一種靈芝果酒及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種靈芝果酒及其制備方法，該工藝涉及生物工程【技術領域】，以玉米、小麥和大米為主要原料采用固體發酵技術和釀酒工藝制得靈芝酒。玉米和小麥浸泡，使含水率達到40～80%，滅菌后接入5～30%靈芝種子液，用保鮮膜密封發酵，加入30~70%靈芝發酵物重量的大米煮成的米飯，和大米重量1~5%的酒曲，2~5倍的水，經過10~30℃，10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。該酒酒精度8~30%，靈芝三萜含量50～500mg/L，蛋白質60～500mg/L，還原糖<2.0%，多糖100~800mg/L，色質米黃色至褐色。該靈芝果酒，具有保護肝臟和抗氧化等功效。
【專利說明】一種靈芝果酒及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物工程【技術領域】，特指利用大米、玉米、小麥為主要原料，以靈芝為菌種，采用固體發酵技術生產靈芝果酒的方法和用途。
【背景技術】
[0002]靈芝XGanoderma又稱紅芝、木靈芝、靈芝草,在分類學上屬于真菌界、擔子菌亞門、多孔菌目、多孔菌科、靈芝屬。靈芝是一種非常珍貴的藥用真菌，是中國醫藥寶庫中的精品。靈芝自古以來就有“仙草”之稱，不但可以治療多種疾病，而且具有滋補強體、扶正固本、有利于機體保持或恢復穩態等功效，備受人們青睞。靈芝菌蓋木栓質，腎形，紅褐、紅紫、或者暗紫色，具有漆狀光澤，有換裝棱紋和輻射狀皺紋，大小和形態變化很大。菌柄側生，極少偏生，長于菌蓋直徑，紅褐色，有光澤。靈芝喜高溫高濕，強散射光，通氣良好的環境,多生長在闊葉樹的木樁旁、枯樹根和倒木上,夏秋雨季后生長旺盛。靈芝性溫,味甘，具有益精氣，強筋骨等藥用功能。人工培植的靈芝約50~60天子實體成熟。公元前300年左右的《禮記》，記載有“食所加庶，羞有芝柄”。公元前239年《呂氏春秋》有這樣的記載“和之美者，越駱之菌”。可見我國的祖先很早就開始服食靈芝。關于靈芝，很多古代文獻也提及它可以作為一種食品服用。陶弘景曾指出:“凡得芝草，便正爾食之，無余節度，故皆不云服法也。”李時珍亦指出:“昔四酷采芝，群仙服食，則芝亦菌屬可食者，故移入菜部”。這些都是在我國歷史上靈芝藥食兩用的記載。
[0003]靈芝具有生理活性的成分主要有生物堿類、多糖類、氨基酸、三萜類、有機鍺微量元素及核苷酸類。靈芝能治療神經衰弱、支氣管哮喘、頭暈、失眠和心悸等疾病，對腎盂腎炎、胃病、十二指腸潰瘍、高血壓、慢性肝炎、冠心病、白血球減少、高血清膽固醇以及癌癥有不同程度的療效，且無副作用。
[0004]國內關于靈芝酒有部分研究和報道，已經申請發明專利二十多項，這些專利基本上采用浸泡、用靈芝提取液勾兌或者液體發酵為主獲得的靈芝酒。如李中、何金興公開了用紅靈芝或紅靈芝提取液，甜靈芝或用包`覆劑除苦味的紅靈芝提取液、甜靈芝提取液、甜菊糖和用水、白糖、檸檬酸煉成的糖漿按勾兌酒基得到靈芝酒(專利號92107554.5);鄧鳳翔公開了將靈芝等補藥用酒進行多次浸提后，再用水煎煮，將浸泡用的酒和煎煮汁混合制得補養酒液，再經調制過濾、貯存得到具有美容、養生、保健功效的靈芝酒(93117937.8);馮選凹介紹了用優質高粱酒作基酒，并配有靈芝提取液，將靈芝子實體置于加入了靈芝提取液的高粱酒中進行泡制得到靈芝酒的方法(94106761.0);田希文公開了利用紅高梁、糯米、靈芝菌絲體及酵母混合發酵得到靈芝酒的方法(93111978.2)等等，用這些方法獲得靈芝酒成本較高、生產周期長或者產生較多的廢水污染。嚴重制約著靈芝酒的發展。
[0005]固態發酵是微生物在沒有或基本沒有游離水的固態基質上的發酵方式，固態基質中氣、液、固三相并存，即多孔性的固態基質中含有水和水不溶性物質同。水分活度低，基質水不溶性高，微生物易生長，酶活力高，酶系豐富；由于發酵過程中沒有或有少量的自由水，因此基質抑制或者產物抑制現象很少發生，因此代謝產物濃度較高；發酵過程粗放，不需嚴格無菌條件；設備構造簡單、投資少、能耗低、易操作；后處理簡便、污染少，基本無廢水排放。
[0006]因此本專利采用固態發酵技術，以玉米和小麥為基質繁殖靈芝菌絲體獲得含有靈芝多糖和靈芝三萜的發酵物，該發酵物與大米米飯、酒曲混合制得靈芝酒，該靈芝酒由于含有靈芝三萜和靈芝多糖等活性物質，因此該酒具有保肝、抗氧化、增強肌體免疫之功效。

【發明內容】

[0007]本發明提供的是一種靈芝果酒的釀制技術，以小麥、玉米和大米為主要原料，利用靈芝采用固體好氧發酵技術，酒精發酵技術相結合，經過兩次菌種發酵獲得的發酵液，該發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。
