本公開(kāi)涉及基因工程，具體地，涉及一種提高堿性磷酸酶活性的方法、具有堿性磷酸酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉(zhuǎn)化有該基因的轉(zhuǎn)化體、制備堿性磷酸酶的方法和堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、堿性磷酸酶是一種廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中的一種非特異性磷酸單酯酶，在堿性條件下水解磷酸酯類(lèi)化合物，生成無(wú)機(jī)磷酸，此外具有催化磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)的活性。

2、堿性磷酸酶在酶聯(lián)免疫測(cè)定、生物傳感器、非同位素探針、雜交和測(cè)序、有機(jī)磷農(nóng)藥降解方面有廣泛應(yīng)用。目前商業(yè)堿性磷酸酶存在熱穩(wěn)定性差的嚴(yán)重問(wèn)題，亟需一種提高堿性磷酸酶的活性的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開(kāi)的目的是提供一種提高堿性磷酸酶活性的方法、具有堿性磷酸酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉(zhuǎn)化有該基因的轉(zhuǎn)化體、制備堿性磷酸酶的方法和堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本公開(kāi)第一方面提供一種提高堿性磷酸酶活性的方法，該方法包括將野生型的待突變氨基酸殘基片段進(jìn)行突變改造，所述野生型堿性磷酸酶的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述待突變氨基酸殘基片段為第354位-第369位，所述突變改造為氨基酸殘基片段的取代。

3、可選地，所述突變改造包括：將第354位-第369位的氨基酸殘基片段aeqeawlfdnlsrsea突變?yōu)閗dqeqwvesklassst。

4、本公開(kāi)第二方面提供一種具有堿性磷酸酶活性的蛋白，所述蛋白為將野生型堿性磷酸酶的待突變氨基酸殘基片段進(jìn)行突變改造，所述野生型堿性磷酸酶的氨基酸序列如seq?id?no.2所示；所述待突變氨基酸殘基片段為第354位-第369位，所述突變改造為氨基酸殘基片段的取代。

5、可選地，所述蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

6、本公開(kāi)第三方面提供編碼第二方面所述蛋白的基因，所述基因是核苷酸序列為seq?id?no.3所示的dna分子。

7、本公開(kāi)第四方面提供一種重組載體，所述重組載體為重組表達(dá)載體，所述重組載體插入有第三方面所述的基因。

8、本公開(kāi)第五方面提供一種轉(zhuǎn)化體，所述轉(zhuǎn)化體的宿主為基因工程菌；

9、所述轉(zhuǎn)化體導(dǎo)入有第三方面所述的基因，或者，所述轉(zhuǎn)化體導(dǎo)入有第四方面所述的重組載體。

10、本公開(kāi)第六方面提供一種制備堿性磷酸酶的方法，所述方法包括：將第五方面所述的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行培養(yǎng)，得到培養(yǎng)后的物料。

11、本公開(kāi)第七方面提供一種堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述堿性磷酸酶為第二方面所述的蛋白。

12、本公開(kāi)第八方面提供第四方面所述的重組載體或第五方面所述的轉(zhuǎn)化體在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、通過(guò)上述技術(shù)方案，本公開(kāi)提供一種提高堿性磷酸酶活性的方法、具有堿性磷酸酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉(zhuǎn)化有該基因的轉(zhuǎn)化體、制備堿性磷酸酶的方法和堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。突變體phodl-m1比野生型堿性磷酸酶具有更好的耐高溫性能、耐堿性能和穩(wěn)定性，為改善堿性磷酸酶在食品、飼料、醫(yī)藥、環(huán)境治理及農(nóng)藥降解等領(lǐng)域中應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

14、本公開(kāi)的其他特征和優(yōu)點(diǎn)將在隨后的具體實(shí)施方式部分予以詳細(xì)說(shuō)明。

技術(shù)特征：

1.一種提高堿性磷酸酶活性的方法，其特征在于，該方法包括將野生型的待突變氨基酸殘基片段進(jìn)行突變改造，其特征在于，所述野生型堿性磷酸酶的氨基酸序列如seq?idno.2所示；所述待突變氨基酸殘基片段為第354位-第369位，所述突變改造為氨基酸殘基片段的取代。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述突變改造包括：

3.一種具有堿性磷酸酶活性的蛋白，其特征在于，所述蛋白為將野生型堿性磷酸酶的待突變氨基酸殘基片段進(jìn)行突變改造，所述野生型堿性磷酸酶的氨基酸序列如seq?idno.2所示；所述待突變氨基酸殘基片段為第354位-第369位，所述突變改造為氨基酸殘基片段的取代。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的蛋白，其中，所述蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

5.編碼權(quán)利要求4所述蛋白的基因，其特征在于，所述基因是核苷酸序列為seq?idno.3所示的dna分子。

6.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體為重組表達(dá)載體，所述重組載體插入有權(quán)利要求5所述的基因。

7.一種轉(zhuǎn)化體，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化體的宿主為基因工程菌；

8.一種制備堿性磷酸酶的方法，其特征在于，所述方法包括：將權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行培養(yǎng)，得到培養(yǎng)后的物料。

9.一種堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用，其特征在于，所述堿性磷酸酶為權(quán)利要求3或4所述的蛋白。

10.權(quán)利要求6所述的重組載體或權(quán)利要求7所述的轉(zhuǎn)化體在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本公開(kāi)涉及一種提高堿性磷酸酶活性的方法及應(yīng)用。具體地，涉及一種提高堿性磷酸酶活性的方法、具有堿性磷酸酶活性的蛋白、編碼該蛋白的基因、插入有該基因的重組載體、轉(zhuǎn)化有該基因的轉(zhuǎn)化體、制備堿性磷酸酶的方法和堿性磷酸酶在制備耐高溫和/或耐堿性能的產(chǎn)品中的應(yīng)用。突變體PhoDl?M1比野生型堿性磷酸酶具有更好的耐高溫性能、耐堿性能和穩(wěn)定性，為改善堿性磷酸酶在食品、飼料、醫(yī)藥、環(huán)境治理及農(nóng)藥降解等領(lǐng)域中應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)研發(fā)人員：魏全,尹佳,龔彥霖,張霞
受保護(hù)的技術(shù)使用者：北京奧克思特生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/24