1.用于檢測豬肺炎支原體的熒光定量PCR引物對,其特征在于:所述引物對的核苷酸序列如下所示:
上游引物P1:5’- GWCAAAGTCAAAGTCAGCAAAC -3’;
下游引物P2:5’- AGCTGTTCAAATGCTTGTCC -3’。
2.一種檢測豬肺炎支原體的Syto9熒光定量PCR-HRM方法,包括如下步驟:
(1)提取待測樣品DNA;
(2)以步驟(1)提取的DNA為核酸模板,以Syto9為熒光染料,用權(quán)利要求1所述的用于檢測豬肺炎支原體的熒光定量PCR引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增;
(3)將步驟(2)獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行高分辨率熔解曲線分析;
(4)結(jié)果判定:形成特異性的熔解曲線峰型為陽性,無特異的熔解曲線峰型為陰性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測豬肺炎支原體的Syto9熒光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步驟(2)所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)的25 μL體系中含有2xTaq Plus Master Mix 12.5 μL,P1 和P2引物(100 pmol/μL)各1.0 μL,核酸模板2.0 μL,Syto9 1.0 μL,余量為去離子水。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的檢測豬肺炎支原體的Syto9熒光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步驟(2)所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)槭紫?4℃ 5 min;隨后94℃ 20 s、54.5℃ 20 s、72℃ 20 s,循環(huán)擴(kuò)增45次;最后72℃延伸7 min。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測豬肺炎支原體的Syto9熒光定量PCR-HRM方法,其特征在于:步驟(3)所述的高分辨率熔解曲線分析程序?yàn)?8℃變性2min,40℃雜合2min,74℃~83℃以0.3℃/s的熔解速率運(yùn)行。
6.一種豬肺炎支原體的熒光定量PCR檢測試劑盒,其特征在于:含有權(quán)利要求1所述的用于檢測豬肺炎支原體的熒光定量PCR引物對。