一種靈芝白果果酒及其制備的方法
【專利摘要】本發明公開了一種靈芝白果果酒及其制備的方法，該工藝涉及生物工程【技術領域】。以銀杏白果為主要原料采用固體發酵技術和釀酒工藝制得靈芝白果果酒。白果切成3－5mm小塊，滅菌后接入5～30%靈芝種子液，用保鮮膜密封發酵，加入靈芝發酵物重量30~70%的大米煮成的米飯，大米重量1~5%的酒曲和2~5倍的水，經過10~30℃，10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。該酒酒精度8~30%，總黃酮含量1~15mg/L，銀杏內脂10~150mg/L，靈芝三萜含量50～500mg/L，蛋白質60～500mg/L，可溶性糖<2.0%，多糖100~800mg/L，皂苷20~500mg/L。該酒具有抗氧化和保護肝臟的功效。
【專利說明】一種靈芝白果果酒及其制備的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物工程【技術領域】，特指利用靈芝采用固體發酵技術轉化銀杏白果，經過兩次發酵、過濾和勾兌生產靈芝銀杏白果果酒的方法和用途。
【背景技術】
[0002]銀杏白果的主要成分是蛋白質、淀粉和脂肪，另外含有黃酮、萜類化合物、銀杏酸、氫化白果酸、氫化白果亞酸、銀杏醇、白果酚和多糖。我國中醫古書，一直將白果列為重要藥材，白果酸抑制多種桿菌及皮膚真菌，并對葡萄球菌、鏈球菌、白喉、炭瘟桿菌，枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、傷寒菌等都有不同程度的抑制作用。從鮮白果中提取出來的白果酚酸，有降低血壓，增加血管的滲透性作用。臨床試驗證明，經常食用白果，可治療高血壓、止白帶、咳嗽、發熱，以及心腦血管、呼吸系統、皮膚病、牙痛等疾病，還有清熱擾菌、溫肺益氣、擴張血管、增加血流量、定痰喘、去皺紋、防衰老、潤音喉、健身美容、延年益壽等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酚酸，易導致人體食欲不振、脫皮、觸痛，不等程度的肝損害、腎小球腎炎，白果酚酸有溶血作用，引起驚厥和死亡。由于這些副作用阻礙了白果的大量的食用。因此采用生物工程技術，一方面可以強化白果的藥用價值，同時具有降低白果毒性，對于開發利用白果資源具有重要社會學意義，同時也會產生巨大的經濟價值。
[0003]國內關于銀杏白果發酵酒有部分研究和報道，已經申請發明專利共十多項，這些專利基本上采用浸泡、勾兌或者液體發酵，如中國專利(CN01113680.4)介紹了一種以銀杏為主要原料加入48度至52度白酒中浸潰提取有效成份后得酒液，然后再加入銀杏提取物即銀杏酮、蜂蜜勾兌而成；專利(CN03131562.3)主要介紹以草毒和浸泡、蒸煮后的銀杏、紅棗、葡萄為原料，經糖、米曲、活性酵母發酵24~36小時，攪拌勾兌50~60度的酒，封存5~15天后壓汁，經粗、細過濾，取汁與糖按50:1的比例調配，該酒具有軟化血管、降低血月旨、補血、活血、潤肺、健脾之功效和營養、醫用價值；專利(CN96115885.9)主要涉及采用銀杏葉80~110克、小米70~85克、糯米50~80克、高梁45~60克、糖化酶30~40克、紅曲75~95克、白酒30~45克、水15~35`克等原料經過發酵獲得銀杏酒，該酒可預防防治由動脈硬化引起的疾病、腦血管障礙后遺癥、腦受傷后遺癥等；專利(CN1376776)涉及銀杏葉低溫粉碎機內粉碎，白酒浸泡，脫苦以及白酒勾兌，該酒降低血清膽固醇、預防腦供血不足、腦功能性障礙提高人體耐缺氧能力、促進紅細胞的生成功能。目前，對白果發酵的方法主要銀杏葉或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他輔料直接發酵；胡廣東，宋瑞濱曾經報道米與銀杏葉或白果一同蒸煮，蒸煮冷卻后加入米曲糖化發酵，經過后續壓榨獲得銀杏果酒；。用這些方法得到的酒由于含有銀杏葉或白果中的活性成分，如黃酮和萜類因而具有一定的功效。由上述研究可知，銀杏白果可以與米混合通過與酒曲發酵獲得含有銀杏活性成分的功能性白酒，但是無論銀杏葉還是其提取物或者白果都含有一定量的銀杏毒素，如氫氰酸、銀杏酚酸，使得銀杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了銀杏酒的銷售量。專利(申請號:CN201010145712.4)涉及藥用真菌金耳轉化銀杏白果獲得的白果酒，該酒同時含有金耳和銀杏的活性成分具有預防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌體免疫力等功效，專利(申請號201110197681.1)原材料白果經過打漿、粉碎、糊化、液化和糖化、液體好氧發酵和酒精發酵制得靈芝銀杏白果黃酒，該酒具有預防高血壓和抗氧化等功效。但是使用這兩種方法制備的酒，由于生物轉化階段采用液體發酵，發酵成本大，易污染，轉化白果量低。本發明采用固態發酵技術，可以大規模的轉化白果，降低成本。

【發明內容】

[0004]本發明提供的是一種靈芝白果果酒的釀制技術，以銀杏白果為主要原料，利用靈芝采用固體好氧發酵技術，酒精發酵技術相結合，經過兩次菌種發酵獲得的發酵液，該發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝銀杏白果果酒。
