本發明涉及一種小鼠抑郁癥模型的構建方法，屬于病理學實驗領域。

背景技術：

抑郁癥是一種嚴重危害人類身心健康的精神疾病。據世界衛生組織最新數據顯示，全球抑郁癥的發病率為3.1%，而據不完全統計，目前我國抑郁癥發病率高達5%～6%，而且發病率近年來呈逐年上升趨勢。抑郁癥不僅發病率高，而且患者往往病程漫長且容易復發，自殺率高，給許多家庭和社會造成沉重負擔，根據發病源及癥狀表現，抑郁癥可分為躁狂抑郁癥、精神病性抑郁癥、應激抑郁癥、季節性抑郁癥、產后抑郁癥、更年期抑郁癥、創傷后應激綜合癥 (PTSD)等多種類型。不同類型的抑郁癥發病機制或許有所不同，因此建立不同抑郁類型的動物模型，并找到最合理的治療方案是病理學、神經科學領域的一大重要任務。

小鼠是當代生物學領域最主要的模式生物之一。目前，關于小鼠的抑郁模型主要有環境刺激模型、藥物誘導模型、轉基因小鼠、手術制備等。但現有環境刺激抑郁模型大都采用在小鼠日常活動中不常見的刺激源，比如強迫游泳、禁食、禁水、噪音、強光、電擊、懸尾、社會隔離、束縛等，公開號CN102405878B的發明就采用了束縛刺激。這些作為單純的物理應激模型存在不同的缺陷，引發不少研究者的爭議。小鼠在日常活動中經常會遭遇到天敵威脅，以小鼠自身的天敵作為刺激源更應該能引起小鼠的焦慮恐懼反應，而強烈的恐懼是引起PTSD重要原因。

技術實現要素：

為解決現有技術和實際情況中存在的上述問題，本發明提供了一種小鼠抑郁模型的構建方法，所述方法包括：把小鼠放進透明鼠籠中，鼠籠一側通過通道與天敵籠相連；把小鼠天敵隨機放進天敵籠中，每天1.5-2.5小時，連續21天以上即可獲得抑郁小鼠模型。

優選地，把小鼠天敵隨機放進天敵籠中每天2小時。

優選地，所述小鼠為ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一種。

優選地，所述透明鼠籠，材質為有機玻璃，長×寬×高：30cm×18 cm×16 cm。

優選地，所述通道，材質為有機玻璃，直徑為為1cm, 長為8 cm。

優選地，所述天敵籠，材質為有機玻璃，長×寬×高：60 cm×60 cm×60 cm，有帶孔上蓋。

優選地，所述天敵為SD大鼠或散養家貓。

本發明提供了一種簡單方便的小鼠抑郁模型構建方法，為不同類型抗抑郁癥藥物的篩選及評價提供了研究基礎。

本發明的有益效果：建立了一種新型小鼠抑郁模型，為探索不同抑郁類型的發病機制，及篩選治療不同類型抑郁癥的藥物提供了研究基礎。

附圖說明

圖1是本發明實施例的小鼠抑郁癥模型的構建方法的實驗裝置示意圖。

圖2是本發明實施例的小鼠抑郁癥模型的構建方法的小鼠體重變化圖。

圖3是本發明實施例的小鼠抑郁癥模型的構建方法的小鼠糖水偏好實驗結果圖。

圖4是本發明實施例的小鼠抑郁癥模型的構建方法的小鼠血清皮質酮檢測結果示意圖。

具體實施方式

下面結合附圖詳細介紹本發明技術方案。

如圖1所示，該小鼠抑郁模型的裝置包括鼠籠1（長×寬×高：30cm×18 cm×16 cm）、連接通道2（直徑1cm, 長8cm）及天敵籠3（長×寬×高：60 cm×60 cm×60 cm）；連接通道2用來連接鼠籠1及天敵籠3。

上述鼠籠1、連接通道2及天敵籠3的材質均為有機玻璃；鼠籠蓋為普通的鏤空不銹鋼籠蓋；天敵蓋為普通帶孔上蓋（防止天敵逃跑）。

本發明公開了一種小鼠抑郁模型的構建方法，所述方法包括：把小鼠放進透明鼠籠中，鼠籠一側通過通道與天敵籠相連；把小鼠天敵隨機放進天敵籠中，每天2小時，連續21天以上即可獲得抑郁小鼠模型。

所述小鼠為ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一種。

所述天敵為SD大鼠或散養家貓。

試驗例1：小鼠體重變化

材料與方法：

32只成年雄性C57BL/6小鼠購買于鄭州大學實驗動物中心 (3月齡左右, 初始體重21.3 ± 0.4 g), 單籠適應飼養一周后，隨機分為實驗組和對照組，每組16只。實驗組每天放入如圖1所示的透明鼠籠中，天敵籠不定時放入成年散養家貓，每天2小時，對照組天敵籠中不放任何東西。連續刺激21天后進行行為和生理學測試。

