專利名稱：一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，屬于發酵乳制品及植物蛋白加工技術領域。
背景技術：
益生菌系指與人和動植物體保持共生關系的對宿主具有健康促進作用的一大類微生物的總稱。目前，國際公認的與人體共生的典型的益生乳酸菌主要包括:以雙歧桿菌和嗜酸乳桿菌為代表的第一代益生乳酸菌和以鼠李糖乳桿菌和干酪乳桿菌為代表的第二代新型益生乳酸菌。較之第一代益生乳酸菌，第二代新型益生乳酸菌更耐氧、耐胃酸、耐膽鹽；發酵性能更好、存活力更高。目前，鼠李糖乳桿菌發酵產品主要為牛乳產品，而其發酵植物蛋白酸乳產品，在國內外尚處于研究起步階段，且缺乏生產性能優良的專用菌種。我國具有天然的大豆資源優勢，大豆不僅在營養保健的各種功能性成分和促進益生菌繁殖的生長因子方面可與牛乳相媲美，而且不含膽固醇和乳糖。因此，研制開發出綜合益生菌和大豆的有益特性于一身、集感官風味和多種營養保健功能于一體的第二代新型益生菌(如鼠李糖乳桿菌)發酵大豆乳產品，是當今發酵乳制品工業和大豆加工產業的發展方向與新的增長點，必將引領市場與消費者對健康食品需求的新潮流。發酵劑的制備是研制開發新型發酵乳制品的關鍵環節和首要任務。傳統培養型發酵劑存在活菌含量低(IO7 108cfu/mL)、接種量大(2% 5%)、保藏期短(4°C，I 2d)、生產工序多、勞動強度大、培養周期長、菌種極易退化和污染等弊端，這將直接導致發酵乳制品產品質量不穩和生產效率低下。因而，新型發酵劑——高效濃縮型直投式發酵劑應運而生。高效濃縮型直投式發酵劑系乳酸菌經液體深層高密度培養、濃縮分離、與保護劑介質混溶、再經冷凍或冷凍干燥、無菌包裝，制成直投式凍藏發酵劑或直投式凍干發酵劑。具有活菌含量高(101° 1012cfu /g)、保藏期長(凍干發酵劑4°C，>1年)、接種量較傳統培養型發酵劑降低1000 10000倍、在發酵乳制品生產中省略了發酵劑的制備工序、減少了菌種車間的投資和空間、防止了菌種的退化和污染，可使發酵乳制品工業的勞動生產率和產品質量大大提高。直投式凍藏發酵劑在應用中，維持冷凍費用較高，運輸不方便，對發酵劑中心的依賴性過強。而直投式凍干發酵劑，保藏和運輸方便，機械化程度高，便于工業化批量生產，是今后直投式發酵劑的主要發展方向。影響高效濃縮型直投式凍干發酵劑細胞存活率及貯藏穩定性的主要因素有:菌種特性、培養基、培養條件與收獲期、起始細胞濃度、凍干保護劑及其PH值、冷凍速度、干燥過程、殘留水分、包裝形式、保藏溫度等。其中，優化篩選廉價增菌培養基和高效凍干保護劑是研制開發直投式凍干發酵劑的關鍵技術。研究表明:乳酸菌對營養要求十分苛刻，實驗室常用的乳酸菌培養基(如MRS、M17等)，成分復雜，制作繁瑣，價格昂貴。目前，常用的脫脂乳培養基和乳清培養基雖然經濟易得，價格低廉，但脫脂乳培養基粘度大，不易濃縮分離菌體；而乳清培養基在加熱滅菌過程中易發生乳清蛋白的熱變性而產生沉淀。因此，根據我國資源優勢，積極尋求來源廣泛，經濟易得的廉價原料，優化篩選適合乳酸菌大量生長的增菌培養基，是實現我國大規模工業化生產直投式凍干發酵劑的關鍵技術之一。凍干保護劑是最為復雜、最難選擇的關鍵因素，它不僅影響乳酸菌在凍干過程中的細胞存活率，也影響保藏期間的細胞穩定性，其配方及其制備方法屬于商業機密。因此，優化篩選高效凍干保護劑是研制開發直投式凍干發酵劑的關鍵技術之二。綜上可見，積極研制開發可替代進口產品的具有自主創新的高效濃縮型直投式益生菌大豆酸乳發酵劑，對于提高發酵大豆乳制品產品的質量和功能性，推動我國高效濃縮型直投式益生菌發酵劑產業化的技術進步，促進我國發酵大豆乳制品及植物蛋白加工產業的發展，具有重要意義。申請號為200710156323.X的中國發明公開了 “一種嗜酸乳桿菌、用該菌種發酵豆乳的方法及發酵豆乳飲料”，是將一株嗜酸乳桿菌進行豆乳及豆乳飲料的發酵，但其所用發酵劑形式為脫脂乳培養的傳統液態發酵劑。申請號為200910040265.3的中國發明公開了“直投式干酪乳桿菌鼠李糖亞種凍干粉的制備方法”，但其所用MRS培養基成分復雜，制作繁瑣，成本較高；真空干燥時間需18 20h ;且未明確該菌也是否適用于發酵大豆酸乳。

發明內容
