專利名稱：一種小葉丁素的提純方法
技術領域：
本發明屬于植物提取技術領域，涉及一種從小葉香茶菜干燥葉中提取純化小葉丁素的方法。
背景技術：
小葉香茶菜J1SotZo/ parvifolia (Batalin) Hara系唇形科香茶菜屬植物,主要分布于我國四川省。1990年郭躍偉等首次從小葉香茶菜的葉中分離得到小葉丁素，并經過初步藥理研究表明，小葉丁素對人肝癌細胞株QGY-7703有一定抑制作用。郭躍偉等采用的方法是用95%乙醇提取，用生藥量2%的活性炭脫色，常法處理得醇浸膏，乙酸乙酯萃取多次，回收，硅膠柱分離，氯仿-丙酮梯度洗脫分離得到小葉丁素。該方法樣品損失較大、得率低、成本高。 小葉丁素(Parvifolinoic acid),分子式為C42H76O3,分子量為629. 07，為白色粉末狀，mp. 90-91. 50C ο

發明內容
本發明的目的是提供一種小葉丁素的提純方法，該方法提率高、成本低，適合規模
化生產。本發明的目的是通過以下技術方案實現的
一種小葉丁素的提純方法，其特征在于包括以下步驟
(O酶解取原料小葉香茶菜干燥葉，經粉碎處理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小時，并充分攪拌；
(2)提取將上述酶解液過濾，取濾渣用5-6倍藥材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏；
(3)富集將浸膏過大孔吸附樹脂柱，醇水洗脫，收集洗脫液；
(4)純化將上述洗脫液減壓回收乙醇，用氯仿萃取，萃取液濃縮后上硅膠柱(硅膠粒度為100-200目)，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得產品。步驟(I)中所述酶選自纖維素酶、蝸牛酶、葡聚糖酶或果膠酶中的一種，酶用量為
I.8-3. 5%。，pH 為 3. 8-4. 6，酶解溫度為 40-50°C。步驟(2)中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分比濃度為80-90%。步驟(3)中所述大孔樹脂選自AB-8、XAD-16、XDA-8或HZ806型中的一種。步驟(3)中所述醇水洗脫為3-4BV10%-20%乙醇水溶液一4_6BV70%-90%乙醇水溶液，乙醇溶液濃度均為體積百分比濃度。步驟(4)中所述梯度洗脫為乙酸乙酯-乙醇按體積比由高到低，依次為10:1、5:1、3:1。本發明采用酶解提取，有效成分更容易溶出，提高了提取率；采用大孔樹脂分離，不同濃度乙醇洗脫，除去雜質；使用硅膠柱，乙酸乙酯-乙醇梯度柱層析，可得到較純凈的小葉丁素，產品純度較高。
具體實施例方式 實施例I:
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入2. 2g纖維素酶)進行浸泡半小時，然后在42°C下水浴酶解3小時，并充分攪拌，過濾，取濾渣用5倍藥材重量的80%乙醇加熱回流提取I小時，提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，加入XAD-16大孔吸附樹脂柱，先取3BV10%乙 醇洗脫雜質，再取4BV70%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 67g小葉丁素，含量92. 6%。實施例2:
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入3. Ig纖維素酶)進行浸泡半小時，然后在44°C下水浴酶解2小時，并充分攪拌，過濾，取濾渣用6倍藥材重量的90%乙醇加熱回流提取I小時，提取2次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱，先取4BV20%乙醇洗脫雜質，再取4BV90%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10: 1、5: 1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 63g小葉丁素，含量94. 8%。實施例3
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入I. Sg纖維素酶和果膠酶混合復合酶，纖維素酶和果膠酶的質量比為1:1)進行浸泡半小時，然后在50°C下水浴酶解5小時，并充分攪拌，過濾，取濾渣用5倍藥材重量的90%乙醇加熱回流提取I小時，提取2次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，力口入XDA-8大孔吸附樹脂柱，先取3BV10%乙醇洗脫雜質，再取6BV90%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 58g小葉丁素，含量95. 6%。實施例4:
