米或米制品中是否含轉(zhuǎn)基因水稻llrice62檢測法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，以米或米制品為待測樣品，以轉(zhuǎn)基因稻米LLRICE62為陽性對照，以非轉(zhuǎn)基因稻米或者非LLRICE62的轉(zhuǎn)基因稻米為陰性對照；包括以下步驟：1）、設(shè)計耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的對應(yīng)引物組；?2）、提取待測樣品、陽性對照、陰性對照的DNA；3）、將步驟2）所得的待測樣品的DNA、陽性對照的DNA、陰性對照的DNA分別利用步驟1）所得的引物組設(shè)置PCR反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增；4）、利用步驟3）所得的待測樣品反應(yīng)液、陽性對照反應(yīng)液、陰性對照反應(yīng)液進(jìn)行比對，從而判定米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62。
【專利說明】米或米制品中是否含轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62檢測法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測技術(shù)，尤其涉及耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的現(xiàn)場定性檢測技術(shù)，具體為米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，世界上轉(zhuǎn)基因生物研發(fā)工作進(jìn)展非常迅速，2012年全球轉(zhuǎn)基因作物種植面積達(dá)到1.703億公頃，比2011年的1.6億公頃增長了 6%，較1996年增長了 100倍。隨著轉(zhuǎn)基因作物已被快速、持續(xù)地用于商業(yè)化生產(chǎn)，無論在發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家都產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟(jì)、能源、衛(wèi)生及社會效益。但同時，轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品可能帶來的環(huán)境、健康等問題也已引起世界性的所謂“生物安全”的論戰(zhàn)。為此，許多國家相繼制定了對轉(zhuǎn)基因生物的管理法規(guī)，對進(jìn)口轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行嚴(yán)格管理，要求出具轉(zhuǎn)基因成分的檢測報告，對轉(zhuǎn)基因食品采用標(biāo)識制度。挪威是第一個要求對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行含量標(biāo)識的國家，他的標(biāo)識低限為2%;歐盟的限量標(biāo)識低限為1%。我國于2001年5月23日頒布了《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理條例》，2001年9月5日開始實施《出入境轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢驗檢疫管理辦法》，2002年3月20日開始貫徹實行《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理辦法》。
[0003]隨著各個國家對農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實行檢驗檢疫和標(biāo)識制度管理的加強，轉(zhuǎn)基因檢測的對象已經(jīng)從原來的大豆、小麥、大米、土豆等農(nóng)產(chǎn)品擴(kuò)展到許多深加工的產(chǎn)品，如食用油脂、米制品、醬油、豆奶、酒、飼料等等，而這其中米制品一直是歐盟和其他一些國家關(guān)注的重點。2006年9月以來，已有法國、德國、意大利、奧地利和日本等7個國家因為轉(zhuǎn)基因大米污染對我國出口米制品采取了拒絕入境或撤架、召回等措施。歐盟在2008年4月15日起對中國出口的大米及其米制品采取保障性措施，要求由中方認(rèn)可的實驗室對出口產(chǎn)品實施檢測，并出具統(tǒng)一的衛(wèi)生證書才能出口。而另一方面，我國對轉(zhuǎn)基因作物培育的投入也逐年增加，近年來具有良好生長性能的轉(zhuǎn)基因新品種不斷涌現(xiàn)，2009年農(nóng)業(yè)部審放了轉(zhuǎn)基因耐除草劑水稻“Bt汕優(yōu)63”等三個轉(zhuǎn)基因農(nóng)作物的生產(chǎn)應(yīng)用安全證書，這標(biāo)志著我國極有可能成為世界上第一個商業(yè)化種植轉(zhuǎn)基因水稻的國家。如何快速便捷的檢測轉(zhuǎn)基因大米成分已成為了當(dāng)前熱門的研究課題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種便捷的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，采用該方法無需復(fù)雜的儀器，甚至用肉眼即可辨識檢測結(jié)果，從而準(zhǔn)確判斷待測樣品是否被轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62污染。
[0005]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，以米或米制品為待測樣品，以轉(zhuǎn)基因稻米LLRICE62為陽性對照，以非轉(zhuǎn)基因稻米(較佳)或者非LLRICE62的轉(zhuǎn)基因稻米為陰性對照；包括以下步驟:
[0006]I)、設(shè)計引物:[0007]設(shè)計耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的對應(yīng)引物組；每套引物組中由4條引物組成；4條引物中2條為內(nèi)引物，另2條為外引物；
[0008]2 )、提取待測樣品、陽性對照、陰性對照的DNA:
[0009]3)、核酸的恒溫擴(kuò)增:
[0010]將步驟2)所得的待測樣品的DNA、陽性對照的DNA、陰性對照的DNA分別利用步驟
I)所得的每套引物組進(jìn)行以下操作:
[0011]①、步驟I)所得的每套引物組中的4條引物用DEPC處理水進(jìn)行溶解稀釋；然后用于下述的PCR反應(yīng)體系；
[0012]
【權(quán)利要求】
1.米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是:以米或米制品為待測樣品，以轉(zhuǎn)基因稻米LLRICE62為陽性對照，以非轉(zhuǎn)基因稻米或者非LLRICE62的轉(zhuǎn)基因稻米為陰性對照；包括以下步驟: .1)、設(shè)計引物: 設(shè)計耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的對應(yīng)引物組；每套引物組由4條引物組成；4條引物中2條為內(nèi)引物，另2條為外引物； .2 )、提取待測樣品、陽性對照、陰性對照的DNA ； .3)、核酸的恒溫擴(kuò)增: 將步驟2)所得的待測樣品的DNA、陽性對照的DNA、陰性對照的DNA分別利用步驟I)所得的每套引物組進(jìn)行以下操作: ①、步驟I)所得的每套引物組中的4條引物用DEPC處理水進(jìn)行溶解稀釋； ②、設(shè)置擴(kuò)增反應(yīng)體系: PCR反應(yīng)體系
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是: 耐除草劑轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62引物組中的4條引物為:
LLRICE62- FIP:AGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGGGTGCATCGTCTATCAAT
LLRICE62- BIP:GGATGTGCTGCAAGGCGATTTACAACGTCGTGACTGG
LLRICE62-F3: TGTAACACGCACACTCAC
LLRICE62-B3:CTCCATGGGAATTCACTGG ； 所述 LLRICE62- FIP、LLRICE62- BIP 為內(nèi)引物，所述 LLRICE62-F3、LLRICE62-B3 為外引物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是: 所述步驟3)的①中:所述4條引物用DEPC處理水進(jìn)行溶解稀釋至濃度為20 μ mol/L~200 μ mol/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是: 所述步驟3)的②中: 引物L(fēng)LRICE62- FIP、LLRICE62- BIP在PCR反應(yīng)體系中的濃度均為8 μ mol/L ； 引物L(fēng)LRICE62-F3、LLRICE62-B3在PCR反應(yīng)體系中的濃度成均為I μ mol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是:所述步驟3)的③中:于62°C擴(kuò)增反應(yīng)30min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的米或米制品中是否含有轉(zhuǎn)基因水稻LLRICE62的檢測法，其特征是: 所述步驟2)中選用CTAB分步離心法或者DNA提取試劑盒進(jìn)行DNA的提取。
【文檔編號】C12Q1/68GK103468804SQ201310409728
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月10日
【發(fā)明者】張明哲, 陳曦, 張曉峰, 陳笑梅, 陳吳健 申請人:浙江省檢驗檢疫科學(xué)技術(shù)研究院