本發明的目的是提供一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，以實現鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的工業化規模生產。本申請人進行了大量新型益生菌的收集、分離篩選工作，對新型益生菌在大豆乳中的生長、發酵特性等進行了詳細研究，發現來自于中國科學院微生物研究所的鼠李糖乳桿菌ASl.2466，在大豆乳培養基中具有良好的生長和發酵特性，培養12小時活菌數可達109cfu/mL，并對其進行了后續大豆酸乳直投式發酵劑制備方法的研究。本申請人針對乳酸菌對營養要求苛刻的特點，通過大量試驗,選擇價廉易得的半野生植物一菊芋為原料，研究了菊芋汁基礎培養基的制備工藝；并以鼠李糖乳桿菌ASl.2466為試驗菌株，研究了在菊芋汁基礎培養基添加單一營養因子對鼠李糖乳桿菌細胞生長量的影響，進一步利用正交試驗優化篩選出鼠李糖乳桿菌的菊芋汁復合增菌培養基；通過研究接種量、培養溫度、基質起始pH值、培養方式等因素對鼠李糖乳桿菌細胞生長量的影響，進一步利用正交試驗優化確定了鼠李糖乳桿菌增殖培養的工藝條件；研究了離心力、離心時間對細胞離心損失率和存活率的影響，確定了最高活菌收得率的最適離心工藝條件；與此同時，本申請人在大量試驗基礎上，研究了不同的復合保護劑對鼠李糖乳桿菌凍干存活率的影響，優化篩選出了抗冷凍干燥的復合保護劑配方；對優化篩選出的抗冷凍干燥的復合保護劑配方制成的鼠李糖乳桿菌凍干粉劑，通過細胞加速試驗，進一步篩選出既抗冷凍干燥又耐貯藏的優良復合保護劑配方。通過研究添加復合保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液在冷凍過程中冷凍速度對細胞存活率的影響，確定了合理可行的冷凍干燥工藝；通過研究鼠李糖乳桿菌凍干發酵劑在不同封存方式(常壓封存、真空封存)下包裝、在不同溫度(_18°C、4°C)下貯藏的活菌數和發酵活力的變化，確定了凍干發酵劑的保藏條件和保藏期。具體的，本發明的鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，包括以下步驟:
(O鼠李糖乳桿菌的增殖培養 ①鼠李糖乳桿菌廉價增菌培養基的制備
a.鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基的制備 原料:菊芋，蒸餾水；
制備工藝:(a)菊芋清洗、稱重；(b)原料菊芋與水的質量體積比為1:1 ; (C)加熱滅酶:加熱至100°C，煮沸5min ； (d)加水搗碎:補加適量80°C熱水，在搗碎機中將菊芋和水搗碎成漿狀；(e)過濾:用100目濾布擠壓過濾；(f)濾渣加水壓榨:濾渣補加適量80°C熱水擠壓過濾；(g)濾汁混合定容:將兩次過濾的濾汁混合，用蒸餾水定容至Ikg菊芋生產IL汁(定義為100%的菊芋汁)；(h)調配:加熱濃縮至含糖量為10% ;用NaOH溶液調節pH至7.0，備用；
b.鼠李糖乳桿菌復合增菌培養基的制備
原料配比:鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基IOOmL,牛肉膏0.3 0.6g，蛋白胨0.3
0.5g,大豆蛋白胨0.3 0.6g,玉米衆0.2 0.4g,甘油0.1mL, pH6.5 7.0 ;
制備工藝:在菊芋汁基礎培養基中添加牛肉膏、蛋白胨、大豆蛋白胨、玉米漿、甘油，用NaOH溶液調節pH值至6.5 7.0，121°C、15min滅菌冷卻備用；
②鼠李糖乳桿菌增殖培養
鼠李糖乳桿菌ASl.2466經MRS (Man Rogosa Sharpe)液體培養基活化后，以0.1%
0.5% (約I X 106cfu/mL 5X106cfu/mL)接種量接入pH值為6.5 7.0的菊芋汁復合增菌培養基中，在有氧條件下35 37°C培養16h 18h至對數末期或穩定初期，活菌數可達4 5X 109cfu/mL，獲得鼠李糖乳桿菌的高濃度培養物；
(2)鼠李糖乳桿菌細胞的濃縮分離
將鼠李糖乳桿菌高濃度培養物在常溫下5000 7500r/min(2550g 5738g)離心10 20min進行細胞濃縮分離，離心后棄去上清液，獲得活菌收得率為高于95%的鼠李糖乳桿菌濃縮細胞；
(3)在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑
復合保護劑配方:蒸懼水IOOmL,脫脂乳粉IOg,乳糖3 4g,鹿糖3 4g,吐溫80 I