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入3. 5g果膠酶)進行浸泡半小時，然后在45°C下水浴酶解4小時，并充分攪拌，過濾，取濾渣用6倍藥材重量的80%乙醇加熱回流提取I小時，提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，加入HZ806大孔吸附樹脂柱，先取4BV10%乙醇洗脫雜質，再取6BV80%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 64g小葉丁素，含量94. 4%。
實施例5:
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入2. 6g葡聚糖酶和果膠酶的混合復合酶，葡聚糖酶和果膠酶的質量比為1:3)進行浸泡半小時，然后在48°C下水浴酶解2小時，并充分攪拌，過濾，取濾渣用5倍藥材重量的85%乙醇加熱回流提取I小時，提取2次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，加入AB-8大孔吸附樹脂柱，先取3BV20%乙醇洗脫雜質，再取5BV80%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 69g小葉丁素，含量93. 5%。實施例6:
取小葉香茶菜干燥葉粉碎過60目篩，稱取5kg，加15LpH4. 2的纖維素酶水溶液(每公斤生藥加入3. 3g蝸牛酶)進行浸泡半小時，然后在40°C下水浴酶解5小時，并充分攪拌，過濾， 取濾渣用6倍藥材重量的85%乙醇加熱回流提取I小時，提取3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏加熱水分散，加入HZ806大孔吸附樹脂柱，先取4BV20%乙醇洗脫雜質，再取5BV70%乙醇洗脫有效成分，減壓回收乙醇得粗提物，用等倍體積量的氯仿萃取，連續萃取4次，合并萃取液，萃取液濃縮后上硅膠柱層析(硅膠粒度為100-200目)，用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得O. 61g小葉丁素，含量94. 2%。
權利要求
1.一種小葉丁素的提純方法，其特征在于包括以下步驟 (1)酶解取原料小葉香茶菜干燥葉，經粉碎處理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小時，并充分攪拌； (2)提取將上述酶解液過濾，取濾渣用5-6倍藥材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏； (3)富集將浸膏過大孔吸附樹脂柱，醇水洗脫，收集洗脫液； (4)純化將上述洗脫液減壓回收乙醇，用氯仿萃取，萃取液濃縮后上硅膠柱(硅膠粒度為100-200目)，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥得產品。
2.根據權利要求I所述的提純方法，其特征在于步驟(I)中所述酶選自纖維素酶、蝸牛酶、葡聚糖酶或果膠酶中的一種，酶用量為1.8-3. 5%。，pH為3. 8-4. 6，酶解溫度為40-50。。。
3.根據權利要求I所述的提純方法，其特征在于步驟(2)中所述乙醇水溶液中乙醇的體積百分比濃度為80-90%。
4.根據權利要求I所述的提純方法，其特征在于步驟(3)中所述大孔樹脂選自AB-8、XAD-16、XDA-8 或 HZ806 型中的一種。
5.根據權利要求I所述的提純方法，其特征在于步驟(3)中所述醇水洗脫為3-4BV10%-20%乙醇水溶液一4-6BV70%-90%乙醇水溶液，乙醇溶液濃度均為體積百分比濃度。
6.根據權利要求I所述的提純方法，其特征在于步驟(4)中所述梯度洗脫為乙酸乙酯-乙醇按體積比由高到低，依次為10:1、5:1、3:1。
全文摘要
本發明公開了一種小葉丁素的提純方法，方法包括(1)取原料小葉香茶菜干燥葉，經粉碎處理，用酶溶液浸泡，水浴酶解并充分攪拌；(2)將酶解液過濾，取濾渣用5-10倍量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏；(3)將浸膏過大孔吸附樹脂柱，醇水混合溶液洗脫，收集洗脫液；(4)將洗脫液減壓回收乙醇，氯仿萃取，萃取液濃縮后上硅膠柱，乙酸乙酯-乙醇梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集小葉丁素流分，減壓濃縮，冷凍干燥即得產品。本發明操作簡單、所得產品收率高、成本低，適合規模化生產。
文檔編號C07C59/68GK102863329SQ201210363130
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司