本發明屬于生物醫藥，更具體地說，涉及adgrg6基因的rnai干擾系統及其應用。

背景技術：

1、胰腺癌是全球范圍內最致命的惡性腫瘤之一，其發病率以每年0.6%-1%的速率持續上升。因胰腺癌起病隱匿，部分胰腺癌患者初診時已是不可切除或存在遠處轉移。即使是早期胰腺癌患者在接受手術聯合術后化療后，大部分患者在三年內仍會經歷疾病復發。并且復發時，往往為全身性多處的，治療臨床效果不佳。mfolfirinox方案、nalirifox方案及ag方案已成為轉移性胰腺癌患者的一線標準方案。但由于晚期胰腺癌患者一般情況較差，化療耐受性不佳，治療方案局限于傳統化療，療效有限且副作用較大，患者臨床獲益甚微。其次，與其他惡性腫瘤微環境相比，胰腺癌中樹突狀細胞和效應t細胞稀少，因此，胰腺癌免疫療法的臨床獲益僅限于存在錯配修復基因缺陷的一小部分患者。綜上，進一步研究胰腺癌的發生發展機制具有重要意義。

2、粘附g蛋白偶聯受體g6（adhesion?g?protein-coupled?receptor?g6，adgrg6）屬于g蛋白偶聯受體（g-protein-coupled?receptors，gpcr），gpcr是人類基因組中最大的蛋白質超家族，因其在調節和激活腫瘤相關信號通路方面發揮的關鍵作用，被認為是腫瘤重要的早期診斷生物標志物。并且超過40%的藥物均為靶向gpcr及其相關途徑，因此，針對于gpcr相關藥物的開發具有巨大潛力。

3、現有研究在2.7%的癌癥序列中發現了adgrg6內含子6的突變，adgrg6的拷貝數變異與患者存活率降低有關。另一項研究顯示adgrg6增強子在膀胱移行細胞癌和乳腺腺癌中頻繁突變。膀胱癌患者中，浸潤性膀胱癌患者發生adgrg6體細胞突變的概率顯著高于非浸潤性膀胱癌，提示adgrg6內含子突變與腫瘤進展相關。尿路上皮癌中，adgrg6表達減少降低了內皮細胞募集和誘導管形成的能力。肺癌中，adgrg6通過與其他癌基因融合促癌。adgrg6同樣促進胰腺癌細胞增殖及在急性髓系白血病患者起到特異性致瘤作用。一項基于生物信息學為基礎的研究表明adgrg6轉錄水平的表達在胰腺癌中可能與預后相關（https://doi.org/10.1186/s13020-021-00534-y）。此外，已有研究表明adgrg6?可以通過gai直接激活?akt-mtor?信號通路促進腫瘤惡性生物學行為（https://doi.org/10.1073/pnas.2117004119）。現有研究已表明gai3表達升高促進了胰腺癌細胞的生長（https://doi.org/10.1038/s41419-024-07079-6）。

4、因此，檢測adgrg6在胰腺癌中的表達，解析其與各臨床指標的相關性，明確adgrg6促進胰腺癌進展的用及分子機制，探究靶向adgrg6在胰腺癌治療中的應用，對胰腺癌的臨床診斷和治療突破具有重要的意義。

技術實現思路

1、針對現有技術存在的上述問題，本發明所要解決的技術問題在于提供adgrg6基因的rnai干擾系統。本發明還要解決的技術問題在于提供adgrg6基因的rnai干擾系統的應用，用于制備用于治療胰腺癌的藥物。

