本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別涉及雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、高侵襲、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)性惡性腫瘤，是嚴(yán)重威脅人類生命健康的常見(jiàn)病和多發(fā)病。根據(jù)who統(tǒng)計(jì)，惡性腫瘤患者每年新增3000萬(wàn)例，成為威脅人類健康的主要疾病。根據(jù)研究指出，raf激酶及其介導(dǎo)的ras-raf-mek-erk（mapk）通路在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有顯著作用。惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)mapk通路信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)度上調(diào)，通過(guò)ras、raf、mek及erk的特異性級(jí)聯(lián)磷酸化將信號(hào)由細(xì)胞外傳入細(xì)胞核內(nèi)，引發(fā)細(xì)胞的惡性增殖及分化。braf基因位于7q34染色體，編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，屬于raf激酶家族。braf蛋白是促分裂素原活化蛋白激酶（inogen-ac?tivated?proteinkinases,?mapk）信號(hào)通路的關(guān)鍵分子。mapk信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化及周期調(diào)控等多種細(xì)胞應(yīng)答過(guò)程。braf突變后mapk信號(hào)通路活性提高數(shù)百倍，導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖和分化，且在惡性黑色素瘤、甲狀腺癌、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌等多種癌癥組織中均存在braf突變，其中以braf第15號(hào)外顯子第1,799位核苷酸上t突變?yōu)閍（導(dǎo)致其編碼蛋白的第600位纈氨酸變?yōu)楣劝彼幔碽rafv600突變）最為常見(jiàn)。

2、針對(duì)brafv600e突變，美國(guó)食品藥物管理局（food?and?drug?administration，fda）已批準(zhǔn)如vemurafenib，dabrafenib等多種藥物用于brafv600e突變的腫瘤，此抑制劑是通過(guò)抑制單體brafv600e蛋白阻斷mapk信號(hào)通路的異常激活，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖。研究表明野生型及突變型braf二聚體的形成會(huì)過(guò)度激活下游信號(hào)通路磷酸化，促使癌癥發(fā)生發(fā)展導(dǎo)致耐藥。現(xiàn)階段解決brafv600e抑制劑的獲得性耐藥成為新的研究方向。

3、變構(gòu)調(diào)節(jié)作為一種新型藥物設(shè)計(jì)策略，通過(guò)作用于蛋白變構(gòu)位點(diǎn)調(diào)節(jié)其功能。研究指出，fda批準(zhǔn)的多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑ponatinib通過(guò)可作用于braf變構(gòu)位點(diǎn)，在耐藥株上具有良好的療效。通過(guò)x單晶衍射對(duì)殘基的分析，發(fā)現(xiàn)ponatinib的 n-甲基哌嗪基團(tuán)伸入braf變構(gòu)口袋（allosteric?site）與殘基h574和i573骨架形成氫鍵相互作用，然而ponatinib臨床應(yīng)用時(shí)在心血管、消化系統(tǒng)、血液系統(tǒng)以及骨髓抑制等方面具有副作用。因此針對(duì)braf蛋白變構(gòu)位點(diǎn)，亟須開(kāi)發(fā)全新braf變構(gòu)調(diào)節(jié)劑，來(lái)克服braf蛋白二聚化引發(fā)的耐藥現(xiàn)象。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明提出雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑及其制備方法與應(yīng)用。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑，結(jié)構(gòu)通式或其成藥上可接受的鹽如ⅰ所示：

4、

5、ⅰ，

6、其中，環(huán)a為不同取代的芳香性雜環(huán)，包括苯環(huán)、吡啶環(huán)、吡咯環(huán)或喹啉酮環(huán)；

7、環(huán)b為不同取代的芳香性單環(huán)，包括苯環(huán)、吡啶環(huán)或呋喃環(huán)；

8、環(huán)c為不同取代的呋喃環(huán)、哌嗪環(huán)、吡啶環(huán)、哌啶環(huán)、嗎啉環(huán)、硫代嗎啉環(huán)或胺類中的任意一種；