1.2g，甘油0.1 0.2g，酵母粉I 1.2g，血清0.8 L Ig,維生素E 0.3 0.6g，pH值
6.8 7.0，過濾或加熱除菌即可；
復合保護劑制備工藝:①在蒸餾水中添加脫脂乳粉、乳糖、蔗糖、吐溫80、甘油、酵母粉，加熱溶解混勻，冷卻至室溫；②用NaOH溶液調節pH值至6.8 7.0 ;③112 115°C滅菌lOmin，冷卻至室溫；④無菌條件下加入經過濾除菌后的血清和維生素E，混勻即可；復合保護劑添加工藝:在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加菌株高濃度培養物體積20 30%的復合保護劑，制成鼠李糖乳桿菌菌懸液，混勻；
(4)鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的凍干工藝
將添加了保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液分裝于凍干盤或瓶內，厚度0.75cm，-20°C冷凍12h ;在冷凍干燥機中于真空度3 lOPa、冷阱溫度-55 _45°C下真空冷凍干燥11 13h，制成鼠李糖乳桿菌凍干發酵劑成品，凍干發酵劑的活菌數可達lX10ncfu/g以上、含水量為2 3% ο本發明取得的有益效果如下:
1.本發明制備的鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑，其活菌含量可達lX10ncfU/g以上；常壓封存、4°C下保藏I年，其活菌含量仍在101(lCfU/g以上，仍保持較高的發酵活力。2.本發明制備的鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑，可作為生產大豆酸乳的直投式發酵劑使用，接種量較傳統培養型發酵劑降低10000 100000倍，在工業生產中省略了發酵劑的制備工序，減少了菌種車間的投資和空間，防止了菌種的退化和污染，可提高發酵乳制品工業和植物蛋白加工產業的勞動生產率和產品質量。3.本發明制備的鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑，以萬分之一以下的接種量進行37°C大豆酸奶發酵，4 5h即可凝乳，其發酵的大豆酸奶制品，酸度達到70 80 °T、pH值為4.6左右，感官風味好。可用于發酵乳制品工業和植物蛋白加工產業。


圖1為實施例1、2、3制備的鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑常壓封存后在4°C和-18°C條件下貯藏I年的活菌數變化。
具體實施例方式以下實施例用于說明本發明。實施例1 一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，該方法是通過以下步驟實現的:
(O鼠李糖乳桿菌的增殖培養
①鼠李糖乳桿菌廉價增菌培養基的制備
a.鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基的制備 原料配比:菊芋，蒸餾水；
制備工藝:(a)菊芋清洗、稱重；(b)料水的質量體積比為1:1 ;(c)加熱滅酶:加熱至100°C，煮沸5min ； (d)加水搗碎:補加適量80°C熱水，在搗碎機中將菊芋和水搗碎成漿狀；(e)過濾:用100目濾布擠壓過濾；(f)濾渣加水壓榨:濾渣補加適量80°C熱水擠壓過濾；
(g)混合濾汁定容:將兩次過濾的濾汁混合，用蒸餾水定容至Ikg菊芋生產IL汁(定義為100%的菊芋汁)；(h)調配:加熱濃縮至含糖量為10%左右；用NaOH溶液調節pH至7.0左右；
b.鼠李糖乳桿菌復合增菌培養基的制備
原料配比:鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基IOOmL,牛肉膏0.6g，蛋白胨0.3g，大豆蛋白胨 0.3g,玉米衆 0.4g,甘油 0.1mL, pH6.5 7.0 ;
制備工藝:在IOOmL菊芋汁基礎培養基中添加牛肉膏0.6g、蛋白胨0.3g、大豆蛋白胨
0.3g、玉米漿0.4g、甘油0.1mL,用NaOH溶液調節pH值至6.5 7.0,121。。15min滅菌冷卻備用；
