本發明涉及硬尖神香草提取物，是一種硬尖神香草乙醇提取物中的二萜類成分及其提取方法和應用，還涉及所述硬尖神香草乙醇提取物中的二萜類成分在制備預防腫瘤或/和抗腫瘤藥物中的應用，所述硬尖神香草乙醇提取物中的二萜類成分即為化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮。

背景技術：

1、萜類化合物是天然產物中的一大類，也是結構種類最為復雜、生物活性最為多樣的天然產物類別之一。目前，萜類化合物可從神香草屬植物中分離得到的。

2、硬尖神香草為唇形科神香草屬植物?！蹲⑨t典》：“止咳化痰，消炎平喘，赤膚生輝，消除創跡，軟堅退腫，消除耳鳴，活血去瘀，驅除腸蟲。主治胸膜炎，肺炎，哮喘，百日咳，面色蒼白，面部創跡，硬性炎腫，耳鳴，眼白血瘀，腸道生蟲?！薄栋莸匾浪帟罚骸跋灼酱?，止咳化痰，祛寒止痛，通肝軟脾，利尿消腫，消除毒蟲之毒，驅除腸蟲的作用。主治肺炎，氣急哮喘，久咳不愈，乃孜來感冒，牙痛，坐骨神經痛，腰痛，肝阻脾腫，水腫，毒蟲咬傷?？梢?，硬尖神香草全草可入藥，具有清熱解毒，消炎作用。同時，現代藥理學研究表明其所含的萜類化合物成分具有包括中樞神經系統作用、心血管系統作用、抗腫瘤、抗病毒等在內的廣泛的藥理活性。

3、授權公告號為cn115010589b的中國專利申請文獻公開了一種神香草提取物中大苞松香烷二萜類成分及其制備方法和應用，其中，神香草提取物中大苞松香烷二萜類成分為所述nepetabratee的簡稱。但是其只涉及了nepetabratee對脂多糖(lps)刺激的raw264.7細胞具有較強的抗炎作用，從而使得nepetabratee能夠作為制備預防炎癥藥物和抗炎藥物的應用。

4、公開號為cn115010604a的中國專利申請文獻公開了一種神香草中二萜成分及其制備方法和應用，其中，神香草中二萜成分為所述nepetabratei的簡稱，其通過動物實驗表明，本發明所述的nepetabratei具有顯著的抗炎、抑制炎癥的作用效果，能夠起到協同抗炎的作用，療效確切，安全性高，原料易得，可在制備具有抗炎作用的藥物中進行應用。但是其只涉及了nepetabratei在制備抗炎作用的藥物中的應用。

5、因此，開發和利用硬尖神香草的萜類體化合物，進一步挖掘其潛在的藥用價值，并對其單體化合物的結構和理化性質進行確定和表征，系統評價萜類化合物抗腫瘤的能力對于開發利用硬尖神香草植物具有重要意義。

技術實現思路

1、本發明提供了一種硬尖神香草乙醇提取物中的二萜類成分及其提取方法和應用，克服了上述現有技術之不足，其首次公開了化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮，其對hepg-2細胞和hela細胞具有較強的抑制作用，從而使其能夠作為制備預防肝癌或/和宮頸癌藥物和抗肝癌或/和宮頸癌藥物。

2、本發明的技術方案之一是通過以下措施來實現的：一種化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮，化學結構式為

3、。

4、下面是對上述發明技術方案之一的進一步優化或/和改進：

5、上述按照下述方法提取得到：

6、第一步，將硬尖神香草地上部分粉碎過篩并加入乙醇，在室溫下浸泡后加熱回流提取，合并每次回流提取液并減壓回收、濃縮，得硬尖神香草總浸膏；

7、第二步，將硬尖神香草總浸膏用水分散成混懸液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯進行萃取，將萃取液濃縮，分別得到各部位浸膏；

8、第三步，取石油醚部位浸膏用硅膠柱色譜梯度洗脫分離后得到8個餾分；

9、第四步，將得到的8個餾分中第3個餾分經高效液相色譜梯度洗脫后純化分離，并收集洗脫物，在第23分鐘處得到化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮。

10、上述第一步中，每1g硬尖神香草地上部分加入8ml至12ml乙醇。

11、上述第一步中，浸泡時間為4.5小時至5.5小時，加熱溫度為40℃至60℃，回流提取次數為3次，每次回流提取時間為2小時至3小時。

12、上述第三步中，硅膠柱色譜梯度洗脫液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的體積比依次為1:0、100:1、40:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1。

13、上述第四步中，高效液相色譜梯度洗脫的洗脫液為甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的體積比為75:25。

14、本發明的技術方案之二是通過以下措施來實現的：一種化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮的提取方法，按照下述方法進行：

15、第一步，將硬尖神香草地上部分粉碎過篩并加入乙醇，在室溫下浸泡后加熱回流提取，合并每次回流提取液并減壓回收、濃縮，得硬尖神香草總浸膏；

16、第二步，將硬尖神香草總浸膏用水分散成混懸液后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯進行萃取，將萃取液濃縮，分別得到各部位浸膏；

17、第三步，取石油醚部位浸膏用硅膠柱色譜梯度洗脫分離后得到8個餾分；

18、第四步，將得到的8個餾分中第3個餾分經高效液相色譜梯度洗脫后純化分離，并收集洗脫物，在第23分鐘處得到化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮。

19、下面是對上述發明技術方案之二的進一步優化或/和改進：

20、上述第一步中，每1g硬尖神香草地上部分加入8ml至12ml乙醇。

21、上述第一步中，浸泡時間為4.5小時至5.5小時，加熱溫度為40℃至60℃，回流提取次數為3次，每次回流提取時間為2小時至3小時。

22、上述第三步中，硅膠柱色譜梯度洗脫液包括氯仿和甲醇，氯仿和甲醇的體積比依次為1:0、100:1、40:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1。

23、上述第四步中，高效液相色譜梯度洗脫的洗脫液為甲醇和水的混合液，其中，甲醇和水的體積比為75:25。

24、本發明的技術方案之三是通過以下措施來實現的：一種化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮在制備預防肝癌或/和宮頸癌藥物中的應用。

25、本發明的技術方案之四是通過以下措施來實現的：一種化合物（1r，5r，6'r，7a'r）-6,6,7'，7'-四甲基四氫螺[二環[3.1.1]庚烷-2,2'-[6,7a]甲基苯并呋喃]-3,4'（5'h）-二酮在制備抗肝癌或/和宮頸癌藥物中的應用。

26、本發明首次公開了該化合物,并通過體外抗腫瘤藥效學實驗,發現其對hepg-2細胞和hela細胞具有較強的抑制作用，從而使其能夠作為制備預防肝癌或/和宮頸癌藥物和抗肝癌或/和宮頸癌藥物。