本發明屬于惡性腫瘤技術領域，尤其涉及一種抑制hif-1α的抗腫瘤候選藥物及制備方法。

背景技術：

腫瘤是一種常見且發生頻繁的疾病，其中惡性腫瘤目前對人類健康具有最嚴重的危害。血管為腫瘤生長和存活提供足夠了的氧氣和營養物質，并消除代謝廢物。因此，腫瘤血管靶向治療成為有效的腫瘤治療策略。腫瘤血管抑制劑的研究進展上世紀70年代初，folkman首次提出，腫瘤新生血管對腫瘤的生長及擴散起重要作用。bergers等進一步的研究也表明:腫瘤細胞在增殖和轉移過程中需新生血管及功能性血管的支持；而且，近年來的大量研究已證實:腫瘤的生長與生存均需由血管提供充足的氧氣和養分，并排除代謝廢物，若無血管及新生血管的支持，腫瘤的生長不會超過2mm，因此，腫瘤血管靶向療法應運而生，成為一種有效的腫瘤治療策略。與選擇性差、毒性大且易產生耐藥性的傳統抗腫瘤藥物不同，腫瘤血管靶向療法具有選擇性強、毒性小、抗瘤譜廣等諸多優勢，能直接作用于腫瘤血管內皮細胞，抑制依賴于血管系統的各類腫瘤生長。此外，靶向血管治療對機體的正常生理功能影響很小，且相對于正常組織血管而言，腫瘤血管結構不完整，內皮細胞處于增殖狀態，更易遭受血管靶向藥物的攻擊。

在臨床用藥中，單獨使用血管阻斷劑的效果不好，腫瘤在血管阻斷后仍可以存活，認為原因可能是warburg效應。warburg效應是觀察到大多數癌細胞在有氧或無氧的情況下主要通過高速率的糖酵解產生能量，而在大多數正常細胞產生能量主要通過在線粒體中進行有氧呼吸。惡性快速生長的腫瘤細胞通常具有高達其正常來源組織的糖酵解速率的200倍的糖酵解速率，即使氧氣充足也會發生這種情況。

腫瘤細胞的能量主要來自糖酵解。缺氧是實體腫瘤的一個普遍特征，對于腫瘤的進展起著關鍵作用。ottowarburg學者發現許多腫瘤細胞即使是在常氧的情況下也產生過多的乳酸，稱之為假缺氧。腫瘤的快速增殖需要持續的氧與營養的供應。當組織生長的速度遠遠超過周圍血管供應這些營養成分的能力時，缺氧便應運而生。缺氧與腫瘤的血管新生、侵襲轉移、放化療抵抗和預后不良等密切相關。糖酵解途徑產生的丙酮酸可直接進入三羧酸循環途徑或者由乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，ldh)轉化為乳酸。在葡萄糖經糖酵解途徑生成乳酸的過程中，hk、pfk、pk和ldh等關鍵代謝酶與腫瘤有關，且受到致癌因子信號轉導通路中轉錄因子如乏氧誘導因子-1α(hypoxiainduciblefactor-1α，hif-1α)等的調控。(1)低氧誘導因子抑制劑低氧誘導因子1(hypoxia-induciblefactor1，hif-1)是缺氧效應調控中最為關鍵的核轉錄調控因子。.hif-1在實體腫瘤組織內選擇性持續高表達，下游關鍵調控基因與腫瘤的發生發展密切相關，如促進血管生成、細胞存活、抑制腫瘤細胞凋亡、代謝重塑以及ph穩態的調節。缺氧時糖酵解是腫瘤細胞獲得能量的一個重要手段。hif-1α通過與靶基因上的dna結合位點結合，誘導糖酵解酶類基因的表達，增加糖酵解，促進無氧代謝，故有利于腫瘤細胞在缺氧下的生存。影響hif-1α的合成及降解的藥物黃酮類化合物白楊素通過增加其脯氨酰羥化增加的泛素化和降解hif-1α。此外，白楊素之間的相互干擾hif-1α和熱休克蛋白90。白楊素也被發現通過akt信號途徑抑制hif-1α的表達。白楊素可通過抑制hif-1α抑制血管內皮生長因子的表達水平。mirzoeva等發現，在人前列腺癌細胞系pc3-m中，芹菜素下調hif-1α的mrna和蛋白表達水平，并降低其蛋白質結構的穩定性，進而阻止hif-1下游靶基因vegf的激活，下調vegf的mrna和蛋白表達水平，抑制前列腺癌新生血管的形成。liu等也發現，金合歡素(acacetin)雖然對hif-1αmrna的表達水平沒有明顯影響，但通過下調其蛋白表達水平而抑制vegf的激活，從而阻止卵巢癌新生血管形成，并且這種對vegf的抑制作用可以通過過表達hif-1α而消除。