2、為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案如下：

3、adgrg6基因的rnai干擾系統，包括敲低系統和敲除系統；所述的敲低系統序列如下所示：

4、①adgrg6-rnai?(120823-1)-a：

5、5’-ccggcctcactttcatcagctatatctcgagatatagctgatgaaagtgaggtttttg-3’，

6、adgrg6-rnai?(120823-1)-b：

7、5’-aattcaaaaacctcactttcatcagctatatctcgagatatagctgatgaaagtgagg-3’；

8、和/或②adgrg6-rnai?(120824-1)-a：

9、5’-ccggccaagcaataatgaatcgtatctcgagatacgattcattattgcttggtttttg-3’，

10、adgrg6-rnai?(120824-1)-b：

11、5’-aattcaaaaaccaagcaataatgaatcgtatctcgagatacgattcattattgcttgg-3’；

12、所述的敲除系統，序列如下所示：

13、adgrg6-sgrna?(14104-1)-a：5’-caccgctgaatgatataaccggtgg-3’，

14、adgrg6-sgrna?(14104-1)-b：5’-aaacccaccggttatatcattcag-3’。

15、adgrg6基因的rnai干擾系統在制備用于治療胰腺癌的藥物中的應用，所述adgrg6基因的rnai干擾系統包括敲低系統和敲除系統。

16、所述敲低系統的靶序列如下所示：

17、①adgrg6-rnai?(120823-1)：cctcactttcatcagctatat，

18、和/或②adgrg6-rnai?(120824-1)：ccaagcaataatgaatcgtat。

19、所述敲除系統的靶序列如下所示：

20、adgrg6-sgrna?(14104-1)：ctgaatgatataaccggtgg。

21、所述的敲低系統序列為：

22、①adgrg6-rnai?(120823-1)-a：

23、5’-ccggcctcactttcatcagctatatctcgagatatagctgatgaaagtgaggtttttg-3’，

24、adgrg6-rnai?(120823-1)-b：

25、5’-aattcaaaaacctcactttcatcagctatatctcgagatatagctgatgaaagtgagg-3’；

26、和/或②adgrg6-rnai?(120824-1)-a：

27、5’-ccggccaagcaataatgaatcgtatctcgagatacgattcattattgcttggtttttg-3’，

28、adgrg6-rnai?(120824-1)-b：

29、5’-aattcaaaaaccaagcaataatgaatcgtatctcgagatacgattcattattgcttgg-3’。

30、所述的敲除系統序列為：

31、adgrg6-sgrna?(14104-1)-a：5’-caccgctgaatgatataaccggtgg-3’，

32、adgrg6-sgrna?(14104-1)-b：5’-aaacccaccggttatatcattcag-3’。

33、adgrg6基因的rnai干擾系統在制備用于治療胰腺癌的藥物中的應用，為抑制胰腺癌細胞增殖、遷移、侵襲以及生長。

34、adgrg6基因的在制備用于治療胰腺癌的藥物中的應用，以adgrg6基因為靶點設計和制備藥物。

35、相比于現有技術，本發明的有益效果為：

36、1）本發明構建adgrg6?shrna敲減載體、adgrg6?crispr-cas9?敲除載體、adgrg6過表達載體，分別將adgrg6?shrna敲減載體、adgrg6?crispr-cas9?敲除載體、adgrg6過表達載體轉染人原代胰腺癌細胞（primary?pancreatic?cancer-1,?pripc-1），構建表達adgrg6-shrna穩轉胰腺癌細胞、構建高表達野生型adgrg6（adgrg6-oe）的胰腺癌細胞、構建crispr-?adgrg6-ko的pripc-1胰腺癌細胞。結果表明，adgrg6-shrna、adgrg6-oe、crispr-adgrg6-ko三類穩轉細胞株中adgrg6的蛋白表達均按照預期呈現。敲低敲除adgrg6抑制人原代胰腺癌細胞pripc-1的集落形成、增殖、侵襲與遷移能力，相反的，過表達adgrg6增強了胰腺癌細胞的增殖、遷移與侵襲能力。

37、2）本發明通過皮下注射表達adgrg6-shrna（“sh-adgrg6-s1”和“sh-adgrg6-s2”）以及非特異性對照?shrna?（“shc”）的pripc-1細胞，建立攜帶pripc-1異種移植物的雌性balb/c裸鼠（每只裸鼠注射包含1×106個pripc-1細胞的0.2毫升10%fbs?dmem/matrigel溶液）。結果表明，與非特異性對照?shrna?（“shc”）?相比，sh-adgrg6-s1?或?sh-adgrg6-s2pripc-1?同種異體移植物腫瘤的體積和重量顯著小于?shc?pripc-1?異種移植物。重要的是，在三個實驗組中未觀察到體重的顯著差異，表明對裸鼠健康沒有不利影響。