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一種虎奶菇菌絲體自溶蛋白質的制備方法與流程

文檔序號:12097256閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種虎奶菇菌絲體自溶蛋白質的制備方法,其特征在于包括以下步驟:

(1)將菌種轉移到PDA固體培養基上,置恒溫暗培養箱中,30℃培養7 d,在40℃環境下保存備用;

(2)將上述平板培養基上的菌絲用組織搗碎機搗碎后,吸取培養基體積l%的量接種于GPY培養基中,振蕩培養14 d后,以4800r/min,在4℃環境下離心收集菌絲體,將收集的菌絲體先用自來水沖洗,再用蒸餾水洗滌3次備用;

(3)取l g虎奶菇菌絲置于預冷過的缽體中,加入液氮,快速研磨;待菌絲體成粉末狀時,快速轉移菌絲體至離心管中,加入10 mL丙酮(含10%TCA和0.07%B一巰基乙醇),搖勻,沉淀過夜,ll 000 r·min,離心30 min后棄上清,以100%丙酮(含0.07%B一巰基乙醇)洗滌沉淀1次,11 000 r·min’1離心30 min后棄上清,再以80%丙酮(含0.07%13一巰基乙醇)洗滌沉淀1次,以ll 000 r·min離心30 min后棄上清液;將沉淀物真空干燥,于-70℃至-20℃環境下保存后備用;

(4)將經溫度處理后的菌絲體濾去,濾液離心取上清,加入1/10體積100%TCA,沉淀過夜,1l 000 r·min離心30 min后棄上清,重復以上操作,收集全部蛋白質沉淀,加入5 mL 80%冷丙酮(含0.07%一巰基乙醇,一20℃預冷),振蕩.放置-20℃冰箱中5 h后,11 000 r·min離心30min,棄上清,所述沉淀物即為虎奶菇茵絲體自溶蛋白質,將其干燥后儲存于-70℃至-20℃的環境中。

2.如權利要求1所述一種虎奶菇茵絲體自溶蛋白質的制備方法,其特征在于所述步驟(3)加入10 mL丙酮,所述丙酮含10%TCA和0.07%B一巰基乙醇。

3.如權利要求1所述一種虎奶菇茵絲體自溶蛋白質的制備方法,其特征在于所述以100%丙酮洗滌沉淀1次步驟中丙酮含有0.07%B一巰基乙醇。

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