[0005]靈芝銀杏白果果酒，該酒酒精度8-30%，總黃酮含量l_15mg/L，銀杏內脂10-150mg/L,靈芝三萜含量50-500mg/L,蛋白質60-500mg/L,可溶性糖<2.0%，多糖100-800mg/L，皂苷20_500mg/L。該酒具有抗氧化功效。
[0006]本發明的目的在于提供一種靈芝白果果酒的制備方法，按下述步驟制備得到:
(1)液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶40~150mL，100~130°C滅菌10~60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種，在轉速60~180轉/分鐘，溫度22~33°C培養5~10天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
(2)液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50~80%轉入種子罐，經過100~120°C滅菌，冷卻至室溫，以3~10% (體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度2 2~33°C，罐壓0.03~0.08兆帕，攪拌轉速60~250轉/分，通風量1:0.3~1:1.2v/v/m培養3~8天，制得靈芝液體深層培養菌種；
(3)靈芝固態發酵:白果切成3~5mm的顆粒，110~150°C滅菌10~60分鐘，冷卻到室溫后，以5~20% (體積與重量比)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22~33°C，濕度55~90%培養5~20天獲得靈芝發酵白果發酵物；
(4)靈芝銀杏白果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按30- 70% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2-5倍的水，混合均與，經過10 - 30°C, 10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。用該工藝生產的靈芝銀杏白果果酒，其特征在于色質米黃色至褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0007]許多研究都已研究證明靈芝三萜具有保護肝臟功能(Su CH, Lain麗，ChanMH.Hepato-protective trit erpenoids from Ganoderma Tsugae Murri11.MushroomBiology and Mushroom Products.Hongkong: The Chinese University Press, 1993，275~283;王明宇，林志彬:靈芝三萜類成分在體內外對小鼠免疫性肝損傷的影響.中國藥學雜志2000，35(12)，809-812)，靈芝多糖能夠抗氧化(張志軍；李淑芳；魏雪生；陳曉明.靈芝多糖體外抗氧化活性的研究；楊紅梅；王黎；陳潔；李宜培；裴瑞；.靈芝多糖肽對Alzheimer樣大鼠海馬超微結構和抗氧化能力的影響.中國老年學雜志，2009, 29(18):2351-2353)，本發明提供的靈芝銀杏白果果酒，具有保護肝臟和抗氧化等功效。
【具體實施方式】
[0008]下面結合實施例對本發明做進一步闡述:
其中所述的靈芝白果果酒功能性成分按下列方法測定:
總黃酮含量的測定采用亞硝酸鈉一硝酸鋁法(鄧斌，蔣剛彪，陳六平.分光光度法測定食品包裝紙用紫甘薯總黃酮的含量.包裝工程，2008，29 (I): 27~29.);靈芝三萜含量的測定采用王翔飛介紹的測定方法(王翔飛，潘旭東，劉雯霞，等.黃花瓦松中總三萜成分的含量的測定.中國民族民間醫藥，2009, 18(10):11.);銀杏內酯含量測定采用分光光度法(張渝陽，王鑫，趙麗娟，荀紹馨，田明，張新，王曉寧，鄧桂春:分光光度法測定銀杏萜內酯的含量.遼寧化工，2006，35 (10):618~620);蛋白質含量測定采用考馬斯亮藍(陳建勛、王曉峰:植物生理學實驗指導.實驗19:考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量.華南理工大學出版社P54~55):氫氰酸含量測定依據中華人民共和國國家標準GB/T15665-1995:豆類、配糖氫氰酸含量的測定；銀杏酚酸采用熒光分析法測定(田亞平，尤文元，李或娜，熒光分析法測定銀杏酚酸.分析化學研究簡報.2006年特刊，sl55-sl57)，靈芝酸測定采用紫外分光光度法(Tang YJ, Zhong JJ.Fed-batch fermentation of Ganoderma lucidumfor hyperproduction of polysaccharide and ganoderic acid.Enzyme and MicrobialTechnology 31 (2002) 20 - 28)。多糖含量的測定采用硫酸一苯酚法(趙陽楠，常繼東.苯酚硫酸法和間接碘量法測定靈芝多糖含量比較[J].食用菌，2007，(3): 58-61.)，還原糖含量測定米用3,5 —二硝基水楊酸法。
