本發明涉及重組腺相關病毒生產，具體涉及一種提高重組腺相關病毒生產效率的方法及應用。

背景技術：

1、基因治療是通過向患者細胞中引入、修改或移除特定基因，以修復或補償有缺陷的基因，從而達到治療或預防遺傳性疾病的目的。在基因治療中，由病毒載體介導的核酸遞送是目前基因導入細胞中的主要方式。重組腺相關病毒(raav)載體具有可長時間穩定表達外源基因、不整合至宿主基因組、可感染分裂期/非分裂期細胞、宿主細胞范圍廣、特異性強、免疫源性低等諸多優勢，使其成為安全有效的基因治療工具，也因此被認為是目前最具有發展前景的基因治療載體之一，已經被應用到多種疾病的基因治療和臨床研究中。

2、目前，已經建立多個基于不同宿主細胞系的raav生產平臺，其主要包括：基于hek293/hela細胞的質粒轉染生產系統、基于昆蟲細胞和桿狀病毒的生產系統、基于包裝細胞或誘導型包裝細胞法等。基于hek293細胞的質粒轉染生產系統是目前用于臨床/研究級的raav生產主流技術。該系統采用將多個含raav包裝所有必需元件的質粒共轉染生產細胞的方式，主要流程包括：質粒的制備、生產細胞的擴增、質粒轉染生產細胞、裂解細胞收獲粗病毒液、病毒純化等步驟。

3、然而，由于生產率低等因素限制了raav的規模化生產，使得raav的產量遠落后于臨床和商業用途所需的劑量，從而影響基因治療藥物的應用。因此，研究開發提高raav產量的生產技術以有效促進raav的規模化生產，對raav介導的基因治療具有重要意義。

技術實現思路

1、本發明的目的在于克服現有技術的不足之處而提供一種提高重組腺相關病毒生產效率的方法及應用。

2、為實現上述目的，本發明采取的技術方案如下：

3、第一方面，本發明提供了一種提高重組腺相關病毒生產效率的方法為：向細胞培養液中加入促生產試劑；

4、所述促生產試劑包括如式(i)或式(ii)所示的化合物及其衍生物中的至少一種；

5、

6、本發明的方法可使哺乳動物細胞生產raav產量顯著提高，從而降低生產成本，有效促進raav的規模化生產，對raav介導的基因治療具有重要意義。

7、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的優選實施方式，所述衍生物包括如式(i)或式(ii)所示的化合物的立體異構體、互變異構體、代謝產物、代謝前體、前藥、溶劑化物、溶劑化物的鹽、結晶、藥學上可接受的鹽中的至少一種。

8、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的優選實施方式，向細胞培養液中加入docetaxel和/或abemaciclib。

9、多西他賽(docetaxel)是一種紫杉烷類抗腫瘤藥及免疫調節劑，屬于m期周期特異性藥物。阿貝西利(abemaciclib)是一種細胞周期蛋白依賴性激酶cdk4/6抑制劑，常用于hr+/her2-的晚期或復發乳腺癌治療。本發明方法將其加入細胞培養液中，可使哺乳動物細胞生產raav產量提高約50％-70％。

10、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的進一步的優選實施方式，所述docetaxel的終濃度為0.5μm-5.0μm。

11、優選地，所述docetaxel的終濃度為0.5μm、0.6μm、0.7μm、0.8μm、0.9μm、1.0μm、1.5μm、2.0μm、2.5μm、3.0μm、3.5μm、4.0μm、4.5μm、5.0μm中的任意一者或兩者的范圍值。

12、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的進一步的優選實施方式，所述abemaciclib的終濃度為5.0μm-50μm。

13、優選地，所述docetaxel的終濃度為5.0μm、6.0μm、7.0μm、8.0μm、9.0μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、45μm、50μm中的任意一者或兩者的范圍值。

14、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的優選實施方式，所述促生產試劑在質粒轉染細胞前加入所述細胞培養液。

15、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的優選實施方式，所述細胞為哺乳動物細胞。

16、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的進一步的優選實施方式，所述細胞為hek293、hek衍生細胞、cho、cho衍生細胞、hela細胞、vero細胞、sf-9細胞中的任一種。

17、作為本發明所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法的更進一步的優選實施方式，所述細胞采用懸浮培養和/或貼壁培養。

18、第二方面，本發明將所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法在raav生產中應用。

19、與現有技術相比，本發明的有益效果為：

20、本發明的方法將本發明方法將多西他賽(docetaxel)或阿貝西利(abemaciclib)加入細胞培養液中，可使哺乳動物細胞生產raav產量提高約50％-70％。從而降低生產成本，有效促進raav的規模化生產，對raav介導的基因治療具有重要意義。

技術特征：

1.一種提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，向細胞培養液中加入促生產試劑；

2.根據權利要求1所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述衍生物包括如式(i)或式(ii)所示的化合物的立體異構體、互變異構體、代謝產物、代謝前體、前藥、溶劑化物、溶劑化物的鹽、結晶、藥學上可接受的鹽中的至少一種。

3.根據權利要求1所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，向細胞培養液中加入docetaxel和/或abemaciclib。

4.根據權利要求3所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述docetaxel的終濃度為0.5μm-5.0μm。

5.根據權利要求3所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述abemaciclib的終濃度為5.0μm-50μm。

6.根據權利要求1所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述促生產試劑在質粒轉染細胞前加入所述細胞培養液。

7.根據權利要求1-6任一所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述細胞為哺乳動物細胞。

8.根據權利要求7所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述細胞為hek293、hek衍生細胞、cho、cho衍生細胞、hela細胞、vero細胞、sf-9細胞中的任一種。

9.根據權利要求8所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法，其特征在于，所述細胞采用懸浮培養和/或貼壁培養。

10.權利要求1-9任一項所述的提高重組腺相關病毒生產效率的方法在raav生產中的應用。

技術總結
本發明屬于重組腺相關病毒生產技術領域，公開了一種提高重組腺相關病毒生產效率的方法及應用。本發明提高重組腺相關病毒生產效率的方法為：向細胞培養液中加入促生產試劑；所述促生產試劑包括如式(I)或式(II)所示的化合物及其衍生物中的至少一種。本發明的方法可使哺乳動物細胞生產rAAV產量顯著提高，從而降低生產成本，有效促進rAAV的規模化生產，對rAAV介導的基因治療具有重要意義。

技術研發人員：李華鵬,韓靖鸞,卜曄,盛龍祥,陳韻儀,黃薇曉,陳小曲
受保護的技術使用者：廣州派真生物技術有限公司
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28