技術實現要素：

本發明的目的在于提供一種抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物其制備方法，旨在解決在臨床用藥中，單獨使用血管阻斷劑的效果不好，腫瘤血管阻斷后仍可以存活的問題。

本發明是這樣實現的，一種抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物，所述抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物具有如下通式：

本發明的另一目的在于提供一種所述抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物的制備方法，所述抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物的制備方法包括以下步驟：

步驟一，在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素，無水碳酸鉀及丙酮，加熱攪拌回流，再逐滴加入1，2-二溴乙烷或1，3-二溴丙烷或1，4-二溴丁烷，60℃加熱冷凝回流，溶液變澄清再變渾濁；檢測反應進程，柱色譜純化，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50；

步驟二，在250ml三口燒瓶中加入苯并咪唑衍生物，使其溶于100ml丙酮，加入碳酸鉀，攪拌10min后，加入步驟一所得純化的白楊素衍生物，四丁基溴化銨，加熱至60℃攪拌反應，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

進一步，所述步驟一中：在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素2.54g，0.01(已改)mol，無水碳酸鉀5.52g，0.04mol及丙酮100ml；1，2-二溴乙烷或1，3-二溴丙烷或1，4-二溴丁烷0.04mol。

進一步，所述步驟二中：在250ml圓底燒瓶中依次加入苯并咪唑衍生物0.015mol，無水碳酸鉀5.52g，0.04mol，步驟一所得純化的白楊素衍生物0.01mol，四丁基溴化銨0.03g，0.0001mol及丙酮100ml。

本發明提供的抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物及其制備方法，擬設計合成化合物能抑制腫瘤細胞的糖酵解能力，糖酵解抑制以低氧誘導因子1α為靶點，設計合成以黃酮天然化合物為母核，修飾苯并咪唑衍生物合成系列白楊素衍生物，采用體外抗腫瘤活性、靶點蛋白的抑制水平進行篩選，篩選出作用于抑制低氧誘導因子1α的化合物。挑選出作用于抑制糖酵解的候選藥物，為治療腫瘤提供潛在的新的候選藥物。從降低腫瘤細胞糖酵解方面，最重要的為hif-1α，hif-1α抑制劑的種類很多，發現抑制hif-1α合成的抑制劑中發現黃酮類化合物和苯并咪唑類化合物，且最早發現的血管阻斷劑為醋酸黃酮，所以擬以黃酮為母核結構，另一側引入苯并咪唑或苯并咪唑衍生物，合成期望能通過抑制hif-1α而抑制糖酵解。

附圖說明

圖1是本發明實施例提供的抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物的制備方法流程圖。

圖2是本發明實施例提供的實驗結果示意圖。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

下面結合附圖對本發明的應用原理作詳細的描述。

本發明實施例提供的抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物具有如下通式：

如圖1所示，本發明實施例提供的抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物的制備方法包括以下步驟：

s101：在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素(2.54g，0.01mol)，無水碳酸鉀(5.52g，0.04mol)及丙酮(100ml)，加熱攪拌回流，再逐滴加入1，2-二溴乙烷或1，3-二溴丙烷或1，4-二溴丁烷(0.04mol)，60℃加熱冷凝回流，溶液變澄清再變渾濁。tcl(薄層色譜法)檢測反應進程，柱色譜純化，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

s102：在250ml三口燒瓶中加入苯并咪唑衍生物(0.015mol)，使其溶于100ml丙酮，加入碳酸鉀(5.52g，0.04mol)，攪拌10min后，加入步驟一所得純化的白楊素衍生物(0.01mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

本發明實施例提供的抑制hif-1α抗腫瘤候選藥物的制備方法反應方程式如下：

下面結合具體實施例對本發明的應用原理作進一步的描述。

實施例1：7-(2-溴乙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮

在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素(2.54g，0.01mol)，無水碳酸鉀(5.52g，0.004mol)及丙酮(100ml)，加熱攪拌回流，再逐滴加入1，2-二溴乙烷(0.04mol)，60℃加熱冷凝回流，溶液變澄清再變渾濁。tcl(薄層色譜法)檢測反應進程，柱色譜純化，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

實施例2：7-(3-溴丙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮

在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素(2.54g，0.01mol)，無水碳酸鉀(5.52g，0.004mol)及丙酮(100ml)，加熱攪拌回流，再逐滴加入1，3-二溴丙烷(0.04mol)，60℃加熱冷凝回流，溶液變澄清再變渾濁。tcl(薄層色譜法)檢測反應進程，柱色譜純化，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

實施例3：7-(4-溴丁氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮

在250ml圓底燒瓶中依次加入白楊素(2.54g，0.01mol)，無水碳酸鉀(5.52g，0.004mol)及丙酮(100ml)，加熱攪拌回流，再逐滴加入1，4-二溴丁烷(0.04mol)，60℃加熱冷凝回流，溶液變澄清再變渾濁。tcl(薄層色譜法)檢測反應進程，柱色譜純化，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。

