專利名稱：一種扁座殼孢菌大量產孢培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種通過響應面法優化得到的扁座殼孢菌大量產孢培養基。
背景技術：
扁座殼孢菌(Aschersonia placenta)是蟲生真菌的重要成員，其有性型為莫勒菌0foe77erie77a)，隸屬于子囊菌門、糞菌綱、肉座菌目、麥角菌科。已有研究表明扁座殼孢菌及其有性型莫勒菌能引發粉虱及介殼類昆蟲群體性流行病的發生，這使得它成為有效的生物防治因子。而作為生物防控因子，真菌的孢子由于存活期較長、對環境耐受性較強而更易 于大量生產并商業化。因此大量生產該菌孢子成為至關重要的問題。據研究報道，培養基成分對繁殖體的屬性如產量、生控效能、對干燥的容忍性及存活率等等都有很顯著的影響，且因菌株不同而存在差異。
發明內容
本發明的目的在于提供一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，該培養基有利于消除培養基成分對繁殖體的屬性如產量、生控效能、對干燥的容忍性及存活率等的影響。為實現上述目的，本發明的技術方案是一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水組成，其中小米33.0 g 35. 0g，胰蛋白胨2. 90 g
3.10g，磷酸氫二鉀1.00 g 1.20g，硫酸鎂0. 3g 0. 5g，瓊脂20. 0g，用水定容至IL0上述扁座殼孢菌大量產孢培養基為固體產孢培養基。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基可按常規方法配制，滅菌條件為溫度121°C，壓力范圍 0. I MPa 0. 15MPa,時間 30min。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種前需將其冷卻至凝固。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種時接種量要控制在培養基重量比的10%以內。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基中，碳源為小米，氮源為胰蛋白胨，其最優配比為小米33. 8g，胰蛋白胨3g，磷酸氫二鉀I. Hg,硫酸鎂0. 37g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。本發明的有益效果是通過響應面法優化得到扁座殼孢菌大量產孢培養基，不僅避免了培養基成分對繁殖體的屬性如產量、生控效能、對干燥的容忍性及存活率等的影響，而且孢子產量較高，孢子的單位產量可達I. TTAXlO^pores/L以上，為等量PDA培養基產量I. 792X 109spores/L的10倍。該培養基為該菌孢子的大規模批量生產提供了參考條件。
圖I是本發明扁座殼孢菌大量產孢培養基的構成示意圖。圖2是通過響應面法優化本發明培養基所得Hiillet(X1)和K2HPO4(X2)兩因素對孢子產量的影響的響應曲面圖。圖3是通過響應面法優化本發明培養基所得Hiillet(X1)和K2HPO4(X2)兩因素對孢子產量的影響的等高線圖。圖4是通過響應面法優化本發明培養基所得millet (X1)和MgSO4 7H20(X3)兩因素對孢子產量的影響的響應曲面圖。圖5是通過響應面法優化本發明培養基所得millet (X1)和MgSO4 7H20(X3)兩因素對孢子產量的影響的等高線圖。 圖6是通過響應面法優化本發明培養基所得K2HPO4 (X2)和MgSO4 WH2O(X3)兩因素對孢子產量的影響的響應曲面圖。圖7是通過響應面法優化本發明培養基所得K2HPO4 (X2)和MgSO4 *7H20 (X3)兩因素對孢子產量的影響的等高線圖。
具體實施例方式本發明的扁座殼孢菌大量產孢培養基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水組成，其中小米33. 0 g 35. 0g，胰蛋白胨2. 90 g 3. 10g，磷酸氫二鉀I. 00 g 1.20g，硫酸鎂0. 3g 0. 5g，瓊脂20. 0g，用水定容至IL0上述扁座殼孢菌大量產孢培養基為固體產孢培養基。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基可按常規方法配制，滅菌條件為溫度121°C，壓力范圍 0. I MPa 0. 15MPa,時間 30min。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種前需將其冷卻至凝固。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種時接種量要控制在培養基重量比的10%以內。上述扁座殼孢菌大量產孢培養基中，碳源為小米，氮源為胰蛋白胨，其最優配比為小米33. 8g，胰蛋白胨3g，磷酸氫二鉀I. Hg,硫酸鎂0. 37g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。下面結合具體實施例對利用本發明的扁座殼孢菌大量產孢培養基培養該菌獲得孢子的過程及效果作進一步的說明。實施例I :從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上獲得該菌，進行分離純化，并借助形態及分子生物學證據對其進行鑒定。將其接種至上述培養基和PDA對照培養基中，分別按照常規方法進行孢子生產。結果表明扁座殼孢菌大量產孢培養基的孢子的單位產量可達
