本發明涉及一種鐵皮石斛的栽培方法，特別是一種石斛堿含量高的鐵皮石斛的栽培方法。

背景技術：

鐵皮石斛別稱鐵皮蘭、吊蘭、云南鐵皮、鐵皮吊蘭，是蘭科石斛屬多年生草本植物，鐵皮石斛是石斛類藥材的上品，素有“中華仙草-藥中黃金”之美稱，以莖入藥，含有多糖、石斛堿、生物堿等有效成分，具有滋陰清熱、生津益胃、潤喉明目等功效，在抗腫瘤、提高人體免疫力、治療胃腸道疾病、抗衰老、抗氧化、抗血小板聚集、降低血糖、治療白內障等方面均有良好療效。

現代藥理學研究表明，鐵皮石斛對非特異性及特異性免疫均有增強作用，在抗腫瘤、抗氧化、降低血糖以及白內障的治療等方面，藥理作用顯著。其化學成分較復雜，已確定的化合物類型主要有：生物堿類、多糖類、菲類、聯芐母核類，其中生物堿類、多糖類藥理活性較為顯著。石斛堿型倍半萜類生物堿為石斛屬植物特有，其中石斛堿是最早發現，研究最多的生物堿；金釵石斛堿與非甾體類抗炎藥藥理作用相似，具有免疫調節、抗炎、擴張血管等作用。

隨著鐵皮石斛的保健功效被人們廣泛的認識和接受，野生鐵皮石斛已遠遠不能滿足人們的需求。人們已經開始采用人工栽培鐵皮石斛，鐵皮石斛的栽培方法中，培養基是鐵皮石斛賴以生存的條件，不同的培養原料和配方可對鐵皮石斛的生長、產量和活性成分等產生重要的影響。現有技術中鐵皮石斛用的培養基及現有栽培方法，不利于產出的鐵皮石斛的品質保證。特別是不能保證鐵皮石斛中石斛堿含量，使得最終得到的鐵皮石斛中石斛堿含量低。

技術實現要素：

本發明的目的，是提供一種鐵皮石斛的栽培方法，本發明方法培養鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是石斛堿的含量的高。

本發明是這樣實現的。

一種鐵皮石斛的栽培方法，取鐵皮石斛原球莖，經組織培養、移栽、管理和采收，即得。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，具體包括以下步驟：

(1)取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；

(2)取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養50-60天，得鐵皮石斛移栽幼苗；

(3)取鐵皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚寬6-8米，長20-50米，硼高1.7-2.5米，棚頂覆蓋塑料薄膜和70-80％遮陰度的遮陰網，棚內安裝自來水管，棚四周和入口裝有防蟲網；棚內搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質支撐面，然后在畦面上鋪設4-6cm的基質；

(4)在種植畦的基質上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內，然后用基質蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后10-15天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)控制基質正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10-15天噴1次水，可每15-20天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)每月用40％樂果乳油1000倍水溶液或50％馬拉硫磷1000倍水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網；

(8)采收：11月至次年4月份間進行采收，剪大留小，剪老留嫩。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述步驟(1)中，所述生根培養基為:在每升ms培養基中添加1-3mgnaa、維生素c2-5mg、陳皮粉末3-8mg、瓊脂3-8mg和土豆泥1-5mg，混勻，即得。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述生根培養基為:在每升ms培養基中添加2mgnaa、維生素c3.5mg、陳皮粉末6mg、瓊脂6mg和土豆泥3mg，混勻，即得。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述步驟(2)中，所述幼苗培養基主要由按重量份計算的玉米糊100-120份、淫羊藿粉末50-60份和當歸粉末50-60份混勻后得到。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述幼苗培養基主要由按重量份計算的玉米糊110份、淫羊藿粉末55份和當歸粉末55份混勻后得到。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述基質主要由按重量份計算的黃豆渣10-20份、馬鈴薯泥10-20份、香蕉泥10-20份、椰子汁20-30份和中藥渣50-60份混勻后得到。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述基質主要由按重量份計算的黃豆渣15份、馬鈴薯泥15份、香蕉泥15份、椰子汁25份和中藥渣55份混勻后得到。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的忍冬藤5-15份、丹參10-20份、肉桂5-15份、雞內金10-20份、山楂5-15份、白芨5-15份和茵陳5-15份按下述方法制備：忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，加8-12倍量水浸泡20-30min后，煎煮2-3h，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

前述的鐵皮石斛的栽培方法，所述中藥渣主要由按重量份計算的忍冬藤10份、丹參15份、肉桂10份、雞內金15份、山楂10份、白芨10份和茵陳10份按下述方法制備：忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，加10倍量水浸泡25min后，煎煮2.5h，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

申請人對本發明進行了大量的實驗研究，部分實驗如下：

實驗例1石斛堿含量考察.