[0008]靈芝果酒，該酒該酒酒精度8-30% (質量/體積m/V)，靈芝三萜含量50_500mg/L，蛋白質60-500mg/L，還原糖〈2.0%，靈芝多糖100_800mg/L。
[0009]本發明的目的在于提供一種靈芝果酒的制備方法，按下述步驟制備得到:
(1)液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶40~150mL，100~130°C滅菌10~60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種，在轉速60~180轉/分鐘，溫度22~33°C培養5~10天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
(2)液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50~80%轉入種子罐，經過100~120°C滅菌，冷卻至室溫，以3~10% (體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度22~33°C， 罐壓0.03~0.08兆帕，攪拌轉速60~250轉/分，通風量1:0.3~1:1.2 (v/v/m)培養3~8天，制得靈芝液體深層培養菌種；
(3)靈芝固態發酵:玉米和小麥按照1:0.5~4 (重量/重量)的比例混合均勻，用水浸泡使含水率達到40~80%(重量百分含量)，110~150°C滅菌10~60分鐘，冷卻到室溫后，以5~20% (體積與重量比)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22~33°C，濕度55~90%培養5~20天獲得靈芝發酵物；
(4)靈芝果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按30- 70% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2 — 5倍的水，混合均與，經過10 - 30°C,10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。用該工藝生產的靈芝果酒，其特征在于色質米黃色至褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0010]許多研究都已研究證明靈芝三萜具有保護肝臟功能(Su CH, Lain麗，ChanMH.Hepato-protective trit erpenoids from Ganoderma Tsugae Murri11.MushroomBiology and Mushroom Products.Hongkong: The Chinese University Press, 1993，275~283;王明宇，林志彬:靈芝三萜類成分在體內外對小鼠免疫性肝損傷的影響.中國藥學雜志2000，35(12)，809-812)，靈芝多糖能夠抗氧化(張志軍；李淑芳；魏雪生；陳曉明.靈芝多糖體外抗氧化活性的研究；楊紅梅；王黎；陳潔；李宜培；裴瑞；.靈芝多糖肽對Alzheimer樣大鼠海馬超微結構和抗氧化能力的影響.中國老年學雜志，2009, 29(18):2351-2353)，因此本發明提供的靈芝果酒具有保護肝臟和抗氧化等功效。【具體實施方式】
[0011]下面結合實施例對本發明做進一步闡述:
其中所述的靈芝果酒功能性成分按下列方法測定:
蛋白質含量測定采用考馬斯亮藍(陳建勛、王曉峰:植物生理學實驗指導.實驗19 --考馬斯亮藍G-250法測定蛋白質含量.華南理工大學出版社p54~55);靈芝三萜測定采用紫外分光光度法(王翔飛，潘旭東，劉雯霞，等.黃花瓦松中總三萜成分的含量的測定.中國民族民間醫藥，2009，18(10):11)。多糖含量的測定采用硫酸一苯酚法(趙陽楠，常繼東.苯酚硫酸法和間接碘量法測定靈芝多糖含量比較[J].食用菌，2007，(3): 58-61.)，還原糖含量測定采用3，5 —二硝基水楊酸法。
[0012]本發明中實施例1~3中所使用的靈芝菌種為可以購買到的任意一種靈芝菌種，包括:赤芝、紫芝、樹舌等多種靈芝菌種。玉米漿為市售任意廠家生產，但是其蛋白質含量不低于37%。所采用的酒曲為黃酒酒曲或白酒酒曲的任意一種酒曲；靈芝斜面菌種采用PDA培養基制備。1000mLPDA培養基含200g馬鈴薯提取液(去皮馬鈴薯切成碎片、1000mL蒸餾水煮沸30分鐘，八層紗布過濾，濾液定容至1000mL,濾液即為馬鈴薯提取液)加入蔗糖20g、瓊脂20g，煮沸待瓊脂完全溶化后分裝試管，塞上棉塞，121°C滅菌，制成斜面。無菌接種靈芝菌種，30°C培養7天，4V冷藏待用。
