專利名稱：用于鑒定腫瘤細胞或腫瘤組織的crept抗體的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于鑒定腫瘤細胞或腫瘤組織的CREPT抗體。
背景技術：
癌癥，醫學術語亦稱惡性腫瘤，為由控制細胞生長增殖機制失常而引起的疾病。癌細胞除了生長失控外，還會局部侵入周遭正常組織甚至經由體內循環系統或淋巴系統轉移到身體其他部分。癌細胞的特點是無限制、無止境地增生，使患者體內的營養物質被大量消耗；癌細胞釋放出多種毒素，使人體產生一系列癥狀；癌細胞還可轉移到全身各處生長繁殖，導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱以及嚴重的臟器功能受損等等。與之相對的有良性腫瘤，良性腫瘤則容易清除干凈，一般不轉移、不復發，對器官、組織只有擠壓和阻塞作用，但癌癥(惡性腫瘤)還可破壞組織、器官的結構和功能，引起壞死出血合并感染，患者最終由于器官功能衰竭而死亡。癌癥發生初期很難發現，等出現各種臨床表征后病人才到醫院就診，但通常已經是中晚期，很難治療。一般治療后，也很難預測患者的愈后情況。

發明內容
本發明的目的是提供一種用于鑒定腫瘤細胞或腫瘤組織的CREPT抗體。本發明提供的雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1，已于2011年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏號為CGMCC No. 5477。雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1分泌的單克隆抗體也屬于本發明的保護范圍。本發明還保護所述單克隆抗體在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為如下 (a)或(b)或(c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。含有所述單克隆抗體的試劑盒也屬于本發明的保護范圍；所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(c)或(d) :(a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。所述試劑盒還可含有以所述CREPT蛋白為免疫原獲得的多克隆抗體。所述多克隆抗體具體可為將所述CREPT蛋白免疫兔子得到的多克隆抗體。本發明還保護所述單克隆抗體在檢測CREPT蛋白中的應用；所述CREPT蛋白為序列表的序列1所示的蛋白質。本發明還保護用于檢測CREPT蛋白的試劑在在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c) 輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。所述用于檢測CREPT 蛋白的試劑為針對CREPT蛋白的抗體，如單克隆抗體或多克隆抗體。
本發明還保護一種試劑盒，包括用于檢測CREPT蛋白的試劑；所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或(c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。所述用于檢測CREPT蛋白的試劑為針對CREPT蛋白的抗體，如單克隆抗體或多克隆抗體。以上任一所述的腫瘤細胞可為HeLa細胞(人宮頸癌細胞)、!fepG2細胞(人肝癌細胞)、PC12細胞(大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞)、MCF7細胞(人乳腺癌細胞)或B16 細胞(人黑色素瘤細胞)。以上任一所述的腫瘤組織可為肺癌組織、乳腺癌組織、胃癌組織、腎癌組織、前列腺癌組織或結腸癌組織。以上任一所述的腫瘤患者的腫瘤可為HeLa細胞(人宮頸癌細胞)引起的腫瘤、 H印G2細胞(人肝癌細胞)弓丨起的腫瘤、PC12細胞(大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞)引起的腫瘤、MCF7細胞(人乳腺癌細胞)引起的腫瘤或B16細胞(人黑色素瘤細胞)弓I起的腫瘤。