本發明屬于中藥提取領域，具體涉及一種從凹葉瑞香枝葉中黃酮類化合物及其提取方法和在制備抗炎的藥物中的應用。

背景技術：

1、瑞香科(thymelaeaceae)瑞香屬(daphne)植物作為我國傳統的藥用植物，種類約有65種，廣泛分布于我國陜西、甘肅、寧夏、青海等地。該屬植物性溫、味辛苦，具有祛風濕，活血止痛等功效。祖師麻為瑞香科(thymelaeaceae)瑞香屬(daphne)植物黃瑞香(daphnegiraldii?nitsche)的根皮和莖皮，亦可用同屬植物唐古特瑞香(daphne?tanguticamaxim)、凹葉瑞香(daphne?retusa?hemsl.)、長白瑞香(daphne?koreana?nakai.)和結香屬植物結香(edgeworthia?chrysantha?lindl.)入藥。凹葉瑞香主要用于治療胃痛、頭痛、四肢麻木、風濕痹痛、跌打損傷、關節炎、類風濕性關節痛等癥。早至上世紀七十年代，學者就對祖師麻入藥植物的化學成分進行研究，從中分離出的香豆素、黃酮、木脂素、二萜等化合物結構新穎、生物活性多樣，因此，從中深入探索具有藥用價值的活性成分對該藥物的研發具有重要意義。(扈曉佳,金慧子,嚴嵐等.凹葉瑞香的化學成分研究(英文)[j].天然產物研究與開發,2011,23(01):20-24.王明偉,李成義,李波.祖師麻生藥學研究進展[c]；中華中醫藥學會中藥鑒定學術研討會,中國中西醫結合學會中藥專業委員會全國中藥學術研討會.2007.)基于橄欖葉瑞香(daphne?oleoides)在民間可用于治療類風濕性關節炎和腰痛，erdem等[66]對從橄欖葉瑞香地上部分分離的化合物進行抗炎活性研究。實驗結果顯示，芫花瑞香寧，1,2-dehydrodaphnetoxin和瑞香素對白細胞介素-1和腫瘤壞死因子的生物合成具有抑制作用。鄭維發等[67]建立炎癥小鼠和大鼠模型，分別評價不同劑量芫花根乙醇提取物的抗炎活性。結果表明，在40mg/kg的劑量下，芫花根提取物可抑制血管通透性的增加并抑制角叉菜誘導的大鼠足水腫；在30mg/kg劑量下，芫花根提取物能抑制大鼠肉芽腫，并增強小鼠網狀內皮系統的吞噬作用。進一步研究發現，芫花根乙醇提取物還能抑制脂質過氧化反應和腫瘤壞死因子、白細胞介素的產生，增強超氧化物歧化酶和過氧化氫酶的活性，進而發揮抗炎作用(e,taninaka?h,takaishi?y,et?al.in?vitroinhibitory?effects?of?daphne?oleoides?ssp.oleoides?on?inflammatory?cytokinesand?activity-guided?isolation?of?active?constituents[j].cytokine,2001,13:359-364；鄭維發,王莉,石楓.芫花根乙醇提取物的抗炎活性[j].中草藥,2004,25:66-73.)。為了將凹葉瑞香的藥用價值發揮到最大，對凹葉瑞香的枝葉進行了系統的成分研究。

技術實現思路

1、本發明目的在于提供一種從凹葉瑞香枝葉中黃酮類化合物及其提取方法和在制備抗炎的藥物中的應用。

2、為實現上述目的，本發明采用技術方案為

3、一種凹葉瑞香枝葉中黃酮類化合物，黃酮類化合物為如通式(ⅰ)、(ⅱ)、(iii)、(ⅳ)所示的化合物中的任一種或該化合物的異構體、或該化合物在藥學上可接受的鹽；

4、

5、凹葉瑞香枝葉中黃酮類化合物的制備方法，以凹葉瑞香的干燥枝葉為原料經提取并純化，即分別獲得通式(ⅰ)、(ⅱ)、(iii)、(ⅳ)所示的化合物。

6、進一步的說，

7、(1)以凹葉瑞香的干燥枝葉為原料，加入原料8～15質量倍的乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次提取2～4小時，合并得到提取液，減壓回收溶劑，濃縮后得到總浸膏；

