本發明涉及生物，特別是涉及馬鈴薯體內分子伴侶蛋白gst-hpf的制備方法及應用。

背景技術：

1、分子伴侶，在細胞中有重要的生理功能。蛋白質在形成有功能的空間結構的過程中容易產生錯誤折疊，中間體會將疏水基團暴露出來，導致蛋白質折疊錯誤，不能發揮其功能。分子伴侶可通過一系列反應確保蛋白質正常折疊。此外，分子伴侶參與生物體內的應激反應，可以復性蛋白質，維持蛋白質的穩態，可以提高植物對環境的抗性。植物體內雖然存在大量的分子伴侶蛋白，但是仍存在許多分子伴侶基因未被克隆鑒定出來。另外，許多蛋白都沒有表達純化成產品。

2、本發明利用分子生物學的方法，從馬鈴薯體內克隆了一個編碼分子伴侶蛋白基因hpf，構建了pgex4t-3-gst-hpf載體，轉化大腸桿菌bl21菌株后，通過iptg誘導，在上清液中獲得大量gst-hpf蛋白。經過蛋白純化后獲得純的gst-hpf蛋白，證明其可以在45℃高溫條件下，幫助蘋果酸脫氫酶mdh加工折疊，延緩其高溫條件下蛋白的變性。并且蛋白的折疊效率跟市場應用的groel蛋白相媲美。因此，本發明提供的蛋白有望應用于分子伴侶方面的研究，在幫助蛋白質折疊方面表現出較高的應用潛能，對加熱后的蛋白質變性導致的液體渾濁也大有改善。

技術實現思路

1、本發明的目的是提供馬鈴薯體內分子伴侶蛋白gst-hpf的制備方法及應用，以解決上述現有技術存在的問題。

2、技術方案一：gst-hpf蛋白在促進蘋果酸脫氫酶mdh折疊中的應用，所述gst-hpf蛋白的制備方法包括：利用hpf構建pgex4t-3-gst-hpf載體，轉化大腸桿菌bl21菌株后，通過iptg誘導，得到所述gst-hpf蛋白，所述hpf的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

3、進一步地，所述hpf基因來源于馬鈴薯。

4、進一步地，所述hpf的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

5、技術方案二：一種促進蘋果酸脫氫酶mdh折疊的分子伴侶質粒，含有分子伴侶蛋白gst-hpf，其中hpf基因的核酸序列如seq?id?no.2所示。

6、進一步地，所述質粒的載體為pgex4t-3。

7、技術方案三：所述的分子伴侶質粒在促進蘋果酸脫氫酶mdh正確折疊中的應用。

8、本發明公開了以下技術效果：

9、本發明公開了馬鈴薯體內分子伴侶蛋白gst-hpf的制備方法及應用。從馬鈴薯體內克隆了一個編碼分子伴侶蛋白基因hpf，構建了pgex4t-3-gst-hpf載體。轉化大腸桿菌bl21菌株后，通過iptg誘導，在上清液中獲得大量gst-hpf蛋白。經過蛋白純化后獲得純的gst-hpf蛋白，并驗證其可以在45℃高溫條件下，幫助蘋果酸脫氫酶mdh加工折疊，延緩其高溫條件下蛋白的變性。并且蛋白的折疊效率跟市場應用的groel蛋白相媲美。本發明提供的蛋白有望應用于分子伴侶方面的研究，在幫助蛋白質折疊方面表現出較高的應用潛能，對加熱后的蛋白質變性導致的液體渾濁也大有改善。

技術特征：

1.gst-hpf蛋白在促進蘋果酸脫氫酶mdh折疊中的應用，其特征在于，所述gst-hpf蛋白的制備方法包括：利用hpf構建pgex4t-3-gst-hpf載體，轉化大腸桿菌bl21菌株后，通過iptg誘導，得到所述gst-hpf蛋白，所述hpf的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述hpf基因來源于馬鈴薯。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述hpf的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

4.一種促進蘋果酸脫氫酶mdh折疊的分子伴侶質粒，其特征在于，含有分子伴侶蛋白gst-hpf，其中hpf基因的核酸序列如seq?id?no.2所示。

5.根據權利要求4所述的分子伴侶質粒，其特征在于，所述質粒的載體為pgex4t-3。

6.權利要求4或5所述的分子伴侶質粒在促進蘋果酸脫氫酶mdh正確折疊中的應用。

技術總結
本發明公開了馬鈴薯體內分子伴侶蛋白GST?HPF的制備方法及應用，屬于生物技術領域。本發明提供了GST?HPF蛋白在促進蘋果酸脫氫酶MDH折疊中的應用，所述GST?HPF蛋白的制備方法包括：利用HPF序列構建pGEX4T?3?GST?HPF載體，轉化大腸桿菌BL21菌株后，通過IPTG誘導，得到所述GST?HPF蛋白，所述HPF的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。所述HPF基因來源于馬鈴薯。所述HPF的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發明提供的蛋白有望應用于分子伴侶方面的研究，在幫助蛋白質折疊方面表現出較高的應用潛能，對加熱后的蛋白質變性導致的液體渾濁也大有改善。

技術研發人員：管培燕,邱振楠,孫培楠,王麗燕,崔培培,陳清帥,胡林雙,張霞,林彩彩,鄭雙雙
受保護的技術使用者：德州學院
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24