專利名稱：一種紫鉚苷的提純方法
技術領域：
本發明屬于天然植物技術領域，涉及一種紫鉚苷的提純方法。
背景技術：
紫鉚苷(Butrom)，又名紫礦春，分子式為C27H32O15，分子量為596. 54,mp. 190°C。紫鉚苷是從豆科植物紫鉚及/iea monospeerma (Lam.)Kuntze的花中分離得到的一種黃酮苷類化合物。紫鉚花提取物紫鉚苷和異紫鉚苷在印度多用于治療肝病。麥軍利通過在氯仿和半乳糖胺引起的肝細胞損害的實驗表明，紫鉚花提取物顯示有護肝作用，并證實可增強小鼠干細胞核的RNA合成，從而提高部分肝切除小鼠干細胞的再生率。麥軍利分離紫鉚苷是通過溶劑層析、TLC和HPLC分離，該方法制備量小，成本高，僅適用于實驗室化學成分分析少量制備。
經檢索，尚未發現適宜于大量制備紫鉚苷的工業化方法的專利或文獻報道。

發明內容
本發明的目的是提供一種紫鉚苷的提純方法，成品紫鉚苷含量高、生產成本低，可適用于工業化生產。本發明是通過如下技術方案實現的
(I)向紫鉚花中加入6 12倍原料重量的5(Γ80%乙醇水溶液，攪拌均勻，采用超聲提取，收集提取液；(2)將提取液加入至超濾膜系統除大分子多糖等雜質，得透過液；(3)將透過液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水為溶劑系統，以上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的紫鉚苷；
步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質為聚醚砜，截留分子量為2000-6000道爾
頓；
步驟(3)中所述聚酰胺樹脂柱層析，先用3-4BV體積百分比為20-30%的乙醇水溶液洗脫，再用4-6BV體積百分比為65-85%的乙醇水溶液洗脫；
步驟(4)中所述溶劑系統乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為(4-8) :(2-3) : (5-10)。本發明的有益效果是采用超聲提取，提取率高，耗時短，且避免目標產品的損失，是一種低耗能環保的提取方法；聚酰胺樹脂吸附洗脫，提高了產品的純度；采用高速逆流色譜法進行紫鉚苷的分離純化，與以往技術手段相比，具有分離能力強、分離時間短、樣品損失小、廣品質量聞等優點。
具體實施例方式 下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步說明。實施例I :
取20kg紫鉚花粉碎過20目篩，加入8倍量70%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用5000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用3BV20%乙醇洗脫，再用6BV85%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例4:2:5混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將150mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 8%。實施例2
取20kg紫鉚花粉碎過40目篩，加入6倍量80%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用6000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色 液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用4BV25%乙醇洗脫，再用5BV70%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例4:2:10混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將200mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 6%。實施例3
取20kg紫鉚花粉碎過20目篩，加入10倍量65%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用3000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用4BV20%乙醇洗脫，再用4BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例8:3:10混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將200mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為99. 2 %。實施例4:
取20kg紫鉚花粉碎過60目篩，加入12倍量50%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用6000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用3BV30%乙醇洗脫，再用5BV85%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例8:2:5混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將200mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 1%。實施例5:
取20kg紫鉚花粉碎過40目篩，加入6倍量50%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用4BV30%乙醇洗脫，再用4BV85%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例6:3:8混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流 色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將150mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 2%。實施例6:
取20kg紫鉚花粉碎過20目篩，加入9倍量75%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用4000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用3BV25%乙醇洗脫，再用6BV65%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例5:3:9混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將200mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 5%。實施例7
取20kg紫鉚花粉碎過40目篩，加入12倍量80%乙醇超聲提取I小時，提取2次，合并提取液，再用2000道爾頓的中空聚醚砜超濾膜過濾，透過液加I. 5%活性炭攪拌脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，先用4BV20%乙醇洗脫，再用6BV75%乙醇洗脫有效成分，收集目標成分減壓濃縮，離心，將離心液干燥，得到24g粗提物。取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例6:2:7混合，靜置分層，兩相分別超聲脫氣30分鐘，取上相為固定相，下相為流動相。將固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色譜分離柱中，啟動高速逆流色譜主機，調節分離柱轉速為820rpm，將流動相以3ml/min的流速泵入，分離柱的溫度調至25°C。將200mg紫鉚苷粗提物溶于IOml上相和IOml下相組成的溶劑中作為樣品溶液備用，待分離柱達到平衡，將樣品溶液注入進樣閥中，檢測波長為271nm，使用分步收集器收集流出組分，根據色譜工作站譜圖將同組分收集液合并，低溫真空濃縮至干，得到紫鉚苷，經 HPLC檢測、核磁共振進行結構確認，紫鉚苷的含量為98. 9%。
權利要求
1.一種紫鉚苷的提純方法，其特征在于包括以下步驟(1)向紫鉚花中加入6 12倍原料重量的5(Γ80%乙醇水溶液，攪拌均勻，采用超聲提取，收集提取液；(2)將提取液加入至超濾膜系統除大分子多糖等雜質，得透過液；(3)將透過液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水為溶劑系統，以上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的紫鉚苷。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中所述超濾膜為中空超濾膜，材質為聚醚砜，截留分子量為2000-6000道爾頓。
3.根據權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述聚酰胺樹脂柱層析，先用3-4BV體積百分比為20-30%的乙醇水溶液洗脫，再用4-6BV體積百分比為65-85%的乙醇水溶液洗脫。
4.根據權利要求I所述的方法，其特征在于步驟(4)中所述溶劑系統乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為(4-8) :(2-3) : (5-10)。
全文摘要
本方法提供一種紫鉚苷的提純方法，其特征在于包含以下步驟(1)以紫鉚花為原料，采用超聲提取，收集提取液；(2)將提取液加入至超濾膜系統除大分子多糖等雜質，得透過液；(3)將透過液加活性炭脫色，脫色液減壓濃縮至無醇，加水分散，加入聚酰胺樹脂柱吸附，乙醇水溶液洗脫，收集目標成分，減壓濃縮，離心，將清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-正丁醇-水為溶劑系統，以上相為固定相，下相為流動相，將上述得到的粗提物應用高速逆流色譜法進行分離純化，即得到高純度的紫鉚苷。
文檔編號C07H1/08GK102875618SQ20121036311
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司