以上任一所述的腫瘤患者的腫瘤可為肺癌、乳腺癌、胃癌、腎癌、前列腺癌或結腸癌。本發明發現CREPT基因在腫瘤細胞系的表達水平遠遠高于正常細胞中的表達水平，在腫瘤組織中的表達水平遠遠高于癌旁組織和/或正常組織中的表達水平。所以應用本發明提供的抗體可以輔助鑒定腫瘤細胞、腫瘤組織或腫瘤患者，具有操作簡便、成本低廉、準確率高、預測愈后等優點。本發明提供的抗體(特別是單克隆抗體)靈敏度高、特異性強。


圖1為實施例2的步驟二中，步驟3的上清和7次的洗脫液的電泳圖。圖2為實施例2的步驟六中，單克隆抗體的效價測定結果。圖3為實施例2的步驟七中，多克隆抗體的靈敏度測定結果。圖4為實施例2的步驟七中，單克隆抗體的靈敏度測定結果。圖5為實施例3中采用Flag抗體進行western blot的結果。圖6為實施例3中采用多克隆抗體進行western blot的結果。圖7為實施例3中采用單克隆抗體進行western blot的結果。
圖8為實施例4中，CREPT基因在一些細胞系中表達差異的結果。圖9為實施例4中，CREPT基因在腫瘤組織、癌旁組織和/或正常組織組織中表達差異的結果。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。還原性谷胱甘肽(還原性GST)購自AMRESC0。實施例1、CREPT蛋白及其編碼基因的發現 15"^是細胞周期依賴激酶抑制因子(CKI)家族中的一員，定位于9號染色體 9P21區，此位點易發生缺失、突變和甲基化，在細胞增殖和很多腫瘤發生中起重要作用。
4pl5INK4b基因是一種抑制細胞增殖的細胞周期蛋白依賴激酶抑制因子，它能使細胞停留在Gl 期，從而抑制細胞的增殖和生長。P15RS基因是pl5Iffi4b相關基因，對細胞周期有明顯的調控作用，它可以在Gl期充當一個負調控子。以pl5RS基因作為誘餌，經過生物信息學方法獲得一個新基因(CREPT)及其編碼蛋白。CREPT蛋白的氨基酸序列如序列表的序列1所示(由3 個氨基酸殘基組成)。將編碼CREPT蛋白的基因命名為CREPT基因，其開放閱讀框如序列表的序列2所示。CREPT 基因定位于人類20號染色體上約561Λ的范圍內，具有7個外顯子。序列相似性分析顯示 CREPT基因與pl5RS基因的同源性達67%，在人、小鼠、斑馬魚、雞、青蛙、四膜蟲、蜜蜂、蚊子、螞蟻、果蠅、酵母、甚至一些植物等生物體中均十分保守。實施例2、抗體的制備及其效價和靈敏度的測定一、原核表達載體pGEX-5X-2/CREPT的構建1、合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA。2、以步驟1的雙鏈DNA為模板，用Fl和Rl組成的引物對進行PCR擴增，得到PCR
擴增產物。Fl :5’ -TATAGATATCATGTCCTCCTTCTCTGAGT-3‘；Rl :5’ -TATACTCGAGTGAGTCAGTTGAAAACAGGT-3’。PCR 反應條件95°C變性 5min ；94°C變性 30s、60°C退火 30s、72°C延伸 60s、進行 30 個循環；72°C延伸IOmin。3、用限制性內切酶EcoRV和Bio I酶切步驟2的PCR擴增產物，回收酶切產物。4、用限制性內切酶Sma I和Xho I酶切質粒pGEX-5X_2 (購自clontech)，回收載體骨架(約4. 9kb)。5、將步驟3的酶切產物和步驟4的載體骨架連接，得到原核表達載體PGEX-5X-2/ CREPT。根據測序結果，對原核表達載體PGEX-5X-2/CREPT進行結構描述如下在質粒 PGEX-5X-2的Sma I和Bio I酶切位點之間插入了序列表的序列2所示的DNA片段。二、融合蛋白的獲得1、將原核表達載體pGEX-5X-2/CREPT轉化大腸桿菌(E. coli) BL21 (購自 clontech)，得到重組菌。2、將步驟1的重組菌在LB培養基中37°C、200rpm培養12小時，然后以1 % (體積比)的接種量接種新的LB培養基，培養至0D600約0. 