實施例4：5-羥基-7-(2-(2-氯-1h-苯并[d]咪唑-1-基)乙氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入2-氯苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例1得到的淡黃色固體7-(2-溴乙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.36g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為56％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.71(s，1h)，7.84(dd，j＝8.1，1.6hz，2h)，7.69(d，j＝7.6hz，1h)，7.55–7.47(m，3h)，7.44(d，j＝7.3hz，1h)，7.37–7.26(m，2h)，6.64(s，1h)，6.39(d，j＝2.2hz，1h)，6.28(d，j＝2.3hz，1h)，4.64(t，j＝5.3hz，2h)，4.37(t，j＝5.4hz，2h)。

實施例5:5-羥基-7-(2-(5-硝基-1h-苯并[d]咪唑-1-基)乙氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入6-硝基苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.0552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例1得到的淡黃色固體7-(2-溴乙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.36g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為52％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.75(d，j＝3.9hz，1h)，8.74(s，1h)，8.52(s，1h)，8.33–8.18(m，2h)，7.86(dd，j＝13.7，8.3hz，2h)，7.58(d，j＝9.0hz，1h)，7.52(t，j＝8.1hz，2h)，6.65(s，1h)，6.43(dd，j＝17.4，2.2hz，1h)，6.30(s，1h)，4.74–4.64(m，2h)，4.41(dd，j＝10.4，5.3hz，2h)。

實施例6:5-羥基-7-(2-(5-硝基-1h-苯并[d]咪唑-1-基)丙氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入6-硝基苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例2得到的淡黃色固體7-(3-溴丙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.37g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為47％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.75(d，j＝3.8hz，1h)，8.73(d，j＝2.1hz，1h)，8.41(d，j＝2.1hz，1h)，8.22(dd，j＝13.0，5.8hz，1h)，8.10(d，j＝18.5hz，1h)，7.89–7.83(m，2h)，7.52(dd，j＝15.8，8.4hz，2h)，6.67(d，j＝1.6hz，1h)，6.47(d，j＝2.2hz，1h)，6.41(d，j＝2.2hz，1h)，6.36–6.32(m，1h)，4.57–4.48(m，2h)，4.00(dd，j＝11.8，6.0hz，2h)，2.42(dd，j＝11.1，5.3hz，2h)。

實施例7:5-羥基-7-(2-(2-甲基-1h-苯并[d]咪唑-1-基)丙氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入2-甲基苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例2得到的淡黃色固體7-(3-溴丙氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.37g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為49％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.73(s，1h)，7.94–7.81(m，2h)，7.68(d，j＝6.7hz，1h)，7.57–7.45(m，3h)，7.32–7.27(m，1h)，7.22–7.18(m，2h)，6.67(s，1h)，6.43(d，j＝2.2hz，1h)，6.36(d，j＝2.2hz，1h)，4.37(t，j＝6.6hz，2h)，3.96(t，j＝5.5hz，2h)，2.58(s，3h)，2.38–2.28(m，2h)。

實施例8：5-羥基-7-(2-(1h-苯并[d]咪唑-1-基)丁氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例3得到的淡黃色固體7-(4-溴丁氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.39g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為51％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.71(s，1h)，7.92(s，1h)，7.89–7.83(m，2h)，7.81(d，j＝7.2hz，1h)，7.55–7.47(m，3h)，7.41(d，j＝7.1hz，1h)，7.34–7.25(m，3h)，6.65(s，1h)，6.44(d，j＝2.2hz，1h)，6.33(d，j＝2.2hz，1h)，4.28(t，j＝7.0hz，2h)，4.03(t，j＝6.0hz，2h)，2.11(dt，j＝14.7，7.4hz，2h)，1.85(dd，j＝15.2，5.8hz，2h)。

實施例9：5-羥基-7-(2-(2-甲基-1h-苯并[d]咪唑-1-基)丁氧基)-2-苯基-4h-色烯-4-酮

在100ml三口燒瓶中加入2-甲基苯并咪唑(0.0015mol)，使其溶于30ml丙酮，加入碳酸鉀(0.552g，0.004mol)，攪拌10min后，加入實施例3得到的淡黃色固體7-(4-溴丁氧基)-5-羥基-2-苯基-4h-苯并吡喃酮-4-酮(0.39g，0.001mol)，四丁基溴化銨(tbab)(0.03g，0.0001mol)，加熱至60℃攪拌反應，(tcl檢測反應進程)，用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，然后用無水硫酸鈉干燥，溶劑減壓蒸干后用硅膠柱分離即得到目標化合物，洗脫劑為：甲醇：二氯甲烷＝1:50。淡黃色粉末，產率為48％。¹hnmr(400mhz，cdcl3)δ12.72(s，1h)，7.89–7.84(m，2h)，7.72–7.65(m，1h)，7.52(t，j＝7.2hz，3h)，7.33–7.27(m，1h)，7.24–7.18(m，2h)，6.65(s，1h)，6.44(d，j＝2.2hz，1h)，6.33(d，j＝2.1hz，1h)，4.21(t，j＝7.1hz，2h)，4.03(t，j＝6.0hz，2h)，2.63(s，3h)，2.02(dd，j＝15.0，7.7hz，2h)，1.88(dd，j＝14.8，5.7hz，2h)。

