本發明涉及基因工程及活性肽，更具體的說是涉及一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽、重組菌株、制備方法及其應用。

背景技術：

1、高血壓作為最常見的慢性病，對其防治與改善是關乎人類生命健康的重要任務。血管緊張素轉換酶（ace）是參與體內血壓調控系統中的關鍵性酶，可促進血管緊張素ⅱ生成及降解緩激肽，進而升高血壓。卡托普利和依那普利等ace抑制類藥物能夠顯著降低血壓，是目前主要的治療方式，但長期服藥會對人體產生一定的副作用，挖掘安全綠色的ace靶向抑制劑是當前的研究熱點。ace抑制肽是廣泛來源于食品、作用于ace、具有降低血壓功效的生物活性肽，近年來其制備、結構表征、活性評價及作用機制等研究深受關注。

2、目前ace抑制肽主要通過將大豆、牡蠣、牛奶等蛋白原料進行酶解、進而分離純化及表征的方法制備，雖然生產成本較低，但目標產物得率低、活性低、分離純化操作難、耗時長，且酶解產物為混合物，活性組分復雜，難以精準闡明ace抑制肽的降血壓作用機制。例如，從羅非魚皮當中使用堿性蛋白酶酶解制備獲得ace抑制肽vglfpsrsf，其對ace的抑制率ic50值為61.43?μm，且制備的產物含量濃度低，難以通過酶解方法從蛋白原料中進行規模化的高純度抑制肽產物制備。而利用微生物對重組蛋白異源表達是逐漸興起的能夠生成目的產物、操作簡便、易于調控及易于實現大規模生產的制備技術，具有廣泛的應用前景。

3、因此，提供一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽、重組菌株、制備方法及其應用是本領域技術人員亟需解決的問題。

技術實現思路

1、有鑒于此，本發明提供了一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽、重組菌株、制備方法及其應用。

2、為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

3、一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽，所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽的氨基酸序列為ywlkp。

4、本發明是在原始ace抑制肽lypvk氨基酸序列基礎上，采用分子量大小、疏水性殘基、氨基酸序列分布、排列及序列末端氨基酸殘基種類會影響ace肽的抑制活性等思路，對其原始氨基酸序列進行理性設計，得到所述ace抑制活性提升的ace抑制肽的氨基酸序列，并對ace抑制肽進行基因工程方法制備，進一步驗證其ace抑制活性。并驗證比較兩種ace抑制肽的細胞內降血壓作用，分析兩種ace抑制肽作用后的細胞內血壓相關的產物水平變化，以探究細胞內降血壓功效。

5、ace抑制肽的分子量越大，越不易進入ace的活性中心，ace抑制活性越低；且根據ace活性中心的氨基酸組成，ace抑制肽末端的疏水性氨基酸、賴氨酸及脯氨酸易與ace發生相互作用，進而更有利于抑制ace的活性。因此，采用上述思路對ace抑制肽進行理性設計，開發新的ace抑制肽，有利于其ace抑制活性提升。

6、進一步，一種重組表達載體，含所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp的多拷貝基因seq?id?no.1。

7、catcatcatcatcatcatgatgatgacgataagtactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagccttactggcttaagccatactggttgaaaccctattggttaaagcct；seq?id?no.1。

8、seq?id?no.1中，1-18bp為his-tag，19-33bp為腸激酶標簽，34-333bp為ywlkp串聯編碼基因。

9、進一步，一種大腸桿菌重組菌株，能夠表達所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp。

10、進一步，所述的一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽的制備方法，將抑制肽編碼基因利用密碼子簡并性多拷貝串聯，串聯肽在大腸桿菌中異源表達，經過純化、脯氨酸內切酶特異性酶切，得到重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp。

11、進一步，所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽在制備血管緊張素轉換酶抑制劑中的應用。

12、進一步，所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽在制備降血壓藥物中的應用。

13、進一步，一種血管緊張素轉換酶抑制劑，包括所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽作為活性成分。

14、進一步，一種降血壓的藥物組合物，包括所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽。

15、進一步，一種降血壓的藥物制劑，包括所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽或所述降血壓的藥物組合物，還包括可藥用載體。

16、進一步，所述可藥用載體適用于片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑、口服液、注射劑或乳劑。

17、經由上述的技術方案可知，與現有技術相比，本發明公開提供了一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽、重組菌株、制備方法及其應用，重組ace抑制肽ywlkp對ace的抑制活性較原始抑制肽lypvk有所提升，ic50值由10.6?±?0.86?μg/ml降低至5.0?±?0.62?μg/ml。進一步通過細胞實驗驗證重組ace抑制肽ywlkp的細胞內降血壓功效較原始抑制肽lypvk有所提升，no含量增加、et-1含量減少。本發明的重組ace抑制肽ywlkp，有利于其在開發具有降血壓功效的產品中的應用。

技術特征：

1.一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽，其特征在于，所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽的氨基酸序列為ywlkp。

2.一種重組表達載體，其特征在于，含權利要求1所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp的多拷貝基因seq?id?no.?1。

3.一種大腸桿菌重組菌株，其特征在于，能夠表達權利要求1所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp。

4.權利要求1所述的一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽的制備方法，其特征在于，將抑制肽編碼基因利用密碼子簡并性多拷貝串聯，串聯肽在大腸桿菌中異源表達，經過純化、脯氨酸內切酶特異性酶切，得到重組血管緊張素轉換酶抑制肽ywlkp。

5.權利要求1所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽在制備血管緊張素轉換酶抑制劑中的應用。

6.權利要求1所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽在制備降血壓藥物中的應用。

7.一種血管緊張素轉換酶抑制劑，其特征在于，包括權利要求1所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽作為活性成分。

8.一種降血壓的藥物組合物，其特征在于，包括權利要求1所述的重組血管緊張素轉換酶抑制肽。

9.一種降血壓的藥物制劑，其特征在于，包括權利要求1所述重組血管緊張素轉換酶抑制肽或權利要求8所述降血壓的藥物組合物，還包括可藥用載體。

10.根據權利要求9所述的一種降血壓的藥物制劑，其特征在于，所述可藥用載體適用于片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、顆粒劑、口服液、注射劑或乳劑。

技術總結
本發明公開了一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽、重組菌株、制備方法及其應用，屬于基因工程及活性肽技術領域。本發明公開的一種重組血管緊張素轉換酶抑制肽，氨基酸序列為YWLKP。本發明公開的重組血管緊張素轉換酶抑制肽YWLKP對ACE的抑制活性較原始抑制肽LYPVK有明顯提升，IC<subgt;50</subgt;值由10.6±0.86μg/mL降低至5.0±0.62μg/mL。本發明公開的重組血管緊張素轉換酶抑制肽YWLKP具有較強的細胞內降血壓活性，有利于其在開發具有降血壓功效產品中的應用。

技術研發人員：牟海津,梁青平,郁東興,郁萬帥,劉家鳴,陳晨,任浩,劉永健,劉永文
受保護的技術使用者：中國海洋大學
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28