②鼠李糖乳桿菌增殖培養的工藝條件
鼠李糖乳桿菌經MRS液體培養基活化后，以0.5% (約5X 106cfu/mL)接種量接入pH值為6.5 7.0的菊芋汁復合增菌培養基中，在有氧條件下37°C培養16h至對數末期或穩定初期，活菌數可達4.1 X 109cfu/mL,獲得鼠李糖乳桿菌的高濃度培養物；
(2)鼠李糖乳桿菌細胞的濃縮分離
鼠李糖乳桿菌高濃度培養物采用在常溫下7500r/min (5738g)離心10 20min進行細胞濃縮分離，離心后棄去上清液，獲得活菌收得率為95.08%的鼠李糖乳桿菌濃縮細胞；
(3)在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑
復合保護劑配方:蒸懼水IOOmL,脫脂乳粉IOg,乳糖3g,鹿糖4g,吐溫80 1.2g,甘油0.2g，酵母粉1.0g,血清0.8g，維生素E 0.6g，pH值6.8 7.0，過濾或加熱除菌即可；
復合保護劑配方的制備工藝:①在IOOmL蒸餾水中添加脫脂乳粉10g，乳糖3g，蔗糖4g，吐溫801.2g，甘油0.2g，酵母粉1.0g,加熱溶解混均，冷卻至室溫；②用NaOH溶液調節pH值至6.8 7.0 ;③112 115°C滅菌lOmin，冷卻至室溫；@采用無菌操作加入經過過濾除菌后的血清0.Sg和維生素E 0.6g，混勻即可；
在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑工藝:在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加菌株高濃度培養物體積30%的復合保護劑，制成鼠李糖乳桿菌菌懸液，混勻；
(4)鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的凍干工藝
將添加保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液分裝凍干盤/瓶，厚度0.75cm，-20°C冷凍12h ;在冷凍干燥機中于真空度3 lOPa、冷阱溫度-55 _45°C下真空冷凍干燥13h，制成鼠李糖乳桿菌凍干發酵劑。凍干發酵劑的活菌數可達1.llX10ncfu/g以上、含水量為2.0%。實施例2 —種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，該方法是通過以下步驟實現的:
(O鼠李糖乳桿菌的增殖培養
①鼠李糖乳桿菌廉價增菌培養基的制備
a.鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基的原料配比和制備工藝同實施例1.b.鼠李糖乳桿菌復合增菌培養基的制備
原料配比:鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基IOOmL,牛肉膏0.5g，蛋白胨0.5g，大豆蛋白胨 0.5g,玉米衆 0.3g,甘油 0.1mL, pH6.5 7.0 ;
制備工藝:在IOOmL菊芋汁基礎培養基中添加牛肉膏0.5g、蛋白胨0.5g、大豆蛋白胨0.5g、玉米衆0.3g、甘油0.1mL,用NaOH溶液調節pH值至6.5 7.0,121°C 15min滅菌冷卻備用；
②鼠李糖乳桿菌增殖培養的工藝條件
鼠李糖乳桿菌經MRS液體培養基活化后，以0.1% (約5X 106cfu/mL)接種量接入pH值為6.5 7.0的菊芋汁復合增菌培養基中，在有氧條件下35°C培養18h至對數末期或穩定初期，活菌數可達4.5X109cfu/mL,獲得鼠李糖乳桿菌的高濃度培養物；
(2)鼠李糖乳桿菌細胞的濃縮分離
鼠李糖乳桿菌高濃度培養物采用在常溫下5000r/min (2550g)離心20min進行細胞濃縮分離，離心后棄去上清液，獲得活菌收得率為97.58%的鼠李糖乳桿菌濃縮細胞；
(3)在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑
復合保護劑配方:蒸懼水IOOmL,脫脂乳粉IOg,乳糖3g,鹿糖3g,吐溫80 1.0g,甘油0.1g,酵母粉1.0g,血清1.0g,維生素E 0.6g，pH值6.8 7.0，過濾或加熱除菌即可；
