本發明屬于細胞培養領域，具體涉及一種cik細胞培養基。
背景技術：
：細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine-inducedkiller，cik)是人外周血單個核細胞在白細胞介素-1、白細胞介素-2、抗cd3單克隆抗體和γ-干擾素聯合刺激下獲得的增殖能力強、細胞毒作用強的免疫效應細胞，在細胞治療領域發揮著不可替代的作用。如何提高cik細胞對腫瘤細胞的殺傷力一直是免疫治療領域研究熱點，因為cik細胞的殺傷力直接關乎細胞治療的療效。技術實現要素：本發明旨在提供一種cik細胞培養基，以培養出更具殺傷力的cik細胞。本發明通過如下技術方案得以實現：一種cik細胞培養基，為含有胎牛血清的rpmi-1640培養基，還含有人胱抑素c，人胱抑素c的質量濃度為20-30mg/l。優選地，胎牛血清體積濃度為10-20％。優選地，還含有抗生素。優選地，抗生素為青霉素和鏈霉素，青霉素的濃度為100u/ml，鏈霉素的濃度為120u/ml。人胱抑素c在提高cik細胞對腫瘤殺傷活性方面的應用。優選地，所述腫瘤為人髓性白血病。本發明優點：本發明提供的培養基可以有效提高cik細胞對腫瘤的殺傷力。附圖說明圖1為不同組cik細胞對k562細胞的殺傷率(％)。具體實施方式為了更好地解釋本發明的技術方案，下面結合具體實施例進一步介紹。實施例中未特別強調的實驗材料均為常規實驗材料，屬于本領域技術人員易于獲得的范疇。實施例1：一、實驗材料rpmi-1640培養液，美國gibco公司；胎牛血清，美國gibco公司；人胱抑素c，桂林英美特生物技術有限公司，貨號kay0001，純度>96％。二、實驗方法1、cik細胞的培養擴增取肝素抗凝的健康志愿者外周血20ml，用淋巴細胞分離液密度梯度離心(2400×g，20min)，輕輕吸取灰白色層的單個核細胞，用生理鹽水洗滌3次，以rpmi-1640培養液調整細胞密度為5×106/ml，加到培養瓶內，每瓶15ml，置37℃、5％co2培養箱中培養2h，輕輕搖勻，吸出懸浮細胞，離心后去上清分為兩組進行培養：(a)常規組：用含有胎牛血清(體積濃度15％)和ifn-γ(1000u/ml)的rpmi-1640培養基調節細胞密度為2.5×106/ml，然后于37℃、5％co2培養箱內培養24h后再加入il-2(500u/ml)、抗cd3單抗(25ng/ml)繼續培養。(b)改進組：用終濃度為25mg/l的人胱抑素c代替ifn-γ，其他同常規組。每隔3d根據細胞濃度補充含有胎牛血清的rpmi-1640培養基，并補充il-2。培養12天后收集cik細胞備用。2、cik細胞的殺傷活性分別將常規組、改進組培養至第12天的cik細胞與對數期的k562細胞按照效靶比5:1和10:1混合，同時設單獨的靶細胞及效應細胞孔，用ldh釋放法，測定490nm的吸光度(a)值，計算各組cik對k562細胞的殺傷率(％)。三、實驗結果培養至第12天常規組、改進組的cik細胞對k562細胞的殺傷率如表1和圖1所示。與常規組cik細胞相比，改進組cik細胞對k562細胞的殺傷率明顯較高。表1不同組cik細胞對k562細胞的殺傷率(％)效靶比5:1殺傷率(％)效靶比10:1殺傷率(％)常規組32.5±4.145.2±4.7改進組47.3±3.962.5±4.3上述結果表明，人胱抑素c可以提高cik細胞的腫瘤殺傷活性。實施例2一種cik細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為15％)的rpmi-1640培養基，還含有人胱抑素c(質量濃度為25mg/l)和青霉素(100u/ml)、鏈霉素(120u/ml)。實施例3一種cik細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為10％)的rpmi-1640培養基，還含有人胱抑素c(質量濃度為20mg/l)和青霉素(100u/ml)、鏈霉素(120u/ml)。實施例4一種cik細胞培養基，為含有胎牛血清(體積濃度為20％)的rpmi-1640培養基，還含有人胱抑素c(質量濃度為30mg/l)和青霉素(100u/ml)、鏈霉素(120u/ml)。本發明證明人胱抑素c可以提高cik細胞的腫瘤殺傷活性，本發明提供的含有人胱抑素c的培養基可以用于誘導培養cik細胞。上述實施例僅用于進一步解釋本發明的技術方案，本領域技術人員應當明白，任何簡單替換或修改均不脫離本發明，本發明的保護范圍并不受限于上述具體實施例。技術特征：技術總結本發明公開了一種CIK細胞培養基，該CIK細胞培養基為含有胎牛血清的RPMI?1640培養基，還含有人胱抑素C，人胱抑素C的質量濃度為20?30mg/L。本發明證明人胱抑素C可以提高CIK細胞的腫瘤殺傷活性，本發明提供的含有人胱抑素C的培養基可以用于誘導培養CIK細胞。技術研發人員：胡攀勇;張鐘祥;黃欣受保護的技術使用者：南京佰泰克生物技術有限公司技術研發日：2017.07.31技術公布日：2017.09.19