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一種植物組織的顯微觀察方法與流程

文檔序號:12448703閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種植物組織顯微鏡檢測前處理的方法,包括如下步驟A:

1)將植物組織用固定液固定,得到固定后的植物組織;

2)將所述固定后的植物組織用氫氧化鉀消化,得到消化后的植物組織;

3)將消化后的植物組織用PHEM溶液洗滌,得到洗滌后植物組織;

4)將所述洗滌后植物組織在透明液中浸沒處理,得到透明后的植物組織,實現植物組織顯微鏡檢測前處理;

所述PHEM溶液包括PIPES、HEPES、EGTA和MgCl2

所述透明液由尿素、丙三醇、Triton X-100和所述PHEM溶液組成。

2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于:

所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl2的摩爾的量比為40-80:15-35:5-15:1-3;

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl2的摩爾的量比為60:25:15:2;

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl2的摩爾的量比為60:25:10:2;

或所述PIPES、所述HEPES、所述EGTA和所述MgCl2的摩爾的量比為40:15:5:1;

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4-8mol:20-40ml:0.05-0.15g;

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol:20ml:0.1g;

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為6mol:30ml:0.1g;

或所述尿素、所述丙三醇、所述Triton X-10的配比為4mol:20ml:0.1g。

3.根據權利要求1或2所述的方法,其特征在于:

所述PHEM溶液由終濃度為40-80mM PIPES、終濃度為15-35mM HEPES、終濃度為5-15mM EGTA、終濃度為1-3mM MgCl2和水組成;

或所述PHEM溶液由終濃度為60mM PIPES、終濃度為25mM HEPES、終濃度為15mM EGTA、終濃度為2mM MgCl2和水組成;

或所述PHEM溶液由終濃度為60mM PIPES、終濃度為25mM HEPES、終濃度為10mM EGTA、終濃度為2mM MgCl2和水組成;

或所述PHEM溶液由終濃度為40mM PIPES、終濃度為15mM HEPES、終濃度為5mM EGTA、終濃度為1mM MgCl2和水組成;

或所述透明液由終濃度為4-8M尿素、體積百分比20-40%丙三醇、質量百分含量0.05-0.15%Triton X-100和PHEM溶液組成;

或所述透明液由終濃度為6M尿素、體積百分比20%丙三醇、體積百分比0.1%Triton X-100和PHEM溶液組成;

或所述透明液由終濃度為6M尿素、體積百分比30%丙三醇、體積百分比0.1%Triton X-100和PHEM溶液組成;

或所述透明液由終濃度為4M尿素、體積百分比20%丙三醇、體積百分比0.1%Triton X-100和PHEM溶液組成。

4.根據權利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:

所述PHEM溶液的pH值為6.9。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法,其特征在于:

所述將固定后的植物組織用氫氧化鉀消化的方式為將固定后的植物組織浸在濃度為質量百分比10-15%的氫氧化鉀水溶液中;

或所述將消化后的植物組織用PHEM溶液洗滌的方式為將所述消化后的植物組織浸沒在所述PHEM溶液中。

6.根據權利要求1-5中任一所述的方法,其特征在于:

所述固定采用的固定液由戊二醛、多聚甲醛和所述PHEM溶液組成,

所述戊二醛和所述多聚甲醛的配比為4-8ml:4-8g;

或所述固定液由體積百分含量為4-8%戊二醛、質量百分比為4-8%多聚甲醛和所述PHEM溶液組成。

7.根據權利要求1-6中任一所述的方法,其特征在于:

所述固定的溫度為0-4℃,所述固定的時間為10-16小時;

或所述消化的時間為6-8小時;

或所述洗滌的方式為洗滌3-5次,每次5-10分鐘;

或所述浸沒處理的時間為5-10,所述浸沒處理的方式為每隔1天更換一次所述透明液。

8.根據權利要求1-7中任一所述的方法,其特征在于:所述植物組織為長度為0.5-1cm2的植物葉片或0.5-1cm長的植物組織。

9.一種植物組織的顯微觀察方法,包括權利要求1-8中任一所述的步驟A。

10.一種植物組織顯微鏡檢測的試劑盒,包括權利要求1-8中任一中所述的步驟A的所述PHEM溶液和/或所述透明液。

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