專利名稱：一種制備鷓鴣花物b的方法
技術領域：
本發明屬于中藥化學技術領域，涉及ー種制備鷓鴣花物B的方法。
背景技術：
鶴聘花物B是從楝科(Meliaceae)植物羅卡鶴聘花roka Chiov.的莖皮中分離得到的ー種三萜類化合物，呈白色無定形固體狀。分子式為C35H44O14，分子量為688. 72，目前對鷓鴣花物B的研究較少，1984年學者通過藥理實驗發現鷓鴣花物B具有昆蟲拒食活性,在200ppm時對日本疫病昆蟲根切蟲的幼蟲 有拒食活性；另外還發現鷓鴣花物B對DNA修復缺損酵母株RS322K (rad 52Y)有中等抑制作用，其IC5tl為13 μ g/ml。目前，尚無大量制備鷓鴣花物B的エ業化方法報道和專利公開。

發明內容
本發明的目的在于提供一種制備鷓鴣花物B的方法。本發明提供的從羅卡鷓鴣花莖皮中提取制備鷓鴣花物B的方法步驟如下
(1)將羅卡鷓鴣花莖皮粉碎，用こ醇水溶液滲漉提取，將提取液減壓濃縮得到浸膏；
(2)將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液溶解，過濾，こ酸こ酯和水的體積比為10:1，濾液靜置分層15-28h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物；
(3)將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液溶解，過濾，庚烷和甲醇的體積比為2:1，濾液靜置分層5-8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物；
(4)甲醇萃取物通過硅膠柱層析，以石油醚-こ酸こ酯為洗脫劑進行梯度洗脫，將含有鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，得到鷓鴣花物B。步驟(I)中所述こ醇水溶液為體積百分比為60-85%的こ醇水溶液,其用量是所用藥材重量的5-15倍，藥材的浸泡時間為2-8小吋，滲漉提取時間為2-5小吋。步驟(4)中所述石油醚-こ酸こ酯梯度洗脫是按石油醚-こ酸こ酯體積比5: I、3:1、1:1、1:2進行梯度洗脫。本發明的特點在于通過こ酸こ酷-水和庚烷-甲醇體系的分配，可提高鷓鴣花物B的萃取率；經硅膠柱和葡聚糖凝膠柱層析，可得到高純度的鷓鴣花物B，本發明的鷓鴣花物B的制備方法，具有提取エ藝簡單，成本低、提率高，制備得到的鷓鴣花物B單體純度高等特點，適用于エ業化生產。
具體實施例方式 下面結合實施例對本發明作進ー步闡述，但本發明不限于此。實施例I :
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量60%こ醇浸泡4小吋，再用原料重量5倍的60%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為4小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層15h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、1:1、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B119mg，純度為90. 8%。實施例2:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量80%こ醇浸泡2小吋，再用原料重量8倍的80%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為2小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層28h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層6h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、1:1、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為 600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B103mg，純度為93. 6%。實施例3:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量65%こ醇浸泡8小吋，再用原料重量10倍的65%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為5小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層20h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層7h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、1:1、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B125mg，純度為90. 5%。實施例4:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量70%こ醇浸泡6小吋，再用原料重量12倍的70%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為3小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層18h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層5h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、1:1、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B113mg，純度為91. 2%。實施例5
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量60%こ醇浸泡2小吋，再用原料重量15倍的60%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為5小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層22h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層5h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、I: I、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物BllOmg，純度為92. 3%。實施例6:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量85%こ醇浸泡2小吋，再用原料重量15倍的85%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為8小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層26h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層6h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、I: I、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B108mg，純度為90. 4%。 實施例7:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量75%こ醇浸泡3小吋，再用原料重量10倍的75%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為4小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層24h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層7h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、I: I、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B112mg，純度為91. 7%。實施例8:
將50kg干燥的羅卡鷓鴣花莖皮粉碎成粗粉，先用少量60%こ醇浸泡4小吋，再用原料重量5倍的85%こ醇水溶液滲漉提取，提取時間為6小吋，收集滲漉液濃縮得到浸膏。將浸膏用こ酸こ酯和水的混合溶液(こ酸こ酯和水的體積比為10:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層28h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到こ酸こ酯萃取物。將こ酸こ酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液(庚烷和甲醇的體積比為2:1)攪拌溶解，過濾，濾液靜置分層8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物。將甲醇萃取物通過硅膠柱層析(甲醇萃取物與硅膠用量之比為1:3)，按石油醚-こ酸こ酯體積比5:1、3:1、I: I、1:2進行梯度洗脫，每個梯度用量為600ml，收集含鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以ニ氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進ー步洗脫純化，洗脫液減壓濃縮干燥得到鷓鴣花物B107mg，純度為92. 4%。
權利要求
1.一種制備鷓鴣花物B的方法，其特征在于該方法包括以下步驟 (1)將羅卡鷓鴣花莖皮粉碎，用乙醇水溶液滲漉提取，將提取液減壓濃縮得到浸膏； (2)將浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液溶解，過濾，乙酸乙酯和水的體積比為10:1，濾液靜置分層15-28h，分液，取上相，減壓濃縮蒸干得到乙酸乙酯萃取物； (3)將乙酸乙酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液溶解，過濾，庚烷和甲醇的體積比為2:1，濾液靜置分層5-8h，分液，取下相，減壓濃縮蒸干得到甲醇萃取物； (4)甲醇萃取物通過硅膠柱層析，以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑進行梯度洗脫，將含有鷓鴣花物B的流分通過葡聚糖凝膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇體積比為4:1的混合溶液進一步洗脫純化，得到鷓鴣花物B。
2.如權利要求I所述的一種制備鷓鴣花物B的方法，其特征在于步驟(I)中所述乙醇水溶液為體積百分比為60-85%的乙醇水溶液，其用量是所用藥材重量的5-15倍，藥材的浸泡時間為2-8小時，滲漉提取時間為2-5小時。
3.如權利要求I所述的一種制備鷓鴣花物B的方法，其特征在于步驟(4)中所述石油醚 -乙酸乙酯梯度洗脫是按石油醚-乙酸乙酯體積比5:1、3:1、I: I、1:2進行梯度洗脫。
全文摘要
本發明公開了一種制備鷓鴣花物B的方法。它是將羅卡鷓鴣花莖皮作為原料，采用乙醇水溶液滲漉提取，所得提取液濃縮后，先用乙酸乙酯-水體系分配，取上相減壓回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取物，將乙酸乙酯萃取物再用庚烷-甲醇體系分配，取下相減壓濃縮得到甲醇萃取物，通過硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯洗脫梯度洗脫，TLC跟蹤監測，收集含鷓鴣花物B的流分，再經葡聚糖凝膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇混合溶劑為洗脫劑進行洗脫，得到鷓鴣花物B產品。
文檔編號C07D493/04GK102863453SQ201210363080
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司