復合保護劑配方的制備工藝:①在IOOmL蒸餾水中添加脫脂乳粉10g，乳糖3g，蔗糖3g，吐溫80 1.0g,甘油0.1g,酵母粉1.0g,加熱溶解混均，冷卻至室溫；②用NaOH溶液調節pH值至6.8 7.0 ;③112 115°C滅菌lOmin，冷卻至室溫；@采用無菌操作加入經過過濾除菌后的血清1.0g和維生素E 0.5g，混勻即可；在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑工藝:在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加菌株高濃度培養物體積20%的復合保護劑，制成鼠李糖乳桿菌菌懸液，混勻；
(4)鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的凍干工藝
將添加保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液分裝凍干盤/瓶，厚度0.75cm，-20°C冷凍12h ;在冷凍干燥機中于真空度3 lOPa、冷阱溫度-55 _45°C下真空冷凍干燥12h，制成鼠李糖乳桿菌凍干發酵劑。凍干發酵劑的活菌數可達1.42X10ncfu/g以上、含水量為2.3%。實施例3 —種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，該方法是通過以下步驟實現的:
(O鼠李糖乳桿菌的增殖培養
①鼠李糖乳桿菌廉價增菌培養基的制備
a.鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基的原料配比和制備工藝同實施例1.b.鼠李糖乳桿菌復合增菌培養基的制備
原料配比:鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基IOOmL,牛肉膏0.3g，蛋白胨0.5g，大豆蛋白胨 0.3g,玉米衆 0.4g,甘油 0.1mL, pH6.5 7.0 ;
制備工藝:在IOOmL菊芋汁基礎培養基中添加牛肉膏0.3g、蛋白胨0.5g、大豆蛋白胨
0.3g、玉米漿0.4g、甘油0.1mL,用NaOH溶液調節pH值至6.5 7.0,121°C 15min滅菌冷卻備用；
②鼠李糖乳桿菌增殖培養的工藝條件
鼠李糖乳桿菌經MRS液 體培養基活化后，以0.3% (約5X 106cfu/mL)接種量接入pH值為6.5 7.0的菊芋汁復合增菌培養基中，在有氧條件下37°C培養17h至對數末期或穩定初期，活菌數可達4.2X109cfu/mL,獲得鼠李糖乳桿菌的高濃度培養物；
(2)鼠李糖乳桿菌細胞的濃縮分離
鼠李糖乳桿菌高濃度培養物采用在常溫下6000r/min (3672g)離心15min進行細胞濃縮分離，離心后棄去上清液，獲得活菌收得率為96.14%的鼠李糖乳桿菌濃縮細胞；
(3)在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑
復合保護劑配方:蒸懼水IOOmL,脫脂乳粉IOg,乳糖4g,鹿糖3g,吐溫80 1.1g,甘油
0.1g,酵母粉1.0g,血清1.1g,維生素E 0.3g, pH值6.8 7.0,過濾或加熱除菌即可；復合保護劑配方的制備工藝:①在IOOmL蒸餾水中添加脫脂乳粉10g，乳糖4g，蔗糖3g，吐溫80 1.1g,甘油0.1g,酵母粉1.0g,加熱溶解混均，冷卻至室溫；②用NaOH溶液調節 !1值至6.8 7.0;@1151:滅菌101^11，冷卻至室溫；@采用無菌操作加入經過過濾除菌后的血清1.1g和維生素E 0.3g，混勻即可；
在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑工藝:在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加菌株高濃度培養物體積25%的復合保護劑，制成鼠李糖乳桿菌菌懸液，混勻；
(4)鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的凍干工藝
將添加保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液分裝凍干盤/瓶，厚度0.75cm，-20°C冷凍12h ;在冷凍干燥機中于真空度3 lOPa、冷阱溫度-55 _45°C下真空冷凍干燥llh，制成鼠李糖乳桿菌凍干發酵劑。凍干發酵劑的活菌數可達1.17X10ncfu/g以上、含水量為2.7%。表I