分別在實驗的第1、7、14、21天測量兩組小鼠的體重，體重變化如圖2所示。

可以看出，兩組小鼠在第14天時，體重呈現明顯差異(22.7 ± 0.5 vs. 27.4 ± 0.4 g; P < 0.05), 實驗組小鼠明顯小于對照組，第21天時兩組體重差異達到極顯著水平(22.0 ± 0.2 vs. 30.2 ± 0.3; P < 0.01)。

試驗例2：曠場實驗

曠場是由有機玻璃組成的75×45×35 cm³的無蓋的箱子。它的底板用記號筆分成15×15 cm²的格子。實驗開始時，將被測鼠放在曠場一角的格子，讓它自由探測10 min，用秒表記錄其各種行為。測試者們記錄下的主要行為指標包括：第一次離開曠場角落格子的潛伏期，運動能力（所穿越的總格子數），穿越的中心格子數量，修飾次數（用前肢摩擦鼻子或者整理毛發），中心格子和外圍格子中停留的時間等。每次實驗結束，測試者都用水和75%的酒精擦洗曠場，并用吹風機干燥，以減少上一只被測鼠遺留下來的氣味對后面被測鼠的影響，測試結果如表1

表1 曠場測試結果

數據表示為平均數 ± 標準差。獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U檢驗；^*P < 0.05，實驗組vs. 對照組。

結果顯示，實驗組小鼠穿越的中心格子數量，在中心格子的停留時間明顯少于對照組 (54.36 ± 8.280 vs. 36.00 ± 2.717, P = 0.024; 57.65 ± 7.633 vs. 41.48 ± 5.125 s, P = 0.015; 實驗組在后)。

試驗例3：高架十字迷宮測試

高架十字迷宮由不銹鋼鋼板組成。包括5×5 cm²的中心區域，兩個開放臂（30×5 cm）和封閉臂（30×5×15 cm）。封閉臂和開放臂相互對立，呈十字形。迷宮距離地面高度為70 cm。

將小鼠放在朝向開放臂的中心區域，讓其自由探究5 min, 用秒表記錄下小鼠在每個臂的時間（后肢進入臂定義為進入），進入兩個臂的次數；統計時使用每個臂累積的時間，統計時需要主要參數有: 開放臂的時間和頻次，封閉臂的時間和頻次以及中心格子停留的時間[174,175]。作為焦慮行為的參數，我們還計算了在開放臂的時間百分數（公式：開放臂時間/開放臂與封閉臂的總時間），開放臂頻次的百分數（進入開放臂的頻次/開放臂與封閉臂總的進入次數）。

表2 高架十字迷宮結果

數據表示為平均數 ± 標準差。 獨立樣本t檢驗或Mann-Whitney U檢驗；^*P < 0.05，^**P < 0.01實驗組vs. 對照組。

試驗例4：糖水偏好實驗

實驗前訓練小鼠適應含糖飲水，每籠同時放置2個水瓶，一瓶為l％蔗糖水，一瓶為純水，連續3天，每天交換蔗糖水和純水的位置。實驗開始前1天每組小鼠均禁食禁水24小時，然后給與每只小鼠預先稱量好的兩瓶水：一瓶1％蔗糖水，一瓶純水。24 h后，取走兩瓶并稱重。計算兩組動物的糖水偏好(糖水偏好 = 糖水消耗/糖水消耗+純水消耗×100％)，糖水偏好實驗結果見圖3。

與對照組比，實驗組小鼠對糖水的偏好率明顯降低 (60.2% ± 1.6% vs. 89.4% ± 2.5%; P < 0.01)。

試驗例5：血清皮質酮檢測

實驗結束后，小鼠眼球取血，血液在4℃, 3000 r/min條件下離心15min, 取上清。血清皮質酮(CORT)的測定嚴格按照小鼠CORT酶聯免疫檢測（ELASA）試劑盒（南京建成?，貨號：20160302020）。說明書所列步驟進行操作。皮質酮的測定范圍為0.5―100 ng/mL,批內與批間變異系數分別為6.5% 與8.2%，試驗結果如圖4。

ELASA激素檢測的結果顯示，與對照組相比，實驗組小鼠的血清皮質酮含量遠高于對照組 （30.6 ± 5.3 vs. 22.3 ± 3.1 ng/mL; P < 0.05）。

結論

以上試驗首先對數據進行Kolmogorov Smirnov正態性檢驗，對正態分布的數據采用獨立樣本T檢驗，對于非正態分布的數據采用Mann-Whitney U 檢驗，取顯著水平為α= 0.05。

綜合以上實驗結果可以看出，經過21天的天敵應激刺激，實驗組小鼠在行為和生理上均表現出明顯的抑郁現象，表明按照本方法，能夠成功獲得抑郁癥動物模型。

最后應說明的是：以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明，盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。