1材料與方法

1.1材料

1.1.1鐵皮石斛1：按實施例1進行栽培，采收得到鐵皮石斛1。

1.1.2鐵皮石斛2：栽培時，培養基中不含忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，其余方法同實施例1進行栽培后，采收得到鐵皮石斛2。

1.2儀器和試劑

石斛堿標準品：成都曼思特生物技術有限公司，must-12080608。ae240電子天平：瑞士meitler；hh-s數控恒溫水浴鍋：金華市文華科教實驗儀器廠；bm510旋轉蒸發儀：日本yamato公司；6890n氣相色譜儀：美國安捷倫公司；uv-2450紫外分光光度計：日本島津公司；甲醇(色譜純)：天津市科密歐化學試劑有限公司；其余試劑均為分析純；苯酚：上海凌峰化學試劑有限公司；硫酸：上海凌峰化學試劑有限公司。

2方法

2.1供試品溶液的制備

2.1.1供試品溶液1的制備：

取本發明鐵皮石斛(鐵皮石斛1)樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末3.34g，加200ml90％乙醇，回流1小時，過濾，傾出上清液，再加100ml90％乙醇，回流1小時，傾出上清液，合并上述2次上清液，置旋轉蒸發儀濃縮，水浴鍋50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25ml，即得供試品溶液1。

2.1.2供試品溶液2的制備

取鐵皮石斛2樣品，置烘箱中50℃，干燥，粉碎，過三號篩，取過濾后藥材粉末3.34g，加200ml90％乙醇，回流1小時，過濾，傾出上清液，再加100ml90％乙醇，回流1小時，傾出上清液，合并上述2次上清液，置旋轉蒸發儀濃縮，水浴鍋50℃蒸干，干燥品加甲醇溶解，定容至25ml，即得供試品溶液2。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取石斛堿對照品50.01lmg至100ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，得500.1mg/l石斛堿對照品母液。50.01mg/l溶液，作為對照品溶液，備用。

2.3色譜條件

色譜柱：db-1毛細管柱(30mm×0.25mm，0.25um)；程序升溫：初始溫度為80℃，以10℃/min的速率升溫至250℃，保持5分鐘；進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為250℃，進樣量10ul，理論塔板數按石斛堿計，不低于10000。

2.4標準曲線制備

精密量取對照品溶液0.2、0.5、0.8、1.0、2.0、4.0ml分別置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件測定。以峰面積積分為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為a＝0.7522c-0.0252，r＝0.9997，表明石斛堿在0.10-2.00ug范圍內具有良好的線性關系。

2.5精密度試驗

精密吸取石斛堿對照品溶液l0ul，連續6次進樣，記錄峰面積，石斛堿峰面積的rsd為1.58％，表明儀器精密度良好。

2.6重復性試驗

按上述方法制備6份供試品溶液1和供試品溶液2，按上述色譜條件進行測定。石斛堿峰面積的rsd分別為2.05％和2.06％。

2.7穩定性試驗

取同一供試品溶液1，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、l2小時進樣，記錄石斛堿峰面積，rsd為2.88％。結果表明，供試品溶液1在12小時內穩定。

取同一供試品溶液2，在室溫下放置，分別于0、2、4、6、8、l2小時進樣，記錄石斛堿峰面積，rsd為2.89％。結果表明，供試品溶液2在12小時內穩定。

2.8回收率試驗

取已知含量0.46mg/g)的鐵皮石斛粉末6份，每份約1.65g，精密稱定。準確加入石斛堿對照品母液2ml，按上述方法制備供試品溶液1和供試品溶液2，在上述色譜條件下進行測定，計算回收率。結果平均回收率為97.1％和96.8％，rsd分別為2.5％和2.6％。

2.9樣品含量測定

按上述供試品溶液1和供試品溶液2的制備方法和測定條件，分成6份，測定6份鐵皮石斛1樣品和6份鐵皮石斛2樣品中石斛堿的含量，記錄結果，結果取平均值，結果見表1。

表1石斛堿含量測定結果

由表可知，本發明方法栽培得到的鐵皮石斛，最終采收的鐵皮石斛中石斛堿的含量較高。鐵皮石斛的品質好。

與現有技術相比，本發明方法培養鐵皮石斛時，最終產出的鐵皮石斛品質好，有效成分含量高，特別是石斛堿的含量的高。

具體實施方式

實施例1。

一種鐵皮石斛的栽培方法，具體包括以下步驟：

(1)取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；所述生根培養基為:在每升ms培養基中添加2mgnaa、維生素c3.5mg、陳皮粉末6mg、瓊脂6mg和土豆泥3mg，混勻，即得；

(2)取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養55天，得鐵皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培養基由玉米糊110kg、淫羊藿粉末55kg和當歸粉末55kg混勻后得到；