4時加入IPTG(使其初始濃度為 0. 2mM)，自加入IPTG開始計時，16°C培養12小時。3、將完成步驟2的培養體系4。C，6000rpm離心lOmin，收集菌體沉淀，然后用10倍菌體體積的PBS緩沖液(pH7. 5,0. 1M)重懸并超聲破碎(每超聲3s停3s，共進行IOmin ；超聲功率是10瓦特)，然后4°C、IOOOOrpm離心lOmin，收集上清。4、將步驟3的上清與GST beads (購自GE公司)混勻，在4°C結合旋轉3小時，然后用洗脫液進行洗脫(溶劑為PH8. 8、50mM的Tris-cl緩沖液，溶質還原性GST，其濃度為 IOmM)，共洗脫7次，每次500ul，分別收集每次的洗脫后溶液。步驟3的上清和7次的洗脫液的電泳圖見圖1，M為marker，1為步驟3的上清，2 至8依次為第一次至第七次的洗脫后溶液，可以觀察到，洗脫得到了高純度的目的蛋白，且隨著洗脫的進行，目的蛋白的含量逐漸降低。
將7次洗脫的洗脫后溶液合并，即為含有純化后目的蛋白(GST-CREPT融合蛋白) 的溶液。三、多克隆抗體的獲得以步驟二制備的GST-CREPT融合蛋白為抗原，免疫兔子(興隆實驗動物養殖廠，許可證號SCXK(京)2006-0001)。每只兔子頸背部免疫100 μ g抗原，皮下多點注射，注射體積為Iml/只。第一次免疫后間隔2周進行第二次免疫，間隔4周后進行第三次免疫，第三次免疫后10天左右采血檢測，通過間接ELISA測定抗體效價。第1次與完全福氏佐劑混合免疫，第2次和第3次與不完全福氏佐劑混合免疫。抗體效價測定的具體步驟如下(均采用pH9. 5、0. IM的PBS緩沖液)(1)采用步驟二制備的GST-CREPT融合蛋白溶液(采用PBS緩沖液調節濃度)進行包被，100 μ L/孔，包被濃度為1 μ g/mL，4°C孵育16小時，封閉并洗板。(2)每孔加入100 μ L血清或其稀釋液(采用PBS緩沖液進行梯度稀釋)，設置只加入PBS緩沖液的孔作為陰性對照，室溫孵育池，洗板。(3)每孔加入50 μ L酶標二抗(辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG)，室溫避光孵育池，洗板。(4)每孔加入50ul NP顯色液，避光顯色5min。(5)每孔加入100 μ L 2mol/L硫酸中止反應；讀OD45tl值。以檢測孔與陰性對照孔OD值的比值大于2. 1 (P/N彡2. 1)為陽性結果。選擇效價達1 10000的血清，即為多克隆抗體。四、雜交瘤細胞的獲得以步驟二制備的GST-CREPT融合蛋白為抗原，免疫5周齡雌性BALB/C小鼠(維通利華公司，許可證號SCXK(京)2002-0003)。每只小鼠免疫5 μ g抗原，在四肢的淋巴結附近皮下多點注射，注射體積為0. 3ml/只。每間隔7天免疫1次，第1次與完全福氏佐劑混合免疫，第2次和第3次與不完全福氏佐劑混合免疫。第三次免疫后，眼眶采血并分離血清，通過間接ELISA測定抗體效價。測定抗體效價(方法同步驟三)。選擇血清抗體效價達到IX IO5的小鼠，于融合前3天加強免疫1次 (免疫方法和免疫劑量同步驟三的第3次免疫)。取對數生長期的小鼠骨髓瘤Sp2/0細胞和免疫小鼠的脾細胞按常規PEG方法融合，有限稀釋法克隆細胞，間接ELISA篩選特異性抗體，克隆化后的細胞株經傳代確定為穩定的細胞株后，液氮保存，獲得4株雜交瘤細胞，將其中一株命名為CREPT-Ab-4H1。雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1已于2011年11月22日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，保藏號為 CGMCC No. M77。五、單克隆抗體的獲得Balb/c小鼠(維通利華公司)腹腔注射滅菌石蠟油(0. 4mL/只)，3天后腹腔注射雜交瘤細胞株(5X IO5個/只)，7天后采集腹水，即為單克隆抗體，-80°C保存備用。也可以采用如下增量培養法制備單克隆抗體將雜交瘤細胞株置于細胞培養基中，37°C培養3-4天，得到的培養液即為單克隆抗體溶液(_80°C保存)。六、單克隆抗體的效價測定