9、x1為氮原子或碳原子；

10、z1為氧原子，硫原子或ch；

11、z2，z3相同或不同，且各自獨(dú)立地選自氧原子，氮原子或ch；

12、y1為不同取代的烷基，-conh-，-nhco-，-ch=ch-或coo-；

13、r1為氫原子，鹵素或可被取代的烷基。

14、進(jìn)一步的，所述結(jié)構(gòu)通式或其成藥上可接受的鹽包括：

15、

16、。

17、

18、雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的制備方法，具體步驟包括：

19、（1）惰性氣氛下，將氨基取代的吡啶類/苯類/吡咯類化合物和4-氯乙酰乙酸乙酯加入多聚磷酸中，120-130℃加熱攪拌，收集處理反應(yīng)液，得到化合物i；

20、所述化合物i的結(jié)構(gòu)式為：；

21、（2）將苯酚類/苯硫酚類化合物，堿性物質(zhì)加入有機(jī)溶劑中，在室溫下攪拌，加入化合物i，升溫至70-120℃后繼續(xù)反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到化合物ii；

22、所述化合物ii的結(jié)構(gòu)式為；

23、（3）惰性氣氛下，將化合物ii加入混合溶劑中，接著加入還原性金屬進(jìn)行回流反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到化合物iii；

24、所述化合物iii的結(jié)構(gòu)式為；

25、（4）將硝基苯烷基溴類化合物，氮雜環(huán)和堿性物質(zhì)加入有機(jī)溶劑中，升溫至70-120℃反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到化合物iv；或?qū)⑾趸酵榛犷惢衔铮s合劑，1-羥基苯并三唑加入有機(jī)溶劑中室溫中攪拌，加入胺類/醇類化合物繼續(xù)反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到化合物iv；

26、所述化合物iv的結(jié)構(gòu)式為；

27、（5）惰性氣氛下，將雷尼鎳，水合肼和化合物iv加入有機(jī)溶劑中，50-150℃回流反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到化合物v；

28、所述化合物v的結(jié)構(gòu)式為；

29、（6）惰性氣氛下，將化合物v，三光氣和三乙胺加入有機(jī)溶劑中反應(yīng)后粗處理，惰性氣氛下，將化合物iii和粗品溶于有機(jī)溶劑中進(jìn)行反應(yīng)，收集處理反應(yīng)液，得到目標(biāo)雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑。

30、進(jìn)一步的，步驟（1）中，所述氨基取代的吡啶類/苯類/吡咯類化合物為4-甲基-2-氨基吡啶，2-氨基吡啶，5-氟-3-氨基吡啶，2-氨基吡咯，苯胺或3-氨基吡啶中的任意一種；所述氨基取代的吡啶類/苯類/吡咯類化合物與4-氯乙酰乙酸乙酯、多聚磷酸的摩爾比為1:1-2:1。

31、進(jìn)一步的，步驟（2）中，所述苯酚類/苯硫酚類化合物為3-硝基苯酚，2-甲基-5-硝基苯酚，2-甲基-4-硝基苯酚，2-甲基-5-硝基苯硫酚，2-甲基-5-芐氧基苯酚或2-甲基-4-芐氧基苯酚中的任意一種；所述堿性物質(zhì)為氫氧化鈉，碳酸鉀，氫氧化鉀，碳酸鈉或碳酸氫鈉中的任意一種；所述有機(jī)溶劑為乙腈，丙酮，乙醇，甲醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，氯仿，四氯化碳，甲苯，二甲基亞砜， n, n-二甲基甲酰胺和 n, n-二甲基乙酰胺中的至少一種；所述苯酚類/苯硫酚類化合物與堿性物質(zhì)，化合物i的摩爾比為1-2:3:1。