[0013]實施例1
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20克，黃豆餅粉50克，玉米漿50克，麩皮60克，磷酸二氫鉀0.6克，硫酸鎂0. 5克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶40mL，100°C滅菌60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma在轉速60轉/分鐘,溫度22°C培養10
天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖100克，黃豆餅粉10克，玉米漿10克，麩皮10克，磷酸二氫鉀0.6克，硫酸鎂0.5克，豆油7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50%轉入種子罐，經過100°C滅菌，冷卻至室溫，以10% (體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度22°C，罐壓0.03兆帕，攪拌轉速70轉/分，通風量1:0.3v/v/m培養8天,制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:玉米與小麥按1:0.5 (重量比)混合均勻，用水浸泡使含水率達到45%，110°C滅菌60分鐘，冷卻到室溫后，以20% (體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度32°C，濕度90%培養20天獲得靈芝發酵發酵物；
靈芝果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按30% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的1.5%的酒曲，大米重量2倍的水，混合均與，經過10°C，50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。用該工藝生產的靈芝果酒，其特征在于色質米黃色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0014]實施例2
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖60克，黃豆餅粉30克，玉米漿30克，麩皮30克，磷酸二氫鉀0.3克，硫酸鎂0.3克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶80mL，115°C滅菌40分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma在轉速120轉/分鐘,溫度28°C培養7天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖60克，黃豆餅粉25克，玉米漿31克，麩皮30克，磷酸二氫鉀0.25克，硫酸鎂0.25克，豆油4.1克，水1000mL ；液體深層培養培養基按罐體積60%轉入種子罐，經過115°C滅菌，冷卻至室溫，以6% (體積t匕)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度27°C，罐壓0.05兆帕，攪拌轉速120轉/分，通風量1:0.8v/v/m培養5天，制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:玉米與小麥按1:2 (重量比)混合均勻，用水浸泡使含水率達到60%，130°C滅菌30分鐘，冷卻到室溫后，以10% (體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度60°C，濕度85%培養10天獲得靈芝發酵物；
靈芝果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按50% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的3%的酒曲，大米重量3倍的水，混合均與，經過20°C，25天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。用該工藝生產的靈芝果酒，其特征在于色質淺褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0015]實施例3
