專利名稱：一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，屬于磷脂技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
富含亞油酸的磷脂酰膽堿(DLPC)具有重要的生物學(xué)功能，研究表明多烯磷脂(PPC)能有效預(yù)防和治療肝臟疾病及肝臟纖維化，并可以預(yù)防動脈硬化引起的心血管疾病。PPC不僅影響肝臟纖維化過程，而且也可使已存在的肝臟纖維化回復(fù)，其原理是基于各種肝病均存在肝細胞膜與細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)損傷并伴磷脂丟失，細胞呼吸與能量合成不足這一中心環(huán)節(jié)，采取補充外源性磷脂使膜流動性與跨膜轉(zhuǎn)運系統(tǒng)活性增強，受損的細胞膜因此得以恢復(fù)；s.Lieber研究發(fā)現(xiàn)，肝纖維化的患者幾乎都患有B或C型肝炎，說明氧化應(yīng)激和纖維化可以誘導(dǎo)C或B型肝炎的發(fā)生，PPC可以用來治療B或C型肝炎，預(yù)防肝纖維化和降低轉(zhuǎn)氨酶和膽紅素的濃度。2007年S.Lieber等人研究了高脂肪食物引起的脂肪性肝炎的治療效果。發(fā)現(xiàn)CYP2E1誘發(fā)氧應(yīng)激產(chǎn)生大量的自由基是非酒精引起的脂肪性肝炎的主要原因，PPC具有較強的抗氧化作用，具有降低氧應(yīng)激的功能。這方面進一步的研究認為PPC活性功能的發(fā)揮主要是DLPC的功能。DLPC主要存在于大豆磷脂中，一般方法由大豆粉末磷脂分離得到的大豆磷脂酰膽堿(PC-90)，其DLPC含量在40%-50%。傳統(tǒng)方法要更進一步提高DLPC的含量非常困難。通過文獻檢索國內(nèi)外未發(fā)現(xiàn)通過酶法進一步提高PC-90中DLPC含量的文獻報道
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的在于提供一種酶法提高DLPC含量的方法。以PC-90為原料通過酶法與亞油酸進行酸解反應(yīng)，從而得到更高含量的DPLC產(chǎn)品。本發(fā)明的技 術(shù)方案:以大豆PC-90為原料，將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應(yīng)，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產(chǎn)物，離心回收固定化脂肪內(nèi)，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到較高DLPC含量的產(chǎn)品。(I)原料:以大豆醇溶性磷脂為原料，要求原料中磷脂酰膽堿含量大于或等于90%，其中DLPC的含量為40% -50% ；(2)所用的有機相溶劑可以是甲苯、氯仿或者正己烷；(3)PC_90 與亞油酸質(zhì)量為1: 1-1: 10;(4)固定化脂肪酶占總底物質(zhì)量百分比為5%-35%，水分添加量占酶質(zhì)量的百分比為 0% -10% ；(5)所用的固定化脂肪酶可以是Lipozyme TL IM或Novozyme 435 ；(6)反應(yīng)溫度為45°C _70°C，反應(yīng)時間為12h_84h。一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，所用的大豆PC-90原料來自于油廠油脂加工的副產(chǎn)品，并經(jīng)進一步加工所得到的PC-90產(chǎn)品，其大豆PC含量大于或等于90%, PC-90中DLPC含量在40% -50%之間。通過將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應(yīng)，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產(chǎn)物，離心回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到較高DLPC含量的產(chǎn)品。本發(fā)明的有益效果:一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，為制備較高高純度DLPC提供了一種可行的方法，使用該方法可以方便的制備在醫(yī)藥工業(yè)，脂質(zhì)體工業(yè)及保健食品工業(yè)具有廣泛用途的較高純度DLPC產(chǎn)品。表1.該方法所得產(chǎn)品指標
權(quán)利要求
1.一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是以大豆PC-90為原料，將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應(yīng)，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產(chǎn)物，離心回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到較高DLPC含量的產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是原料:以大豆醇溶性磷脂為原料，要求原料中磷脂酰膽堿含量大于或等于90%，其中DLPC的含量為 40% -50% (HPLC 歸一化法)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是所用的有機相溶劑可以是甲苯、氯仿或者正己烷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是PC-90與亞油酸質(zhì)量比為1:1-1: 10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法提高二亞 油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是固定化脂肪酶占總底物質(zhì)量百分比為5% -35%，水分添加量占酶質(zhì)量的百分比為0% -10%。
6.所用的固定化脂肪酶可以是LipozymeTL IM或Novozyme 435。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，其特征是反應(yīng)溫度為45°C _70°C，反應(yīng)時間為12h-84h。
全文摘要
一種酶法提高二亞油酰磷脂酰膽堿含量的方法，屬于磷脂技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以大豆PC-90為原料，將原料、亞油酸和固定化脂肪酶加入到一定有機相中，進行酶法酸解反應(yīng)，脫溶后通過氯仿/甲醇(2/1，V/V)提取目的產(chǎn)物，離心回收固定化脂肪酶，脫溶，丙酮洗滌后脫溶得到DLPC含量大于60％(HPLC歸一化法)的產(chǎn)品。
文檔編號C12P13/00GK103074391SQ201110342969
公開日2013年5月1日 申請日期2011年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月2日
發(fā)明者曹棟, 史蘇佳, 曹沛 申請人:江南大學(xué)