32、進(jìn)一步的，步驟（3）中，所述混合溶劑為體積比2:2:1的乙醇，乙酸和水；所述還原性金屬為鐵或鋅；所述化合物ii與還原性金屬的摩爾比為1:5-8；

33、步驟（4）中，所述硝基苯烷基溴類化合物為4-硝基苯乙基溴或4-硝基苯丙基溴；所述氮雜環(huán)為甲基哌嗪， n-boc哌嗪，六氫哌啶，嗎啉，硫代嗎啉，甲胺或二甲胺中的任意一種；所述堿性物質(zhì)為氫氧化鈉，碳酸鉀，氫氧化鉀，碳酸鈉和碳酸氫鈉中的至少一種；所述硝基苯羧酸類化合物為對(duì)硝基苯甲酸，對(duì)硝基苯乙酸，3-硝基苯乙酸，1,4-二氧六環(huán)-2-甲酸或?qū)ο趸奖嶂械娜我庖环N；所述縮合劑為1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，二環(huán)己基碳二亞胺或二異丙基碳二亞胺中的任意一種；所述有機(jī)溶劑為乙腈，丙酮，乙醇，甲醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，氯仿，四氯化碳，甲苯，二甲基亞砜， n, n-二甲基甲酰胺和 n, n-二甲基乙酰胺中的至少一種；所述硝基苯烷基溴類化合物與氮雜環(huán)，堿性物質(zhì)的摩爾比為1:1-2:1；所述硝基苯羧酸類與縮合劑，1-羥基苯并三唑，氮雜環(huán)的摩爾比為1-1.2:2-2.5:1.5:1。

34、進(jìn)一步的，步驟（5）中，所述有機(jī)溶劑為甲醇，乙醇，二甲基亞砜， n, n-二甲基甲酰胺和 n, n-二甲基乙酰胺中的至少一種；所述雷尼鎳和化合物iv的摩爾比為0.5:1；

35、步驟（6）中，所述有機(jī)溶劑為乙腈，丙酮，乙醇，甲醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，氯仿，四氯化碳，甲苯，二甲基亞砜， n, n-二甲基甲酰胺和 n, n-二甲基乙酰胺中的至少一種；所述化合物v，三光氣和三乙胺的摩爾比為1:1:1.5-2；所述化合物iii和粗品的摩爾比為1:1-1.5。雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

36、進(jìn)一步的，所述抗腫瘤藥物包含所述雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的結(jié)構(gòu)通式或其成藥上可接受的鹽作為活性組分以及藥學(xué)上可接受的賦形劑。

37、進(jìn)一步的，所述抗腫瘤藥物是通過(guò)靶向野生型brafwt及其突變體brafv600e激酶進(jìn)行干預(yù)，可治療和/或預(yù)防包括甲狀腺、黑色素瘤、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌有關(guān)疾病。

38、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

39、本發(fā)明通過(guò)計(jì)算機(jī)虛擬篩選從specs和chemdiv數(shù)據(jù)庫(kù)中近150萬(wàn)個(gè)化合物中得到19個(gè)化合物母核結(jié)構(gòu)，同時(shí)合成了強(qiáng)效、成藥性好的靶向braf激酶的雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑，克服braf蛋白二聚化引發(fā)的耐藥現(xiàn)象。通過(guò)對(duì)ponatinib與本發(fā)明所設(shè)計(jì)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑分別進(jìn)行計(jì)算機(jī)分子匹配：本發(fā)明所設(shè)計(jì)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑與ponatinib對(duì)變構(gòu)位點(diǎn)熱點(diǎn)殘基（i573、h574）具有相似調(diào)控作用。經(jīng)試驗(yàn)例驗(yàn)證，本發(fā)明合成的化合物對(duì)brafwt、brafv600e及p61-brafv600e腫瘤細(xì)胞系表現(xiàn)出顯著的抑制細(xì)胞增殖的活性，同時(shí)具有顯著的激酶抑制活性，應(yīng)用前景良好，本發(fā)明的雙環(huán)雜芳基類braf負(fù)變構(gòu)調(diào)節(jié)劑可應(yīng)用在預(yù)防或/和治療甲狀腺、黑色素瘤、結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌相關(guān)的疾病中。