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一種角蛋白特征肽在羚羊角摻假檢測中的應用流程的制作方法

文檔序號:12399334閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種角蛋白特征肽,其特征在于,包括黃牛角、水牛角、山羊角和綿羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列為SQQQEPLVCPNYQSYFR。

2.一種運用權利要求1的角蛋白特征肽在羚羊角摻假檢測中的應用流程,其特征在于,包括如下步驟:

步驟一:將角類樣品采用胰蛋白酶酶解處理:取角樣品粉末1mg,加1ml水超聲10min,10000rpm離心10min收集沉淀;加1ml 50%乙醇超聲10min,10000rpm離心10min收集沉淀;加入0.5ml變性緩沖液;加入25μl 1M DTT;90℃處理1h,加入60μl1M IAA,暗處反應1h,10000rpm離心10min,收集上清;取100μl上清加入10kd超濾管,10000rpm離心20min;加入0.4ml25mM NH4HCO3洗滌3次;加100μl25mM NH4HCO3溶液到超濾管中,加入2μg胰蛋白酶;37℃反應16h;10000rpm離心10min收集濾液。

步驟二:進行液質聯用分析:采用的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.1%甲酸水溶液為流動相A,以乙腈為流動相B,梯度洗脫:0→3min,流動相A為96%;3→8min,流動相A為96%→92%;8→10min,流動相A為92%→50%;10→12min,流動相A為50%;12→12.1min,流動相A為50%→95%;12.1→15min,流動相A為96%,流速為0.3ml/min。

步驟三:采用電噴霧正離子模式進行多反應監測,選擇離子對715.33→572.28,910.52進行MRM掃描。

3.根據權利要求2所述的應用流程,其特征在于,步驟一中,所述變性緩沖液為6M鹽酸胍、1.2M Tris-HCl、2.5mM EDTA、pH8.4。

4.根據權利要求2所述的應用流程,其特征在于,步驟三中,所述電噴霧正離子模式以三重四極桿質譜作為檢測器。

5.根據權利要求2所述的應用流程,其特征在于,步驟三中,所述電噴霧離子源為ESI+。

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