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測定方法為間接ELISA，方法同步驟三。4株雜交瘤細胞采用步驟五的方法制備的單克隆抗體的效價均為1 25600以上。其中雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1采用步驟五的方法制備的單克隆抗體的效價達到 1 2048000以上(三次實驗的平均值見圖2)。七、單克隆抗體和多克隆抗體的靈敏度1、雙抗夾心ELISA檢測多克隆抗體的靈敏度(1)將步驟五制備的單克隆抗體分別進行1 1、1 2倍(均為體積比)稀釋，得到各種抗體稀釋液(用于稀釋的緩沖液為PH9. 5、0. IM的PBS緩沖液)。(2)將各種抗體稀釋液分別包被不同的酶標板，100 μ L/孔，4°C孵育16小時，封閉并洗板。(3)將融合蛋白標準品溶液(用pH9.5、0. IM的PBS緩沖液稀釋步驟二制備的 GST-CREPT融合蛋白得到，融合蛋白的濃度分別為Ing/ μ L、0. Ing/ μ L、0. Olng/ μ L、lpg/ yL、0. lpg/yL、0.01pg/yL，每個濃度設置三個復孔；將牛血清白蛋白作為融合蛋白的陰性對照，濃度為Ing/ μ L)分別加入各個酶標板，100 μ L/孔，室溫孵育2h，洗板。(4)加入步驟三制備的多克隆抗體(用pH9. 5,0. IM的PBS緩沖液進行1 500體積稀釋)，每孔加入IOOul，37°C孵育lh，洗板。(5)每孔加入50 μ L酶標二抗(辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG，購自中杉公司)，37°C孵育lh，洗板。(6)每孔加入50ul NP顯色液(購自中杉公司)，避光顯色5min。(7)每孔加入100 μ L 2mol/L硫酸中止反應；讀OD45tl值。結果見圖3。以檢測孔與陰性對照孔OD值的比值大于2. 1 (P/N彡2. 1)為陽性結果。結果表明，多克隆抗體檢測抗原的靈敏度為lOOng/yL。2、雙抗夾心ELISA檢測單克隆抗體的靈敏度(1)將步驟三制備的多克隆抗體分別進行1 50、1 100、1 200或1 400倍 (均為體積比)稀釋，得到各種抗體稀釋液(用于稀釋的緩沖液為PH9. 5、0. IM的PBS緩沖液)。步驟O)和步驟(3)同步驟1的步驟(2)和步驟(3)。(4)加入步驟五制備的單克隆抗體(用ρΗ9· 5,0. IM的PBS緩沖液進行1 500體積稀釋)，每孔加入IOOul，37°C孵育lh，洗板。(5)每孔加入50yL酶標二抗(辣根過氧化物酶標記的羊抗鼠IgG，購自中杉公司)，37°C孵育lh，洗板。步驟(6)和步驟(7)同步驟1的步驟(6)和步驟(7)。結果見圖4。單克隆抗體檢測抗原的靈敏度可達到20ng/ml。實施例3、抗體特異性的測定一、真核表達載體的構建1、真核表達載體Flag_pcDNA3. 1/CREPT的構建(1)合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA。(2)以步驟(1)的雙鏈DNA為模板，用Fl和Rl組成的引物對進行PCR擴增，得到 PCR擴增產物。
Fl :5’ -TATAGATATCCACCATGTCCTCCTTCTCTGAGT-3> ；
Rl 5，-TATACTCGAGGTCAGTTGAAAACAGGTCCC-3，。PCR反應條件同實施例2的步驟一。(3)用限制性內切酶EcoRV和Bio I酶切步驟O)的PCR擴增產物，回收酶切產物。(4)用限制性內切酶EcoRV和Xho I酶切質粒Flag-pcDNA3. 1 (購自clontech公司)，回收載體骨架(約5. 5kb)0(5)將步驟(3)的酶切產物和步驟⑷的載體骨架連接，得到真核表達載體 Flag-pcDNA3. 1/CREPT。根據測序結果，對真核表達載體Flag-pcDNA3. 1/CREPT進行結構描述如下在質粒Flag-pcDNA3. 1的EcoRV和Bio I酶切位點之間插入了序列表的序列2 所示的DNA片段，序列2所示DNA和載體骨架上的Flag標簽編碼序列形成融合基因，表達 Flag-CREPT融合蛋白。