本發明屬于畜牧良種繁殖中的實驗動物模型構建，具體涉及一種偏頭痛動物模型及其構建方法。

背景技術：

1、偏頭痛是一種常見的慢性神經血管性疾病，其病理生理機制復雜，病因不明。目前建立了硬腦膜外炎性湯刺激模型、腹腔注射硝酸甘油模型、皮質擴散性抑制（csd）等偏頭痛動物模型，能夠部分模擬偏頭痛樣癥狀。然而，由于以上動物模型的發明多基于表型，存在一定的局限性，單一模型不能完全模擬偏頭痛的病癥，尤其是反復發作和單側發作的特點，往往只能反映偏頭痛的部分病理生理機制。

2、降鈣素基因相關肽（cgrp）是一種在偏頭痛病理生理機制中發揮核心作用的神經肽，在偏頭痛發作期間血清水平升高，并且靜脈內輸注cgrp能夠誘導偏頭痛患者的偏頭痛樣發作。cgrp是一種強效的微血管擴張劑，存在α-cgrp和β-cgrp兩種形式。在偏頭痛急性發作期，cgrp的釋放導致顱周血管舒張，并且作用于痛覺纖維上的cgrp受體，將痛覺信息傳遞至中樞神經系統，導致中樞敏化。

3、因此，亟需設計一種基于偏頭痛發病機制且更便于操作的動物模型，以便于研究者有效地認識并研究偏頭痛的發生機制、發展規律和干預措施，以期能夠為偏頭痛發病機制、治療靶點等相關研究提供可靠的技術支持及研究思路。

技術實現思路

1、針對上述技術問題，本發明提供了一種偏頭痛動物模型及其構建方法。

2、本發明提供的技術方案如下：

3、第一方面，本發明提供一種偏頭痛動物模型的構建方法，包括以下步驟：

4、將sd大鼠置于清潔級環境中適應性飼養至少一周，自由攝食飲水；

5、適應結束后，至少連續7天，每天一次，向大鼠鼻腔滴入降鈣素基因相關肽溶液。

6、在一種可能實現的方式中，所述每天一次為每天固定時間段一次。

7、在一種可能實現的方式中，所述降鈣素基因相關肽溶液由降鈣素基因相關肽溶于生理鹽水或者磷酸鹽緩沖液（pbs）溶劑中制成。

8、進一步，所述降鈣素基因相關肽溶液的濃度為2-6μg/ml。

9、更進一步，所述降鈣素基因相關肽溶液的濃度為3-5μg/ml。

10、優選的，所述降鈣素基因相關肽溶液的濃度為5μg/ml。

11、在一種可能實現的方式中，所述降鈣素基因相關肽溶液的滴入量為30μl/次。

12、第二方面，本發明提供一種偏頭痛動物模型，采用第一方面所述的方法構建。

13、第三方面，本發明提供第二方面所述的偏頭痛動物模型的偏頭痛樣行為的評估方法，包括以下步驟：

14、對大鼠進行機械性痛覺過敏測試，獲得機械痛閾值；

15、對大鼠進行冷刺激測試，獲得冷痛閾值；

16、對大鼠進行為畏光測試，評估畏光行為；

17、對大鼠進行免疫熒光測試，檢測c-fos和cgrp的表達量。

18、在一種可能實現的方式中，畏光測試，評估畏光行為的方法包括：

19、將大鼠放置在明暗箱的中心，進行自由探索以適應環境；

20、適應環境后，進行測試，檢測大鼠的運行軌跡，記錄在明暗室中花費的時間和在兩室之間移動的次數；

21、評估畏光行為。

22、在一種可能實現的方式中，所述對大鼠進行免疫熒光測試，檢測c-fos和cgrp的表達量的方法，包括以下步驟：

23、樣本預處理：將大鼠細胞依次采用固定劑、通透劑和封閉液處理，得到第一樣本；

24、一抗孵育：將特異性的c-fos和cgrp抗體的溶液，孵育于第一樣本上，使得抗體與抗原充分結合，得到第二樣本；

25、洗滌：洗滌第二樣本，去除未結合的一抗，得到第三樣本；

26、二抗孵育：孵育與一抗宿主物種相應的二抗于第三樣本上，得到第四樣本；所述二抗用于與熒光團結合；

27、洗滌：洗滌第四樣本，去除未結合的二抗，得到第五樣本；

28、核染色及封片：對第五樣本的細胞核進行染色及封片，得到第六樣本；

29、檢測：檢測第六樣本的熒光信號。

30、本發明提供的技術方案與現有技術相比，至少具有如下有益效果：

31、1、本發明所述動物模型構建方法基于cgrp靶點，能夠模擬偏頭痛的主要癥狀，包括痛覺過敏和畏光等。

32、2、本發明所述動物模型構建方法只需通過向大鼠鼻腔滴入cgrp溶液即可實現，無創且無介入操作，方法簡單，應用性強。

33、3、本發明所述動物模型構建方法所得動物模型表型穩定，可重復性良好。

34、4、本發明所述動物模型能夠用于研究偏頭痛的發病機制和評估新的治療方法，以期能夠為偏頭痛發病機制、治療靶點等相關方面的研究提供更可靠的技術支持和研究思路。

技術特征：

1.一種偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據權利要求1所述的偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，所述每天一次為每天固定時間段一次。

3.根據權利要求1所述的偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，所述降鈣素基因相關肽溶液由降鈣素基因相關肽溶于生理鹽水或者磷酸鹽緩沖液中制成。

4.根據權利要求3所述的偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，所述降鈣素基因相關肽溶液的濃度為2-6μg/ml。

5.根據權利要求4所述的偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，所述降鈣素基因相關肽溶液的濃度為3-5μg/ml。

6.根據權利要求1所述的偏頭痛動物模型的構建方法，其特征在于，所述降鈣素基因相關肽溶液的滴入量為30μl/次。

7.一種偏頭痛動物模型，其特征在于，采用權利要求1-6任一項所述的方法構建。

8.權利要求7所述的偏頭痛動物模型的偏頭痛樣行為的評估方法，其特征在于，包括以下步驟：

9.根據權利要求8所述的偏頭痛動物模型的偏頭痛樣行為的評估方法，其特征在于，畏光測試，評估畏光行為的方法包括：

10.根據權利要求8所述的偏頭痛動物模型的偏頭痛樣行為的評估方法，其特征在于，所述對大鼠進行免疫熒光測試，檢測c-fos和cgrp的表達量的方法，包括以下步驟：

技術總結
本發明公開了一種偏頭痛動物模型及其構建方法。所述構建方法包括：將SD大鼠置于清潔級環境中適應性飼養至少一周，自由攝食飲水；至少連續7天，每天一次，向大鼠鼻腔滴入降鈣素基因相關肽溶液。本發明所述的動物模型構建方法，以與偏頭痛發病機制密切相關的CGRP為靶標，通過連續鼻腔滴入CGRP，使大鼠產生機械痛閾增高、自發性疼痛行為增加、畏光程度增加等偏頭痛樣行為，操作方法簡單。本發明所述動物模型構建方法只需通過向大鼠鼻腔滴入CGRP溶液即可實現，無創且無介入操作，方法簡單，應用性強。本發明所述偏頭痛大鼠模型表型穩定，能夠用于研究偏頭痛的發病機制和評估新的治療方法，以期能夠為偏頭痛發病機制、治療靶點等相關方面的研究提供更可靠的技術支持和研究思路。

技術研發人員：肖哲曼,周艷杰,秦鶴洋,張莉莉,曾子銘,王霖濤
受保護的技術使用者：武漢大學人民醫院（湖北省人民醫院）
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28