(3)取鐵皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚寬6-8米，長20-50米，硼高1.7-2.5米，棚頂覆蓋塑料薄膜和75％遮陰度的遮陰網，棚內安裝自來水管，棚四周和入口裝有防蟲網；棚內搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質支撐面，然后在畦面上鋪設4-6cm的基質；

(4)在種植畦的基質上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內，然后用基質蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后13天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)控制基質正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每13天噴1次水，可每18天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)每月用40％樂果乳油1000倍水溶液噴施，進行葉面防治，防蟲采用防蟲網；

(8)采收：11月至次年4月份間進行采收，剪大留小，剪老留嫩。

所述基質由黃豆渣15kg、馬鈴薯泥15kg、香蕉泥15kg、椰子汁25kg和中藥渣55kg混勻后得到；所述中藥渣由忍冬藤10kg、丹參15kg、肉桂10kg、雞內金15kg、山楂10kg、白芨10kg和茵陳10kg按下述方法制備：忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，加10倍量水浸泡25min后，煎煮2.5h，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

實施例2.

(1)取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；所述生根培養基為:在每升ms培養基中添加3mgnaa、維生素c5mg、陳皮粉末8mg、瓊脂8mg和土豆泥5mg，混勻，即得；

(2)取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養60天，得鐵皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培養基由玉米糊120kg、淫羊藿粉末60kg和當歸粉末60kg混勻后得到；

(3)取鐵皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚寬8米，長50米，硼高2.5米，棚頂覆蓋塑料薄膜和80％遮陰度的遮陰網，棚內安裝自來水管，棚四周和入口裝有防蟲網；棚內搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質支撐面，然后在畦面上鋪設4-6cm的基質；

(4)在種植畦的基質上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內，然后用基質蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后15天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)控制基質正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每15天噴1次水，可每20天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)每月用50％馬拉硫磷1000倍水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網；

(8)采收：11月至次年4月份間進行采收，剪大留小，剪老留嫩。

所述基質由黃豆渣20kg、馬鈴薯泥20kg、香蕉泥20kg、椰子汁30kg和中藥渣60kg混勻后得到；所述中藥渣由忍冬藤15kg、丹參20kg、肉桂15kg、雞內金20kg、山楂15kg、白芨15kg和茵陳15kg按下述方法制備：忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，加12倍量水浸泡30min后，煎煮3h，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，即得。

實施例3.

(1)取鐵皮石斛原球莖，于生根培養基中培養，直至長出1-2片真葉高度為1.5-2.5cm的鐵皮石斛幼苗；所述生根培養基為:在每升ms培養基中添加1mgnaa、維生素c2mg、陳皮粉末3mg、瓊脂3mg和土豆泥1mg，混勻，即得；

(2)取高度為1.5-2.5cm、含1-2片真葉的鐵皮石斛幼苗，接種于幼苗培養基中，培養50天，得鐵皮石斛移栽幼苗；所述幼苗培養基由玉米糊100kg、淫羊藿粉末50kg和當歸粉末50kg混勻后得到；

(3)取鐵皮石斛移栽幼苗移栽到大棚中，所述大棚寬6米，長20米，硼高1.7米，棚頂覆蓋塑料薄膜和70％遮陰度的遮陰網，棚內安裝自來水管，棚四周和入口裝有防蟲網；棚內搭建畦底架空的種植畦，用木架作為種植畦的框架，然后鋪設孔徑為0.3-0.5cm的塑料平板作為基質支撐面，然后在畦面上鋪設4-6cm的基質；

(4)在種植畦的基質上挖2-3cm深的小洞，取鐵皮石斛移栽幼苗，用0.3-0.5％的高錳酸鉀稀釋液浸根消毒后，將幼苗根部放入小洞內，然后用基質蓋好，栽培密度為100-200叢/平方米，每叢2-5株，叢距為5-10cm；

(5)保證大棚內溫度白天保持在18-22℃，夜晚15-20℃，濕度控制在80％-90％，移栽后移栽后10天噴施0.4-0.6％尿素水溶液；

(6)控制基質正常含水量在30-40％，空氣濕度保持60％-70％，每10天噴1次水，可每15天噴1次0.5％～0.8％磷酸二氫鉀水溶液；

(7)每月用40％樂果乳油1000倍水溶液噴施進行葉面防治，防蟲采用防蟲網；

(8)采收：11月至次年4月份間進行采收，剪大留小，剪老留嫩。

所述基質由黃豆渣10kg、馬鈴薯泥10kg、香蕉泥10kg、椰子汁20kg和中藥渣50kg混勻后得到；所述中藥渣由忍冬藤5kg、丹參10kg、肉桂5kg、雞內金10kg、山楂5kg、白芨5kg和茵陳5kg按下述方法制備：忍冬藤、丹參、肉桂、雞內金、山楂、白芨和茵陳，加8倍量水浸泡20min后，煎煮2h，過濾，取濾渣，干燥，粉碎成粗顆粒，即得。