2、真核表達載體 Flag_pcDNA3. 1/CREPT/CCT 的構建(CREPT 羧基端)(1)合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA。(2)以步驟(1)的雙鏈DNA為模板，用Fl和Rl組成的引物對進行PCR擴增，得到 PCR擴增產物。F2 5' -TATAGAATTCGCCACCATGCCCCCCAAAGCAACAGA-3> ；Rl :5，-TATACTCGAGGTCAGTTGAAAACAGGTCCC-3’。PCR反應條件同實施例2的步驟一。(3)用限制性內切酶EcoR I和Bio I酶切步驟O)的PCR擴增產物，回收酶切產物。(4)用限制性內切酶EcoR I和Bio I酶切質粒Flag-pcDNA3. 1，回收載體骨架(約 5. 5kb)。(5)將步驟(3)的酶切產物和步驟⑷的載體骨架連接，得到真核表達載體 Flag-pcDNA3. 1/CREPT/CCT。根據測序結果，對真核表達載體 Flag-pcDNA3. 1/CREPT/CCT 進行結構描述如下在質粒Flag-pcDNA3. 1的EcoR I和BioI酶切位點之間插入了序列表的序列2自5，末端第406至978位核苷酸所示的DNA片段，該DNA片段和載體骨架上的Flag 標簽編碼序列形成融合基因，表達Flag-CREPT-CCT融合蛋白。3、真核表達載體 Flag-pcDNA3. 1/CREPT/RPR 的構建(CREPT 氨基端)(1)合成序列表的序列2所示的雙鏈DNA。(2)以步驟(1)的雙鏈DNA為模板，用Fl和R2組成的引物對進行PCR擴增，得到 PCR擴增產物。Fl :5，-TATAGGATCCCCACCATGTCCTCCTTCTCTGAGTC-3’ ；R2 5，-TATACTCGAGAGGGCTCTTGGAGTCCTCCA-3，。PCR反應條件同實施例2的步驟一。(3)用限制性內切酶BamH I和Bio I酶切步驟⑵的PCR擴增產物，回收酶切產物。(4)用限制性內切酶BamH I和Bio I酶切質粒Flag-pcDNA3. 1，回收載體骨架(約 5. 5kb)。
(5)將步驟(3)的酶切產物和步驟⑷的載體骨架連接，得到真核表達載體 Flag-pcDNA3. 1/CREPT/RPR。根據測序結果，對真核表達載體Flag-pcDNA3. 1/CREPT/RPR進行結構描述如下在質粒Flag-pcDNA3. 1的BamH I和BioI酶切位點之間插入了序列表的序列2自5，末端第1至405位核苷酸所示的DNA片段，該DNA片段和載體骨架上的Flag 標簽編碼序列形成融合基因，表達Flag-CREPT-RPR融合蛋白。二、抗體特異性的測定第一組將真核表達載體Flag-pcDNA3. 1/CREPT轉染細胞(購自協和腫瘤所)；第二組將真核表達載體Flag_pcDNA3. 1/CREPT/CCT轉染細胞；第三組將真核表達載體Flag_pcDNA3. 1/CREPT/RPR轉染細胞；第四組將質粒pcDNA3. I-Flag轉染細胞；轉染M小時后，用細胞裂解液裂解細胞后進行western blot檢測，分別采用Flag 抗體(Sigma公司，產品目錄號F4042)、實施例2的步驟三制備的多克隆抗體或實施例2的步驟五制備的單克隆抗體。采用Flag抗體的結果見圖5。第一組、第二組和第三組分別可以檢測到 Flag-CREPT融合蛋白以及兩個缺失體，對照組沒有相應條帶。采用多克隆抗體的結果見圖6。多克隆抗體不但識別全長的CREPT蛋白，而且識別其氨基端和羧基端兩個不同的缺失體。采用單克隆抗體的結果見圖7。單克隆抗體識別CREPT全長及其羧基端，卻不識別