實施例10：本發明化合物的體外抗腫瘤活性試驗

對本發明的化合物進行抗腫瘤細胞增殖活性試驗，試驗方法采用常規的mtt法。

細胞株選用人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2和人乳腺癌細胞mcf-7。培養液為dmem+15％nbs+雙抗。

藥物溶液的配制方法：用dmso(merck)溶解后，加入pbs(-)配成1mmol/ml的溶液或均勻的混懸液，然后用dmso的pbs(-)稀釋，最終濃度分別為384μmol/l、192μmol/l、96μmol/l、48μmol/l、24μmol/l、12μmol/l、6μmol/l、3μmol/l。

將上市的抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶和白楊素以同樣的條件配成對照品溶液。

試驗步驟

96孔板每孔加入濃度為3×10⁴個/ml的細胞懸液100μl，即3000個細胞/孔，置37℃、5％co2培養箱內。24小時后，分別加入樣品液和對照品液，10μl/孔，37℃作用72小時。每孔加入5mg/ml的mtt(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑翁溴化物)溶液20μl，作用4小時后加入溶解液dmso，100μl/孔，置培養箱內，次日用mk-2全自動酶標儀測570nmod值。計算半數抑制濃度ic50。

試驗結果詳見表1，其中，樣品是指新合成的白楊素苯并咪唑衍生物1-21，實施例1-9只是其中一部分化合物的具體合成方法與結果。

表1化合物對腫瘤細胞的半數抑制濃度ic50(單位：μmol/l)

anti-proliferativeactivityofcompoundsagainstthecancercelllines

sd＝standarddeviation,

n.d＝notdetected

以上實驗結果表明，本發明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，白楊素苯并咪唑衍生物對人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人乳腺癌細胞mcf-7有均顯示出一定程度的抑制活性，其中化合物16對人胃癌細胞mgc-803、人肝癌細胞hepg2、人乳腺癌細胞mcf-7效果均比較顯著，故將以16號化合物做進一步的體內抗腫瘤活性試驗。因新合成化合物對人胃癌細胞mgc-803的效果較其他好，故體內抗腫瘤活性試驗中選用鼠源性胃癌細胞mfc建正常小鼠腫瘤模型。實施例11：本發明16號化合物的體內抗腫瘤活性試驗

實驗動物準備：實驗動物38只健康雄性小鼠3～4周齡隨機分為5組：給藥組(高中低三種劑量各7只)、陽性對照組(五氟尿嘧啶)7只、陰性對照組10只，飼以高壓滅菌水和飼料，飼養室相對濕度55％±10％，溫度(22±2)℃，光照12h，明暗交替。

細胞培養過程中所需dmem培養基、胎牛血清等均購自美國gibco公司。顯微外科實驗手術器械購自上海市醫療器械總公司，高壓滅菌后使用。

將凍存的鼠源性胃癌細胞mfc細胞復蘇后，于含10％胎牛血清的dmem培養基中，在37℃、5％co2培養箱中培養、傳代，培養至對數生長期，胰酶消化后用生理鹽水重懸成1×10⁷/ml細胞懸液，在小鼠左側腹側中部皮下注射細胞懸液，形成一皮丘，內含0.2ml細胞懸液(2×10⁶個)，共接種38只，在腫瘤體積達到約125mm³(定義為第0天)時開始實驗。

觀察與取材：所有小鼠模型均自由食水，每兩天觀察小鼠體質量、精神狀態、攝食、活動與營養情況。造模后每兩天觀察小鼠皮下成瘤情況，測量皮下瘤長徑(a)和寬徑(b)，計算體積(v＝a×b²)，以腫瘤體積和生長時間作為坐標，繪制生長曲線。同時記錄成瘤時間，腫瘤形狀，腫瘤表面皮膚情況。2周后，處死所有小鼠并切取腫瘤，觀察腫瘤大小。

實驗結果見圖2，實驗結果16化合物對小鼠腫瘤的生長有較好的抑制作用，并呈濃度依賴性，可進一步對化合物的作用機制進行研究與探討。

圖2為以腫瘤體積和生長時間為坐標，繪制的生長曲線。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，并不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。