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一種大蒜根尖分生組織再生的方法及應用與流程

文檔序號:12084589閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種大蒜根尖分生組織再生的方法,其特征在于按如下的步驟進行:

(1)以大蒜根尖分生組織為外植體誘導愈傷組織:

選取沒有病斑的大蒜鱗莖剝去外皮后自來水沖洗30 min,然后于紫外滅菌后的超凈工作臺中用0.1%(w/w)的 HgCl2浸泡20 min,無菌蒸餾水洗滌2-3次,75%(w/w)的酒精浸泡10 min,無菌蒸餾水洗滌3-5遍后,將大蒜鱗莖接入無菌培養瓶中生根;待根長至2-3cm時,切下大蒜根部,用解剖針縱劃,將其接入篩選培養基中進行愈傷組織誘導;誘導培養基為MS+1 mg·L-1 2,4-D+ 1 mg·L-1 6-BA+30.0 g· L-1 蔗糖+7.5 g ·L-1 瓊脂,pH=5.8;

(2)大蒜根尖愈傷組織繼代和再分化:

大蒜根尖愈傷組織在誘導培養基上生長4周后,可進行繼代,繼代培養約2周時,愈傷組織顆粒感明顯,呈淺黃色,繼代培養4周時,愈傷組織增值明顯,繼代兩次后進行再分化,繼代培養基與誘導培養基相同,再分化培養基為:

MS+3 mg·L-16-BA+30g·L-1蔗糖+7.5g·L-1瓊脂,pH=5.8;

(3)試管鱗莖誘導與收獲

再分化培養1周時愈傷組織表面開始出現大量的綠點,2周可以觀察到綠點不斷生長,逐漸形成不定芽,3周時,大部分綠點形成不定芽,4周不定芽長至約2cm,7周后不定芽生長長至5-8 cm的簇生試管苗,將簇生試管苗移入誘導試管鱗莖培養基,其培養基為MS + 120 g · L-1 綿白糖 + 6.8 g · L-1瓊脂, pH=7.5,試管鱗莖成熟后取出,清洗表層培養基后陰干,放4 ℃冰箱低溫儲存。

2.權利要求1所述大蒜根尖分生組織再生的方法在提高組培苗成活率方面的應用。

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