其氨基端。實施例4、CREPT基因在細胞以及組織中的表達差異一、CREPT基因在細胞中的表達差異分別對HeLa細胞(人宮頸癌細胞)、IfepG2細胞(人肝癌細胞)、PC12細胞(大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞)、MCF7細胞(人乳腺癌細胞)、B16細胞(人黑色素瘤細胞)、C0S7 (非洲綠猴腎細胞)、NIH3T3細胞(小鼠成纖維細胞)、BaF3 (小鼠原B細胞)、 MulLu (貂肺上皮細胞)J93T細胞(人胚腎細胞)以及293細胞(人胚腎細胞)進行試驗 (以上細胞購自協和腫瘤所)。將各個細胞裂解液裂解細胞后進行western blot檢測(采用實施例2的步驟五制備的單克隆抗體)，結果見圖8。結果表明，CREPT基因在腫瘤細胞系中的表達明顯高于非腫瘤細胞系。二、CREPT基因在組織中的表達差異在患者知情同意的基礎上，分別從多家醫院獲得的腫瘤組織(包括腫瘤組織、癌旁或正常組織)，切片后進行免疫組化(均采用實施例2的步驟五制備的單克隆抗體作為一抗，HPR-anti-mouse作為二抗，DAB顯色，蘇木素進行復染，二抗和顯色試劑均購自中杉公司)。結果見圖9，腫瘤組織顯示為棕色，癌旁或正常組織顯示為藍色。結果顯示，在不同類型的腫瘤組織中，CREPT蛋白在肺癌組織、乳腺癌組織、胃癌組織、腎癌組織、前列腺癌組織和結腸癌組織中的表達均明顯高于相應的癌旁或正常組織。以上結果說明CREPT基因在疾病發生過程中可能發揮了重要的作用，同時為該基因功能的深入研究奠定了基礎和提供了依據。
權利要求
1.雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1，它的保藏編號為CGMCCNo. 5477。
2.權利要求1所述雜交瘤細胞CREPT-Ab-4H1分泌的單克隆抗體。
3.權利要求3所述單克隆抗體在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為如下(a) 或(b)或(c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。
4.含有權利要求3所述單克隆抗體的試劑盒；所述試劑盒的功能為如下(a)或(b)或 (c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。
5.權利要求3所述單克隆抗體在檢測CREPT蛋白中的應用；所述CREPT蛋白為序列表的序列1所示的蛋白質。
6.用于檢測CREPT蛋白的試劑在在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒的功能為如下 (a)或(b)或(c)或(d) :(a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d)輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。
7.如權利要求6所述的應用，其特征在于所述用于檢測CREPT蛋白的試劑為針對 CREPT蛋白的抗體。
8.一種試劑盒，包括用于檢測CREPT蛋白的試劑；所述試劑盒的功能為如下(a)或(b) 或(c)或(d) (a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者；(d) 輔助檢測序列表的序列1所示的CREPT蛋白。
9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于所述用于檢測CREPT蛋白的試劑為針對 CREPT蛋白的抗體。
全文摘要
本發明公開了一種用于鑒定腫瘤細胞或腫瘤組織的CREPT抗體。本發明提供了用于檢測CREPT蛋白的試劑在如下(a)或(b)或(c)中的應用(a)輔助鑒定腫瘤細胞；(b)輔助鑒定腫瘤組織；(c)輔助鑒定腫瘤患者。本發明發現CREPT基因在腫瘤細胞系的表達水平遠高于正常細胞中的表達水平，在腫瘤組織中的表達水平遠遠高于癌旁組織和正常組織。所以應用本發明提供的抗體可以輔助鑒定腫瘤細胞、腫瘤組織或腫瘤患者，具有操作簡便、成本低廉、準確率高、預測愈后等優點。
文檔編號G01N33/577GK102559601SQ201210009890
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月13日 優先權日2012年1月13日
發明者任芳麗, 常智杰, 張衍泉, 王銀銀, 胡建祥, 蘇富琴, 韓斌 申請人:清華大學