中白藜蘆醇含量酵母24 小時 38°C 一 0.25%I. 12%
釀酒曲 24 小時 38°C 一 0.03%1.23%
纖維素酶 24小時 38°C —0.85%0.82%
植物水解酶丨24小時 !38°C |θ. 54%I 0.96%
在本發明的方案中，所述的吸附樹脂優選為XC-7大孔吸附樹脂。用不同樹脂對虎杖提取藥液中白藜蘆醇的除雜純化比較，結果表明，XC-7大孔吸附樹脂對白藜蘆醇純化最好，結果見表2。表2不同樹脂對白藜蘆醇純化結果
琢If型號I藥液量I樹脂體積I上柱流速I白藜蘆醇含f
D-101 500ml 100ml2BV/h 28.25%_
AB-8 ~ 500ml Tooml2BV/h~ 17%
XC-7 ~ 500ml ToQinl2BV/h~5θ! 58%
LX-17 1500ml 1100ml|2BV/h丨20·46%
權利要求
1.ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，它包括以下步驟； a.粉碎將原藥材虎杖用藥材粉碎機粉碎成5-20目的細小顆粒； b.酶解將步驟a粉碎好的虎杖顆粒加入其1-5倍重量的水潤濕，并加入相當于原藥材虎杖O. 1-1%重量的酶解物，充分攪拌均勻，于30-40°C下酶解24小時，所述酶解物為酵母、釀酒曲、植物水解酶、纖維素酶的ー種或幾種混合； c.提取將步驟b酶解好后的藥材虎杖每次加入其4-10倍重量、濃度為50-90%的こ醇，加熱回流提取I小時，提取三次，合并三次提取藥液，經回收こ醇，濃縮至藥液量為原藥材重量的1-10倍，靜置放冷； d.離心將步驟c靜置放冷后的藥液經三足離心或者管式離心過濾，得濾液； e.上柱將步驟d的濾液直接上樹脂柱，先用水洗脫干凈，然后用3-10倍量樹脂體積的濃度為40-90%こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，經回收こ醇后，減壓濃縮至藥液量為原藥材重量的O. 5-5倍，靜置放冷，產生淺黃白色結晶； f.干燥將步驟e的結晶體用水沖洗干凈后，置于60°C真空干燥箱進行干燥1-5小時，干燥完后即得白色產品白藜蘆醇。
2.如權利要求I所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述步驟b為將步驟a粉碎好的虎杖顆粒加入5倍量水浸泡藥材，并加入相當于原藥材的O. 5%重量的酶解物，充分攪拌均勻，于35-40°C酶解24小時。
3.如權利要求2所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述酶解溫度為38で。
4.如權利要求2所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述酶解物為釀酒曲。
5.如權利要求I所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述步驟c為 將步驟b酶解好后的藥材虎杖每次加入其重量的5-8倍量、濃度為60-80%的こ醇，カロ熱回流提取I小時，提取三次，合并三次提取藥液，經回收こ醇，濃縮至藥液量為原藥材重量的3-6倍，靜置放冷。
6.如權利要求5所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是， 所述步驟c中，こ醇濃度為75%，藥液濃縮至藥液量為原藥材重量的5倍。
7.如權利要求I所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述步驟e為 將步驟d的濾液直接上樹脂柱，當進完藥液后，先用純化水洗至無色透明，然后用4-7倍量樹脂體積的濃度為50-70%的こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，經回收こ醇后，減壓濃縮至藥液量為原藥材的1.5-3. 5倍，靜置放冷，產生淺黃白色結晶，所述樹脂為D-101，AB-8,XC-7或LX-17中的ー種。
8.如權利要求7所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述步驟e為 將步驟d的濾液直接上樹脂柱，當進完藥液后，用純化水洗至無色透明后，用5倍量樹脂體積的65%濃度こ醇解吸，收集65%こ醇洗脫液，經回收こ醇后，所述藥液減壓濃縮至藥液量為原藥材重量的2倍。
9.如權利要求7或8所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，所述樹脂為XC-7大孔吸附樹脂。
10.如權利要求I所述的ー種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，其特征是，它還可以具體為以下步驟 取100公斤虎杖原料，用藥材粉碎機粉碎成10目粗粉，加500公斤水浸泡藥材，并加入相當于原藥材重量O. 5%的釀酒曲，溫度控制在38°C，酶解24小吋，酶解完后，加入500公斤、濃度為75%的こ醇回流提取三次，每次提取I小時，合并三次提取液，經回收こ醇，減壓濃縮至藥液量為500公斤，靜置放冷后，經管式離心機過濾，濾液直接上已處理好的100L體積的XC-7大孔型樹脂柱，藥液上完后，先加水洗脫至樹脂柱流出液呈淺黃色，再加500L、濃度為65%的こ醇洗脫干凈，收集濃度為65%的こ醇洗脫液，經回收こ醇后，減壓濃縮至藥液量為200公斤，靜置放冷后，完全析出淺黃白色晶體，取晶體經水洗脫至無顏色，晶體置于60°C真空干燥箱，干燥4小時，得白藜蘆醇產品。
全文摘要
本發明涉及一種從虎杖中提取高含量白藜蘆醇的新方法，它具體包括將原藥材虎杖粉碎、酶解、提取、離心、上柱和干燥等步驟制得白藜蘆醇產品，本發明純化工藝簡單，克服了以前需要反復結晶或者高成本的柱層析，一次上柱就能得到高含量的白藜蘆醇，既提高了產品收率，又降低了生產成本，此外，本發明采用釀酒曲對原料進行酶解，24小時就能酶解完全，大大縮短了生產周期，并且所用溶劑為乙醇和水，無污染，生產安全。
文檔編號C07C37/70GK102838455SQ201210343348
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月17日 優先權日2012年9月17日
發明者徐月燦 申請人:湖南希爾天然藥業有限公司