利用菇渣生產的高產草菇菌株及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種利用菇渣生產的高產草菇菌株，其分類命名是草菇（Volvariellavolvacea）江南V08，所述草菇菌株已于2014年9月17日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCCNo：M2014426。以及利用菇渣生產的高產草菇菌株在草菇生產上的應用。本發明的優點在于：本發明草菇菌株培養方法簡單，具有較高的生物學轉化率；能夠充分利用菌渣等廢棄物，從而緩解環境的壓力。利用菇渣生產的高產草菇菌株在草菇生產上的應用。CCTCC No： M201442620140917
【專利說明】利用菇渣生產的高產草菇菌株及其應用

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種能夠利用燕洛生產的高產草^rKo7rarie77a菌株,特別涉及草菇菌株的選育。

【背景技術】
[0002]草菇是食用菌中的優質菇種，營養豐富，味道鮮美，口感鮮嫩，可藥用，其性寒，味甘，能消食去熱，增進身體健康，是最受人們歡迎的鮮食菇類之一。草菇[VolvariellavoIvacea (Bull, ex Fr.)又名荀腳燕、蘭花燕、貢燕和中國燕等,在我國主要分布在廣東、福建、江蘇等南方省。菇不僅具有味道鮮美、更富含多種蛋白質、不飽和脂肪酸、維生素及礦物質等，具有很聞的營養及保健功能。
[0003]草菇屬于草質附生菌，喜溫喜濕，目前草菇生產的主要原來是稻草和廢棉，但隨著這些原材料的緊缺，這些原材料的價格越來越高且難以收集，草菇生產成本的提高也抑制了菇農的積極性。
[0004]菇渣是蘑菇生產后所余下的廢料，其粗蛋白、纖維素含量豐富，再經過發酵處理后，大部分粗蛋白及纖維已經分解，目前人們對菇渣等廢物進行綜合開發利用的研究上，如在堆置有機肥料、再次利用生產菌菇等方面取得一定的成果，但由于現有草菇菌種在菌渣上的適應性較差，生物學利用率較低而至今沒有取得很好的推廣應用。


【發明內容】

[0005]為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種利用菇渣生產的高產草菇菌株。
[0006]為達到上述目的，本發明是通過以下的技術方案來實現的:
利用菇渣生產的高產草菇菌株，其分類命名是草菇(Volvariella江南V08，
所述草燕(Volvariella volvacea)江南V08已于2014年9月17日保藏在中國典型培養物保藏中心，其簡稱為CCTCC，地址:湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學生命科學學院,保藏號為:CCTCC No: M2014426。
[0007]上述利用菇渣生產的高產草菇菌株在草菇生產上的應用。
[0008]本發明中，培養所述草燕(Volvariella volvacea)江南V08的基質培養料由以下重量百分數的組分組成:10%麥麩、30%金針菇菌渣、60%杏鮑菇菌渣。
[0009]本發明中,栽培所述草^(Volvariella volvacea)江南V08子實體的培養料由以下重量百分數的組分組成:30%金針菇菌渣、70%杏鮑菇菌渣。
[0010]有益效果:與現有技術相比，本發明的優點在于:本發明草菇菌株培養方法簡單，具有較高的生物學轉化率；能夠充分利用菌渣等廢棄物，從而緩解環境的壓力。利用菇渣生產的高產草菇菌株在草菇生產上的應用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1 為草燕(Volvariella volvacea)江南 V08 發育樹。

