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一種金線蓮莖腐病菌分子檢測引物及其檢測方法與流程

文檔序號:11145841閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種金線蓮莖腐病菌分子檢測的PCR引物,其特征在于,引物序列為:

ITS403f:5’-CCCAACCCCTGTGACATAC-3’;

ITS403r:5’-ATTACCAGTAACGAGGGTT-3’;

上述引物ITS403f/ ITS403r可從金線蓮莖腐病菌特異性擴增出403bp的產物。

2.利用權利要求1所述PCR引物用于檢測金線蓮莖腐病菌的方法,其特征在于:包括如下步驟:

(1)從所述的金線蓮莖腐病菌或被莖腐病菌感染的金線蓮植株中提取DNA;

(2)以該DNA為模板用權利要求1所述的引物ITS403f/ ITS403r通過聚合酶鏈式反應擴增:PCR反應體系25.0 μl,包括2×Taq PCR Master Mix12.5μL,10 μmol/L 的引物ITS403f / ITS403r各0.5 μL,DNA模板25ng,不足部分由dd H2O補足;PCR反應條件為:95℃預變性3min;94℃變性1min,58℃退火30sec,72℃延伸1min,共25個循環;72 ℃延伸10 min;

(3)然后取步驟(2)的PCR擴增產物用瓊脂糖凝膠電泳分離,經溴化乙錠染色后于紫外燈下觀察,根據擴增產物的大小判定結果,如果能特異性地擴增出403bp的產物,即可判斷所述的植株樣品中存在金線蓮莖腐病菌。

3.如權利要求1所述PCR引物在檢測金線蓮莖腐病菌中的應用。

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