8、(2)將總浸膏分散到其5～10質量倍的水中，使用石油醚、乙酸乙酯分別進行萃取，得到石油醚層、乙酸乙酯層和水層；

9、(3)收集乙酸乙酯層萃取濃縮液經硅膠柱色譜分離，以體積比為100:0～0:1的二氯甲烷-甲醇為洗脫劑梯度洗脫，收集體積比100:1的餾分e1、體積比50:1的餾分e2、體積比20:1的餾分e3、體積比10:1的餾分e4；

10、(4)將上述收集的濃縮餾分e2使用體積比為80:1-1:0的二氯甲烷-甲醇進行硅膠柱色譜分離，純化得到通式(ⅰ)、通式(iii)、(ⅳ)所示的化合物；

11、(5)將上述收集的濃縮餾分e3使用體積比為30:1-1:0的二氯甲烷-甲醇進行硅膠柱色譜，進一步純化得到通式(ⅱ)所示化合物。

12、所述步驟(4)中將濃縮餾分e2使用體積比為80:1-1:0的二氯甲烷-甲醇進行硅膠柱色譜分離，收集二氯甲烷和甲醇的體積比分別為20:1的餾分，記為e22；餾分e22濃縮后以含濃度為80％-100％甲醇的水溶液作為洗脫液經mci色譜分離，收集80％甲醇水溶液洗脫下來的餾分，記為e221；餾分e221濃縮后經過ods柱色譜分離，分別以體積比為2:8、4:6、6:4、7:3、1:0的甲醇-水為洗脫劑梯度洗脫，收集體積比為4:6的餾分，記為e2212；將餾分e2212濃經制備型hplc色譜，以體積比為30:70的甲醇-水為流動相，進行純化，得到通式(ⅰ)(tr＝23.8min)、通式(iii)(tr＝31.2min)、(ⅳ)(tr＝39.0min)所示的化合物。

13、所述步驟(5)中收集濃縮餾分e3使用體積比為30:1-1:0的二氯甲烷-甲醇經硅膠柱色譜分離，收集二氯甲烷和甲醇的體積比為15:1的餾分，記為e32；餾分e32濃縮后以體積比為10：1的二氯甲烷和甲醇的混合液作為洗脫液經硅膠柱色譜分離，收集餾分，記為e322；餾分e322濃縮后經過ods柱色譜分離，分別以體積比為1:9、3:7、5:5、7:3、9:1的甲醇-水為洗脫劑梯度洗脫，收集體積比為3:7的餾分，記為e3222；餾分e3222濃經制備型hplc色譜，以體積比為35:65的甲醇-水為流動相，進行純化，得到通式(ⅱ)所示化合物。

14、一種藥物組合物，包括所述的黃酮類化合物、或該化合物的異構體、或該化合物在藥學上可接受的鹽。

15、一種藥物制劑，以所述的黃酮類化合物、或該化合物的異構體、或該化合物在藥學上可接受的鹽；或所述組合物為活性成分，以及藥學上可接受的助劑，其中，活性成分占制劑質量的0.1-99％。

16、所述制劑的劑型為片劑、膠囊劑、粉劑、糖漿劑或針劑。

17、一種化合物、所述組合物或所述制劑中的應用，所述化合物、所述組合物或所述制劑在制備抗炎的藥物中的應用。

18、本發明的優點：

19、本發明的黃酮類化合物或其異構體、在藥學上可接受的鹽或包含該化合物的藥物組合物對在lps造模后對小鼠單核巨噬細胞raw?264.7抑制no生成作用顯著，可以用于制備抗炎藥物。本發明進一步豐富凹葉瑞香枝葉活性物質的結構多樣性，在此基礎上，為后續得到的單體化合物進行相關生物活性測試奠定基礎，為新藥開發提供活性先導化合物，同時也為凹葉瑞香枝葉的深層次研究與開發提供理論依據。