【具體實施方式】
[0012]下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。
[0013]實施例1:
1、野生草菇菌株的分離:
在江蘇省丹陽地區，六月至八月，選擇雨天之后的一兩天，對金針菇、杏鮑菇生產基地的菇渣堆料場進行野生草菇資源的調查，2010年的7月14號，本發明人在江南生物科技有限公司的菇渣堆放場中發現了一個草菇子實體，當天將其采集回，在無菌環境下，采用子實體分離法，將菌柄內部最接近菌蓋部位的菌肉接于PDA平板上，30°C恒溫培養。3天后獲得一株純的菌絲體培養物，編號為草菇(Volvariella volvacea)江南V08，JN008已于2014年9月17日保藏在中國典型培養物保藏中心，其簡稱為CCTCC，地址:湖北省武漢市武昌珞珈山武漢大學生命科學學院，保藏號為=CCTCC No: M2014426。
[0014]2、草燕(Volvariella volvacea)江南V08子實體形態特征
子實體是由菌絲發育形成。草菇的子實體成熟后呈傘形，我們對菌蓋、菌褶、菌柄、菌托等的大小、厚度、顏色、性狀進行測量。顯微鏡觀察擔孢子的形態及大小。其特征表現為:菌蓋近鐘形，中部稍凸起，邊緣完整，表面有明顯的細毛，邊緣呈鼠灰色，具有放射狀條紋，中部顏色較深。菌褶著生于菌蓋之下，片狀，開始為白色，成熟后為淡紅色，菌褶排列稍密、離生、不等長。菌柄中生，圓柱形，長5cnTl8cm,直徑0.8cnTl.6cm,白色或者淡黃色,光滑、肉實。菌托為杯狀，邊緣不規則開裂，鼠灰色，基部為黃白色。
[0015]3、草燕(Volvariella volvacea)江南V08擔孢子形態特征:
橢圓形、表面光滑、厚壁，有孢臍，大小不均。擔子為棒形，著生4個擔孢子。孢子印為粉紅色或紅褐色。菌絲為白色至淡黃色，有少數厚垣孢子，直徑35?45 μ m,呈紅褐色，圓球形。
[0016]草燕(Volvariella volvacea)江南V08分子特征:將草燕菌種接種在液體培養基中，于35°C搖床培養8天，收集菌絲，。參照植物基因工程(第二版)方法提取DNAJf得到的DNA溶于50μ?無菌水，存于-20°C冰箱備用。使用通用引物ITSl ( 5 ‘-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)和 ITS4:5’ -TCCTCCGCTTA TTGATATGC-3’。聚合酶鏈式反應體系25μ L:1 μ LDNA 模版，2.5yL 1Xbuffer 緩沖液，2.5 μ L Mg2+(25mmol/L)，0.301TaqDNAPolymerase (5U/ μ L), 2.5 μ L dNTP (each 2.5 mmol/L),引物 IyL (10 μ mol/L),最后用ddH20將總體積補至25 μ L。擴增反應程序:94°C預變性7min ;94°C變性lmin，34°C退火lmin，72°C延伸2min，35個循環；72°C延伸10min，4°C保存。PCR產物經純化后送上海生物工程技術服務有限公司進行測序，一周后返回數據結果，經NCBI上Blast比對，并選取形態相近和同源性較高的菌株序列利用MEGA軟件構建系統發育樹，結果如下:通過 Blast 比對，草燕(Volvariella volvacea)江南 V08 與 V.volvacea QN086669.1V,JN086679.1V，JN086667.1V等)同源性都為100%,構建的系統發育樹結果表明，草菇(Volvariella volvacea)江南V08與V.處于同一發育枝上，因此,結合形態特征，草燕(Volvariella volvacea)江南 V08 鑒定為草燕菌株(volvacea)。
[0017]4、草燕(Volvariella volvacea)江南 V08 生物學特性 (A)最適PH
調節 pH 值為，5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0 共 11 個梯度進行試驗，每組3個重復，放置于30°C恒溫培養箱，3天后觀察，結果表明，PH7.5和PH8.0時菌絲生長最旺盛，顯著與其他組，即表明，該菌株菌絲適宜在中性偏堿的環境下生長。
[0018](B)最適溫度
以葡萄糖2%、牛肉膏0.4%、瓊脂1.5%為比例的基礎培養基，PH調至7.5，設置25 V、30°C、35°C、40°C共4個梯度進行試驗，結果表明，30°C和35°C下菌絲生長速度最快，進而再一步細分，設置30°C、31°C、32°C、33°C、34°C、35°C，結果表明32°C和33°C菌絲生長速度最快，因此該菌株為高溫型。
[0019](C)草燕(Volvariella volvacea)江南V08最適菌株的基質培養料
制作10%麥麩基礎料，分別添加90%金針菇菌渣；45%金針菇菌渣+45%杏鮑菇菌；30%金針菇菌渣+60%杏鮑菇菌渣；60%金針菇菌渣+30%杏鮑菇菌渣；90%杏鮑菇菌渣作為主要培養料，調節含水量至65%，添加碳酸鈣調節ph至7.5。實驗結果表明，添加30%金針菇菌渣+60%杏鮑菇菌渣培養料效果最好，菌絲生長速度快，與其他組有顯著差異。以上所述百分數均為重量百分數。
[0020]5、草燕(Volvariella volvacea)江南V08子實體最適培養料
分別以100%金針菇菌渣；50%金針菇菌渣+50%杏鮑菇菌；30%金針菇菌渣+70%杏鮑菇菌渣；70%金針菇菌渣+30%杏鮑菇菌渣；100%杏鮑菇菌渣；每批培養料8kg，三級菌種一袋，每組3個重復，用約5%的石灰調節ph至7?8.采用曾播法進行鋪料，鋪料到1cm時播撒一層菌種，用種量約占總量的40%，其余60%則播于料的表層，控制料面溫度30°C到32°C，發菌4-6天，第7天打出菇水，第9至第10天出菇。結果表明以30%金針菇菌渣+70%杏鮑菇菌渣栽培草菇所獲得的產量或生物轉化率最高，達到15.4%。以上所述百分數均為重量百分數。
[0021]對于本領域的技術人員，在上述實施例的基礎上可根據實際情況，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干變型和改進，同樣能實現本發明的目的，但是，上述各種變化顯然應該是在本發明的保護范圍內。
【權利要求】
1.利用菇渣生產的高產草菇菌株，其特征在于，其分類命名是草菇…7防口似)江南乂08，所述草菇菌株已于2014年9月17日保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為:00100 如:I 2014426。
2.根據權利要求1所述的利用燕潘生產的高產草燕(在草燕生產上的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于,培養所述草燕(^0^31-16113江南708的基質培養料由以下重量百分數的組分組成:10%麥麩、30%金針菇菌渣、60%杏鮑菇菌渣。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，栽培所述草燕(^01^^16118,乂。1乂3。63、江南乂08子實體的培養料由以下重量百分數的組分組成:30%金針菇菌渣、70%杏鮑菇菌渣。
【文檔編號】C12N1/14GK104388320SQ201410604329
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月3日 優先權日:2014年11月3日
【發明者】姜建新, 張金霞, 陳明杰, 謝寶貴, 李長田, 王輝瓊, 宗海鳳, 蔣敏 申請人:江蘇江南生物科技有限公司