I.774X 1010 spores/L以上，為等量PDB培養基產量1.692X 109 spores/L的10倍左右。其中，扁座殼孢菌大量產孢培養基按最優配比進行配制。實施例2 :從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上獲得該菌，進行分離純化，并借助形態及分子生物學證據對其進行鑒定。將其接種至上述培養基和PDA對照培養基中，分別按照常規方法進行孢子生產。結果表明扁座殼孢菌大量產孢培養基的孢子的單位產量可達1.534X101。spores/L以上，為等量PDB培養基產量I. 528X IO9 spores/L的10倍左右。其中，扁座殼孢菌大量產孢培養基配方為其中小米33.0g，胰蛋白胨2.95g，磷酸氫二鉀1.20g，硫酸鎂0. 3g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。實施例3 :從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上獲得該菌，進行分離純化，并借助形態及分子生物學證據對其進行鑒定。將其接種至上述培養基和PDA對照培養基中，分別按照常規方法進行孢子生產。結果表明扁座殼孢菌大量產孢培養基的孢子的單位產量可達1.657X101。spores/L以上，為等量PDB培養基產量I. 643X IO9 spores/L的10倍左右。其中，扁座殼孢菌大量產孢培養基配方為其中小米34. 5g，胰蛋白胨3. 10g，磷酸氫二鉀1.0(^，硫酸鎂0. 3g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。以上是本發明的較佳實施例，凡依本發明技術方案所作的改變，所產生的功能作用未超出本發明技術方案的范圍時，均屬于本發明的保護范圍。·
權利要求
1.一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于由小米、胰蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水組成，其中小米33. O g 35. Og，胰蛋白胨2. 90 g 3. 10g，磷酸氫二鉀I. 00 g I. 20g，硫酸鎂0. 3g 0. 5g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。
2.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基為固體產孢培養基。
3.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基的滅菌條件為溫度121°C，壓力范圍0. I MPa 0. 15MPa，時間30min。
4.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種前需將其冷卻至凝固。
5.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基在接種時接種量要控制在培養基重量比的10%以內。
6.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基中，碳源為小米，氮源為胰蛋白胨，其最優配比為小米33. Sg，胰蛋白胨3g，磷酸氫二鉀I. 118，硫酸鎂0. 37g，瓊脂20. 0g，用水定容至1L。
7.根據權利要求I所述的一種扁座殼孢菌大量產孢培養基，其特征在于所述扁座殼孢菌大量產孢培養基通過響應面法優化得到。
全文摘要
本發明涉及一種通過響應面法優化得到的扁座殼孢菌大量產孢培養基，由小米、胰蛋白胨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和水組成，其中小米33.0g～35.0g，胰蛋白胨2.90g～3.10g，磷酸氫二鉀1.00g～1.20g，硫酸鎂0.3g～0.5g，瓊脂20.0g，用水定容至1L。該培養基不僅有利于消除培養基成分對繁殖體的屬性如產量、生控效能、對干燥的容忍性及存活率等的影響，而且孢子產量較高，孢子的單位產量可達1.774×1010spores/L以上，為等量PDA培養基產量1.792×109spores/L的10倍。該培養基為該菌孢子的大規模批量生產提供了參考條件。
文檔編號C12N1/14GK102747027SQ20121026744
公開日2012年10月24日 申請日期2012年7月31日 優先權日2012年7月31日
發明者關雄, 宋飛飛, 李小霞, 涂潔, 邱云鋒, 邱君志 申請人:福建農林大學