一種大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法
【專利摘要】本發明公開了一種用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于：經重組大腸桿菌發酵、提取后獲得的重組酶液，加入pH為6.5~8.0的Tris·HCl、甘油、Mg2+和苯甲酸鈉，控制酶液pH在6.5~8.0范圍內，分裝后-20℃~20℃保存。本發明有效防止了酶液在貯存過程中蛋白的析出及酶的變性，保證了酶的蛋白結構及活力的穩定。同時也防止了酶液在貯存過程中滋生雜菌。
【專利說明】一種大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物【技術領域】，具體涉及一種大腸桿菌重組酶液的大規模保存。
【背景技術】
[0002]隨著生物技術的不斷發展及應用，越來越多的工業酶通過重組大腸桿菌進行生產，由于應用背景的需求不同，一些酶往往只是進行了初步純化，并以酶液的形式進行貯存。由于酶液中雜質含量較高，不同于實驗室用的小規模酶液，往往在貯存過程中會引起酶的變性與析出，導致酶液酶活下降。而且在4°C _20°C長期貯存時，還容易滋生雜菌，導致酶液質量嚴重下降。目前酶液保存的方法只是簡單的采用了一些緩沖液及防腐劑，效果一般，因此一種能夠有效大規模貯存酶液的方法有待優化。
【發明內容】
[0003]針對以上所述現存工藝的一些缺點，本發明的目的是提供一種大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法。
[0004]本發明的具體方案如下:一種用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:經重組大腸桿菌發酵、提取后獲得的重組酶液，加入PH為6.5^8.0的Tris.Η(:1、甘油、Mg2+和苯甲酸鈉，控制酶液pH在6.5?8.0范圍內，分裝后-20 V?20 V保存。
[0005]進一步地，酶液中加入的Tris.HCl，母液濃度為1?3Μ，終濃度為0.θΓθ.05Μ。
[0006]進一步地，酶液中加入的甘油終濃度為3°/Γ?Ο%。
[0007]進一步地，酶液中加入的Mg2+終濃度為f 10mM。
[0008]進一步地，酶液中加入的苯甲酸鈉為0.01°/Γ0.1%。
[0009]進一步地，加入Mg2+的形式為Mg2+的可溶性無機鹽及其結晶水合物，例如包括但不限于MgCl2、MgSO4及其結晶水合物。
[0010]本發明能夠使酶液在長期貯存過程中保持pH的穩定，為酶液提供一個穩定的酸堿環境。并且通過Mg2+與其它緩沖液的共同作用，有效保持了酶分子空間結構的穩定性，有效防止了酶液在貯存過程中蛋白的析出及酶的變性，保證了酶的蛋白結構及活力的穩定。同時也防止了酶液在貯存過程中滋生雜菌。
【具體實施方式】
[0011]實施例1
經發酵、提取后制備的重組酶液100L，調pH 7.2，加入3M Tris -HCl (pH7.2) 1L，甘油5L，苯甲酸鈉100g，混勻后檢測pH在7.2，分裝后4°C保存40d，酶活損失36.6%
實施例2
經發酵、提取后制備的重組酶液100L，調pH 7.2，加入3M Tris -HCl (pH7.2) 1L，甘油5L,MgSO4.7Η20 123g，苯甲酸鈉100g，混勻后檢測pH在7.2，分裝后4°C保存40d，酶活損失10.2%。
[0012]實施例3
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 6.8，加入3M Tris.HCl (pH6.8) 3.3L,甘油30L, MgSO4.7H20 246g，苯甲酸鈉10g,混勻后檢測pH在6.8，分裝后_20°C保存60d，酶活損失4.9%。
[0013]實施例4
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 6.5，加入3M Tris -HCl (ρΗ6.5) 16.5L，甘油100L, MgSO4.7H20 2460g，苯甲酸鈉lOOOg，混勻后檢測pH在6.5，分裝后_20°C保存60d，酶活損失3.8%。
[0014]實施例5
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 8.0，加入IM Tris -HCl (ρΗ8.0) 20L，甘油60L，MgSO4 240.83g，苯甲酸鈉500g，混勻后檢測pH在8.0，分裝后_20°C保存100d，酶活損失5.3%ο
[0015]實施例6
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 7.0，加入2M Tris -HCl (ρΗ7.0) 10L，甘油60L, MgCl4.6H20 609g,苯甲酸鈉600g,混勻后檢測pH在7.0，分裝后_20°C保存60d,酶活損失2.1%。
[0016]實施例7
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 7.0，加入2M Tris -HCl (ρΗ7.0) 10L，甘油60L, MgCl4 380.84g，苯甲酸鈉400g,混勻后檢測pH在7.0，分裝后_20°C保存60d,酶活損失1.5%ο
[0017]實施例8
經發酵、提取后制備的重組酶液1000L，調pH 7.0，加入2M Tris -HCl (ρΗ7.0) 10L，甘油60L，Mg (NO3) 2.6Η20 1538.46g，苯甲酸鈉500g，混勻后檢測pH在7.0，分裝后_20°C保存60d，酶活損失3.5%。
【權利要求】
1.一種用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:經重組大腸桿菌發酵、提取后獲得的重組酶液，加入pH為6.5^8.0的Tris.Η(:1、甘油、Mg2+和苯甲酸鈉，控制酶液pH在6.5?8.0范圍內，分裝后-20°C?20°C保存。
2.根據權利要求1所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:酶液中加入的Tris.HC1，母液濃度為1?3Μ，終濃度為0.θΓθ.05Μ。
3.根據權利要求1所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:酶液中加入的甘油終濃度為3°/Γ?Ο%。
4.根據權利要求1所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:酶液中加入的Mg2+終濃度為flOmM。
5.根據權利要求1所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:酶液中加入的苯甲酸鈉為0.019Γ0.1%。
6.根據權利要求1-5任一項所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:加入Mg2+的形式為Mg2+的可溶性無機鹽及其結晶水合物。
7.根據權利要求6所述的用大腸桿菌重組酶液的大規模保存方法，其特征在于:加入Mg2+的形式為MgCl2或MgS04及其結晶水合物。
【文檔編號】C12N9/96GK104293761SQ201310299982
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年7月17日 優先權日:2013年7月17日
【發明者】陳令偉 申請人:南京朗恩生物科技有限公司