1.一種何首烏葉原生質(zhì)體的制備方法,其特征在于包括以下步驟:
(1)何首烏葉片經(jīng)過質(zhì)壁分離后切成0.5厘米寬的長(zhǎng)條,轉(zhuǎn)入到25%蔗糖溶液中放置8min,在35℃水浴鍋中處理何首烏葉片30win,過濾后得到原生質(zhì)體溶液;
(2)原生質(zhì)體經(jīng)過27%蔗糖溶液洗滌一次,再用13%甘露醇CPW溶液懸??;
(3)懸浮液原生質(zhì)體可用牛氏記數(shù)板記數(shù)和細(xì)胞融合;
(4)原生質(zhì)體得率=記數(shù)室大方格原生質(zhì)體的平均個(gè)數(shù)×104個(gè)(Fw);
(5)經(jīng)過質(zhì)壁分離法獲得的原生質(zhì)體溶液,l500r/rain下離心8win,沉淀用少量13%甘露醇CPW溶液懸浮,為原生質(zhì)體溶液;
(6)用吸管取原生質(zhì)體懸浮液滴兩滴在載玻片上,靜置幾分鐘,使原生質(zhì)體在載玻片上產(chǎn)生一薄層;
(7)取PEG融合液兩滴,緩慢滴加到載玻片上的原生質(zhì)體溶液中,再靜置一定時(shí)間,觀察載玻片原生質(zhì)體問的粘連;
(8)每隔5min,用吸管向原生質(zhì)體液中滴兩滴高Ca2+高pH溶液,共3次;
(9)蓋上蓋玻片,用吸水紙吸去多余的溶液即成臨時(shí)裝片后即可。
2.如權(quán)利要求1所述一種何首烏葉原生質(zhì)體的制備方法,其特征在于所述滲透劑為0.9mol/LNaCI、6%KN03和5%蔗糖溶液的混合液。
3.如權(quán)利要求1所述一種何首烏葉原生質(zhì)體的制備方法,其特征在于原生質(zhì)體質(zhì)壁分離的蔗糖濃度為25%、30%、35%、40%、45%。