1.一種采用微生物發(fā)酵法制備S-(+)-2,2-二甲基環(huán)丙烷甲酰胺的方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)菌種繁殖
將赤紅球菌菌種接入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng),菌種繁殖的條件為:將濃度109-1010個(gè)/ml的赤紅球菌菌種以0.1%-0.2%的接種量接入裝有種子培養(yǎng)基的培養(yǎng)罐中培養(yǎng);
(2)發(fā)酵培養(yǎng)
待步驟(1)中的菌種培養(yǎng)基OD600為20-30,培養(yǎng)時(shí)間36-44小時(shí),
pH5.5-6.0時(shí),以5%-10%的接種量將其接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為25-30℃;
(3)細(xì)胞分離
將步驟(2)得到的發(fā)酵液進(jìn)行培養(yǎng)基分離,除去培養(yǎng)基,得到菌體;
(4)轉(zhuǎn)化原料
將菌體用30-50倍發(fā)酵液體積的純水混勻后逐滴加入2,2-二甲基環(huán)丙烷甲氰,控制反應(yīng)溫度25℃-28℃,滴加中維持2,2-二甲基環(huán)丙烷甲氰濃度小于10g/L,轉(zhuǎn)化結(jié)束后檢測(cè)2,2-二甲基環(huán)丙烷甲氰濃度低于0.2g/L,反應(yīng)結(jié)束,得到S-(+)-2,2-二甲基環(huán)丙烷甲酰胺和菌體的混合液;
(5)成品提取
用至少2倍量的氯仿或丙酮對(duì)上述混合液依次進(jìn)行萃取、過(guò)濾、脫色、蒸餾得到粗品,粗品用至少4倍量的二氯甲烷或氯仿溶解后依次進(jìn)行萃取、脫色、過(guò)濾、蒸餾,然后加入至少2倍量己烷或者甲苯后進(jìn)行蒸餾結(jié)晶得到精制品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟(1),種子培養(yǎng)基中各組分濃度:葡萄糖 10-15g/L、K2HPO4 0.3-0.6g/L、MgSO4·7H2O 0.3-0.6g/L、磷酸二氫鉀 0.3-0.6g/L、尿素5.0-10g/L、味精 0.05-0.2g/L,酵母膏5-8g/L、種子培養(yǎng)基的pH為6.0-7.0。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟(2),發(fā)酵培養(yǎng)基中各組分濃度:葡萄糖 30-40g/L, K2HPO410-15g/L,MgSO4·7H2O 15-20g/L,KH2PO410-15g/L,尿素10-15g/L,味精1.0-3.0g/L,酵母膏5-10g/L,發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.0-7.0。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于步驟(3),細(xì)胞分離培養(yǎng)基采用中空玻璃纖維膜分離。