[0009]本發明中實施例1~3中所使用的靈芝菌種為可以購買到的任意一種靈芝菌種，包括:赤芝、紫芝、樹舌等多種靈芝菌種。玉米漿為市售任意廠家的，但是蛋白質含量不低于37%，靈芝斜面菌種采用PDA培養基制備。1000mLPDA培養基含200g馬鈴薯提取液(去皮馬鈴薯切成碎片、1000mL蒸餾水煮沸30分鐘，八層紗布過濾，濾液定容至1000mL,濾液即為馬鈴薯提取液)加入蔗糖20g、瓊脂20g，煮沸待瓊脂完全溶化后分裝試管，塞上棉塞，121°C滅菌，制成斜面。無菌接種靈芝菌種，3`0°C培養7天，4°C冷藏待用。
[0010]實施例1
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20克，黃豆餅粉50克，玉米漿50克，麩皮60克，磷酸二氫鉀0.6克，硫酸鎂0.5克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶40mL，100°C滅菌60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma在轉速60轉/分鐘,溫度22°C培養10
天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖100克，黃豆餅粉10克，玉米漿10克，麩皮10克，磷酸二氫鉀0.6克，硫酸鎂0.5克，豆油7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50%轉入種子罐，經過100°C滅菌，冷卻至室溫，以10% (體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度22°C，罐壓0.03兆帕，攪拌轉速70轉/分，通風量1:0.3v/v/m培養8天,制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:白果切成3mm的顆粒，110°C滅菌60分鐘，冷卻到室溫后，以20%(體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種。覆蓋保鮮膜，在溫度32°C，濕度90%培養20天獲得靈芝發酵白果發酵物；靈芝銀杏白果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按30% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的1.5%的酒曲，大米重量2倍的水，混合均與，經過10°C，50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。用該工藝生產的靈芝銀杏白果果酒，其特征在于色質米黃色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0011]實施例2
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖60克，黃豆餅粉30克，玉米漿30克，麩皮30克，磷酸二氫鉀0.3克，硫酸鎂0.3克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶80mL，115°C滅菌40分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma在轉速120轉/分鐘,溫度28°C培養7
天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖60克，黃豆餅粉25克，玉米漿31克，麩皮30克，磷酸二氫鉀0.25克，硫酸鎂0.25克，豆油4.1克，水1000mL ；液體深層培養培養基按罐體積60%轉入種子罐，經過115°C滅菌，冷卻至室溫，以6% (體積t匕)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度27°C，罐壓0.05兆帕，攪拌轉速120轉/分，通風量1:0.8v/v/m培養5天，制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:白果切成4mm的顆粒，130°C滅菌30分鐘，冷卻到室溫后，以10%(體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度60°C，濕度85%培養10天獲得靈芝發酵白果發酵物；
靈芝銀杏白果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按50% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米 飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的3%的酒曲，大米重量3倍的水，混合均與，經過20°C，25天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。用該工藝生產的靈芝銀杏白果果酒，其特征在于色質米淺褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0012]實施例3