液體搖瓶菌種的制備:蔗糖100克，黃豆餅粉10克，玉米漿10克，麩皮10克，磷酸二氫鉀0.06克，硫酸鎂0.05克，水1000mL,分裝250mL三角瓶，每瓶140mL, 128°C滅菌55分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種iGanoderma Iucidum)，在轉速180轉/分鐘,溫度33°C培養5天，制得靈芝液體搖瓶菌種；
'液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20克，黃豆餅粉45克，玉米漿45克，麩皮60克，磷酸二氫鉀0.06克，硫酸鎂0.05克，豆油2克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積80%轉入種子罐，經過120°C滅菌，冷卻至室溫，以3%(體積比)接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度33°C，罐壓0.08兆帕，攪拌轉速250轉/分，通風量1:1.lv/v/m培養8天，制得靈芝液體深層培養菌種；
靈芝固態發酵:玉米與小麥按1:3.5 (重量比)混合均勻，用水浸泡使含水率達到75%，150°C滅菌10分鐘，冷卻到室溫后，以5% (體積比重量)接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22 °C，濕度60%培養5天獲得靈芝發酵發酵物；
靈芝果果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按70% (重量比)稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物以及大米重量的5%的酒曲，大米重量5倍的水，混合均與，經過30°C，10天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。用該工藝生產的靈芝果酒，其特征在于色質褐色，具有濃郁的果香味和靈芝發酵的特有香味。
[0016]實施例1、實施例2和實施例3的測定結果顯示在表1 表1:實施例1成分分析表
項目I實施例1 I實施例2 I實施例3~~
【權利要求】
1.靈芝果酒，其特征在于該酒該酒酒精度質量與體積比計8-30%，靈芝三萜含量50-500mg/L，蛋白質 60_500mg/L，還原糖〈2.0%，靈芝多糖 100_800mg/。
2.權利要求1所述的靈芝果酒的制備方法，其特征在于按下述步驟制備得到: (1)液體搖瓶菌種的制備:蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，水1000mL,按照體積比16~60%分裝三角瓶，100~130°C滅菌10~60分鐘，冷卻后接入靈芝試管斜面菌種，在轉速60~180轉/分鐘，溫度22~33°C培養5~10天，制得靈芝液體搖瓶菌種； (2)液體擴大培養菌種的制備:根據種子罐體積，按下述比例稱取蔗糖20~100克，黃豆餅粉10~50克，玉米漿10~50克，麩皮10~60克，磷酸二氫鉀0.06~0.6克，硫酸鎂0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液體深層培養培養基按罐體積50~80%轉入種子罐，經過100~120°C滅菌，冷卻至室溫，以體積比3~10%接種量接入靈芝的液體搖瓶菌種，在溫度22~33°C，罐壓0.03~0.08兆帕，攪拌轉速60~250轉/分，通風量1:.0.3~1:1.2 (v/v/m)培養3~8天，制得靈芝液體深層培養菌種； (3)靈芝固態發酵:玉米和小麥按照重量比1:0.5~4的比例混合均勻，用水浸泡使含水率達到重量百分含量40~80%，110~150°C滅菌10~60分鐘，冷卻到室溫后，以體積與重量比5~20%的接種量接入靈芝的液體深層培養的菌種，覆蓋保鮮膜，在溫度22~33°C，濕度55~90%培養5~20天獲得靈芝發酵物； (4)靈芝果酒的釀造:稱取靈芝發酵物重量，按重量比30- 70%稱取大米，加與大米等重量的水煮成米飯，冷卻后與靈芝發酵物、大米重量的1~5%的酒曲，大米重量2 — 5倍的水，混合均與，經過10 - 30°C，10~50天發酵，發酵液經過過濾、勾兌獲得靈芝果酒。
【文檔編號】C12G3/02GK103695226SQ201210366382
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2012年9月27日 優先權日:2012年9月27日
【發明者】張志才, 張才九, 任曉峰, 謝德中 申請人:江蘇大學