1.一種ythdf熒光探針,其特征在于,所述ythdf熒光探針化學(xué)式為5'-fam-ccgg(m6a)cugu,結(jié)構(gòu)為式i所示:
2.一種權(quán)利要求1所述ythdf熒光探針的制備方法,其特征在于,所述制備方法包括以下步驟:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)中,所述固相肽合成技術(shù),采用的固相載體為控制孔徑玻璃球cpg,合成單元為a、u、c、g四種亞磷酰胺單體;所述固相肽合成技術(shù),包括脫保護(hù)、縮合、氧化和蓋帽四個(gè)反應(yīng)循環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,步驟(1)中,固相合成完成后,引入m6a修飾的亞磷酰胺單體,將合成柱轉(zhuǎn)至離心管,加入氨氣甲醇溶液進(jìn)行氨解,氨解處理結(jié)束后加入脫保護(hù)試劑二甲基乙醇胺氫氟酸鹽,以除去rna上叔丁基二甲氧基硅基tbdms保護(hù)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述酰胺縮合反應(yīng)的溫度為室溫,反應(yīng)時(shí)間為12~24h。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法,其特征在于,步驟(2)中,所述酰胺縮合反應(yīng),采用的有機(jī)溶劑為四氫呋喃、乙腈、n,n-二甲基甲酰胺或二甲亞砜中的一種或幾種,采用的縮合劑為2-(7-氮雜苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯、1-羥基苯并三唑、n-羥基-7-氮雜苯并三氮唑、六氟磷酸苯并三唑-1-氧基三(二甲氨基)磷中的一種或幾種。
7.一種權(quán)利要求1所述ythdf熒光探針在ythdf蛋白配體篩選中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述應(yīng)用為,將ythdf熒光探針、包含yth結(jié)合域的蛋白和待測化合物混合得混合物;利用熒光偏振技術(shù)測定混合物的偏振值,根據(jù)偏振值確認(rèn)待測化合物為ythdf蛋白的配體。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,當(dāng)偏振值降低大于檢測窗的25%即可判定待測化合物為ythdf蛋白的配體。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述應(yīng)用,采用的緩沖溶液為硼酸硼砂緩沖液na2b4o7-h3bo3、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、磷酸鹽緩沖液或n-2-羥乙基哌嗪-n'-2-乙磺酸緩沖液;緩沖液體系的ph為7.4~7.8;緩沖溶液離子強(qiáng)度為50~100mm,探針濃度為90~120nm。