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖100克，黃豆餅粉10克，玉米漿10克，麩皮10克，磷酸二氫鉀0.06克，硫酸鎂0.05克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶140mL, 128°C滅菌55分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma Iucidum)，在轉速180轉/分鐘,溫度33°C培養5天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
'液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20克，黃豆餅粉45克，玉米漿45克，麩皮60克，磷酸二氫鉀0.06克，硫酸鎂0.05克，豆油2克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積80%轉入種子罐，經過120°C滅菌，冷卻至室溫，以3%(體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度33°C，罐壓0.08兆帕，攪拌轉速250轉/分，通風量1:1.lv/v/m培養8天，制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:白果切成5mm的顆粒，150°C滅菌10分鐘，冷卻到室溫后，以5% (體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22°C，濕度60%培養5天獲得靈芝發酵白果發酵物；
靈芝銀杏白果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按70% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物以及大米重量的5%的酒曲，大米重量5倍的水，混合均與，經過30°C，10天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。用該工藝生產的靈芝銀杏白果果酒，其特征在于色質褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0013]實施例1、實施例2和實施例3的測定結果顯示在表1表1:實施例1一 3成分分析表
【權利要求】
1.靈芝銀杏白果果酒，其特征在于該酒酒精度8-30%，總黃酮含量l-15mg/L，銀杏內脂10-150mg/L，靈芝三萜含量50-500mg/L，蛋白質60_500mg/L，可溶性糖〈2.0%，多 100-800mg/L，皂苷 20_500mg/L。
2.權利要求1所述的一種靈芝白果果酒的制備方法，其特征在于按下述步驟制備得到: (1)液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，水1000mL,按照體積比 16~60%分裝三角瓶，100~130°C滅菌10~60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種，在轉速60~180轉/分鐘，溫度22~33°C培養5~10天，制得靈芝液體搖瓶菌種； (2)液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50~80%轉入種子罐，經過100~120°C滅菌，冷卻至室溫，以體積比3~10%接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫 度22~33°C，罐壓0.03~0.08兆帕，攪拌轉速60~250轉/分，通風量1: 0.3~1:1.2 (v/v/m)培養3~8天，制得靈芝液體深層培養菌種； (3)靈芝固態發酵:白果切成3~5mm的顆粒，110~150°C滅菌10~60分鐘，冷卻到室溫后，以體積與重量比5~20%接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22~33°C，濕度55~90%培養5~20天獲得靈芝發酵白果發酵物； (4)靈芝銀杏白果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按重量比30- 70%稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2-5倍的水，混合均與，經過10 — 30°C，10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝白果果酒。
【文檔編號】C12G3/02GK103695225SQ201210366381
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年9月27日 優先權日:2012年9月27日
【發明者】張志才, 鄭惠華, 任曉峰, 張才九, 陳惠 , 謝德中 申請人:江蘇大學, 江蘇安惠生物科技有限公司