權利要求
1.一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)鼠李糖乳桿菌的增殖培養 ①鼠李糖乳桿菌廉價增菌培養基的制備 a.鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基的制備 原料:菊芋，蒸餾水； 制備工藝:(a)菊芋清洗、稱重；(b)原料菊芋與水的質量體積比為1:1 ; (C)加熱滅酶:加熱至100°C，煮沸5min ； (d)加水搗碎:補加適量80°C熱水，在搗碎機中將菊芋和水搗碎成漿狀；(e)過濾:用100目濾布擠壓過濾；(f)濾渣加水壓榨:濾渣補加適量80°C熱水擠壓過濾；(g)濾汁混合定容:將兩次過濾的濾汁混合，用蒸餾水定容至Ikg菊芋生產IL汁；(h)調配:加熱濃縮至含糖量為10% ;用NaOH溶液調節pH至7.0，備用； b.鼠李糖乳桿菌復合增菌培養基的制備 原料配比:鼠李糖乳桿菌菊芋汁基礎培養基IOOmL,牛肉膏0.3 0.6g，蛋白胨0.3 .0.5g,大豆蛋白胨0.3 0.6g,玉米衆0.2 0.4g,甘油0.1mL, pH6.5 7.0 ; 制備工藝:在菊芋汁基礎培養基中添加牛肉膏、蛋白胨、大豆蛋白胨、玉米漿、甘油，用NaOH溶液調節pH值至6.5 7.0，121 °C、15min滅菌冷卻，備用； ②鼠李糖乳桿菌增殖培養 鼠李糖乳桿菌ASl.2466經MRS液體培養基活化后，以0.1% 0.5%接種量接入pH值為6.5 7.0的菊芋汁復合增菌培養基中，在有氧條件下35 37°C培養16h 18h至對數末期或穩定初期，獲得鼠李糖乳桿菌的高濃度培養物； (2)鼠李糖乳桿菌細胞的濃縮分離 將鼠李糖乳桿菌高濃度培養物在常溫下5000 7500r/min離心10 20min進行細胞濃縮分離，離心后棄去上清液，獲得活菌收得率為高于95%的鼠李糖乳桿菌濃縮細胞； (3)在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加復合保護劑 復合保護劑配方:蒸懼水IOOmL,脫脂乳粉IOg,乳糖3 4g,鹿糖3 4g,吐溫80 I .1.2g，甘油0.1 0.2g，酵母粉I 1.2g，血清0.8 L Ig,維生素E 0.3 0.6g，pH值.6.8 7.0，過濾或加熱除菌； 復合保護劑制備工藝:①在蒸餾水中添加脫脂乳粉、乳糖、蔗糖、吐溫80、甘油、酵母粉，加熱溶解混勻，冷卻至室溫；②用NaOH溶液調節pH值至6.8 7.0 ;③112 115°C滅菌lOmin，冷卻至室溫；④無菌條件下加入經過濾除菌后的血清和維生素E，混勻； 復合保護劑添加工藝:在鼠李糖乳桿菌濃縮細胞中添加菌株高濃度培養物20 30%的復合保護劑，制成鼠李糖乳桿菌菌懸液，混勻； (4)鼠李糖乳桿菌直投式發酵劑的凍干工藝 將添加了保護劑的鼠李糖乳桿菌菌懸液分裝于凍干盤或瓶內，厚度0.75cm，-20°C冷凍12h ;在冷凍干燥機中于真空度3 10Pa、冷阱溫度-55 _45°C下真空冷凍干燥11 13h，制成鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑成品。
全文摘要
本發明公開了一種鼠李糖乳桿菌大豆酸乳直投式發酵劑的制備方法。鼠李糖乳桿菌經廉價增菌培養基高密度培養、離心濃縮分離、與高效復合保護劑混溶、再經冷凍干燥，制成鼠李糖乳桿菌直投式凍干發酵劑。所制備的發酵劑的活菌含量可達1×1011cfu/g以上；常壓封存、4℃下保藏1年，其活菌含量仍在1010cfu/g以上，仍保持較高的發酵活力；以萬分之一以下的接種量進行37℃大豆酸乳發酵，4～5h即可凝乳，其發酵的大豆酸奶制品，酸度達到70～80oT、pH值為4.6左右，感官風味好。本發明可用于發酵乳制品工業和植物蛋白加工產業。
文檔編號A23C11/10GK103141722SQ201310079280
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月13日 優先權日2013年3月13日
發明者田洪濤, 谷新晰, 李晨, 楊雪聰, 田晶晶, 李麗微, 檀建新, 王羽 申請人:河北農業大學