本發(fā)明屬于昆蟲飼養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種茶尺蠖人工飼料、制備方法及茶尺蠖飼養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
茶尺蠖（ectropisobliquaprout）和灰茶尺蠖（ectropisgrisescenswarren）為兩近緣種，常統(tǒng)稱為茶尺蠖，它們是我國茶園最主要的尺蠖類害蟲。發(fā)生代數(shù)多、繁殖速度快，常暴發(fā)成災(zāi)，對(duì)茶葉產(chǎn)量、品質(zhì)影響極大。室內(nèi)大量飼養(yǎng)茶尺蠖，是開展防治藥劑篩選、病毒增殖和各項(xiàng)相關(guān)研究的基礎(chǔ)。采用人工飼料飼養(yǎng)具有鮮葉飼養(yǎng)所不具備的優(yōu)點(diǎn)，如不受季節(jié)影響，更易做到標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)?；曫B(yǎng)等。
目前已報(bào)道的茶尺蠖人工飼料有好幾種，其中多數(shù)是帶茶葉粉的半純飼料(柳德寶等1982，趙燁烽等1982，李云壽等1992，陳建明等cn200710068384.0，史洪中等cn201410174219.3)，也有不帶茶葉粉的半純飼料(張永安等cn200510116783.0)。綜合起來，已有飼料主要存在以下不足：（1）配方組分復(fù)雜，或飼料成本高，或飼料制作過程繁瑣，難以大量應(yīng)用；（2）飼養(yǎng)效果不佳，有的幼蟲歷期較鮮葉對(duì)照延長很多天，有的不能完成一個(gè)世代，無法進(jìn)行全程繼代飼養(yǎng)。因此，亟需尋找一種成本低廉、操作簡便、飼養(yǎng)效果好的人工飼料及其飼養(yǎng)方法。這對(duì)提高茶尺蠖大量飼養(yǎng)的效率具有重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)提供一種茶尺蠖人工飼料、制備方法及茶尺蠖飼養(yǎng)方法的技術(shù)方案。
所述的一種茶尺蠖人工飼料，其特征在于包括以下重量的原料：茶葉粉110～135g，黃豆粉30～50g、酵母粉10～20g、蔗糖15～35g、vc1～5g、瓊脂10～20g、山梨酸0.5～1.5g、苯甲酸0.5～1.5g和純凈水700～800ml。
所述的一種茶尺蠖人工飼料，其特征在于包括以下重量的原料：茶葉粉115～130g，黃豆粉35～45g、酵母粉12～18g、蔗糖20～30g、vc2～4g、瓊脂12～18g、山梨酸0.8～1.2g、苯甲酸0.8～1.2g和純凈水700～800ml。
所述的一種茶尺蠖人工飼料的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟：
（1）茶葉粉制備：采集春季或秋季的新鮮嫩茶梢，在室內(nèi)空調(diào)房中自然晾干后，用高速粉碎機(jī)將之磨成粉，過60目篩后倒入瓶中，瓶口用玻璃紙?jiān)o密封，低溫保存?zhèn)溆茫?/p>
（2）黃豆粉制備：取食用黃豆，用高速粉碎機(jī)磨成粉，過60目篩，再在鍋中炒熟炒香，倒入瓶中，瓶口用玻璃紙?jiān)o，低溫保存?zhèn)溆茫?/p>
（3）按照所述重量稱取各原料；
（4）先用少量丙酮或無水乙醇將山梨酸和苯甲酸分別溶解后，混勻，倒入茶葉粉、黃豆粉和酵母粉的混合粉中，攪拌均勻，再將混合物置于40℃烘箱低溫烘干，研磨攪拌均勻后備用；
（5）將瓊脂用純凈水溶解并加熱至沸騰，待冷卻至60℃時(shí)加入已用水溶解的蔗糖和vc，攪拌均勻后，倒入步驟（4）的混合物中，迅速攪拌均勻后，倒入小燒杯中或培養(yǎng)皿中，其中少量倒成1mm厚的薄層，供飼養(yǎng)前期使用，再用保鮮膜將小燒杯或培養(yǎng)皿封口后放入冰箱冷藏備用。
利用所述的茶尺蠖人工飼料進(jìn)行茶尺蠖人工飼養(yǎng)的方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）將得到的薄層飼料切成小塊，較分散地貼在養(yǎng)蟲瓶內(nèi)一側(cè)的瓶壁上，將即將孵化的卵放入養(yǎng)蟲瓶中或接入初孵茶尺蠖幼蟲，瓶口用白紙和保鮮膜封口，放置在養(yǎng)蟲室內(nèi)飼養(yǎng)，將貼有飼料的一側(cè)朝向光源；
（2）4天后添加飼料，將小塊薄層飼料貼在瓶內(nèi)原飼料間或附近，便于幼蟲爬至新飼料取食；
（3）待幼蟲長至3齡時(shí)，將冷藏備用的飼料取出切成小塊，用玻璃毛細(xì)管將飼料塊串起，一根毛細(xì)管上串2-4塊，每瓶放置3-4根，相互交叉放置，任幼蟲爬行取食，根據(jù)飼料的干濕情況添加或更換飼料，一般4-5天更換或添加1次，幼蟲進(jìn)入4齡后，加大飼料的添加量，每天或隔天添加1次；
（4）幼蟲飼養(yǎng)直至化蛹，在瓶中羽化后，按常規(guī)方法配對(duì)、取卵，然后按上述方法繼續(xù)飼養(yǎng)下1代。
所述的茶尺蠖人工飼養(yǎng)的方法，其特征在于所述的步驟1）中養(yǎng)蟲瓶內(nèi)的接蟲量為60～100頭。
本發(fā)明所述的人工飼料及其飼養(yǎng)的方法，不僅適用于茶尺蠖人工飼養(yǎng)，同樣也適用于灰茶尺蠖的人工飼養(yǎng)及茶尺蠖核型多角體病毒的增殖。
本發(fā)明具有以下有益效果：一、本飼料配方簡單，成本低廉，所用原料易制易得，飼料制作簡便。茶葉粉與黃豆粉制好后冷藏保存，可供1年之內(nèi)使用。飼料使用時(shí)現(xiàn)配現(xiàn)用，若有多余，可低溫保存，保質(zhì)期10-12天。飼養(yǎng)1代幼蟲一般只需配制2-3次飼料。二、本飼料不易霉變，飼養(yǎng)效果好。用本飼料喂養(yǎng)，茶尺蠖生長發(fā)育正常，幼蟲歷期比鮮葉飼喂的延長2-4天，存活率、生殖力等生物學(xué)指標(biāo)與鮮葉飼喂的無顯著差異，可從卵孵化開始全程取食人工飼料完成世代，并可連續(xù)飼養(yǎng)多代。
本發(fā)明的創(chuàng)新之處有：①一般配制人工飼料的茶葉粉是綠茶粉（cn200710068384.0）或茶鮮葉在110-120℃之間烘干磨碎而成（李云壽等1992），綠茶粉在茶葉加工過程中經(jīng)過了180℃高溫殺青，高溫對(duì)茶葉中養(yǎng)分物質(zhì)影響較大。本發(fā)明茶葉粉的制備采用的是將新鮮茶梢在空調(diào)間中自然陰干后磨粉的方法，較大程度上保持了茶葉中原有物質(zhì)，滿足茶尺蠖所需要的微量元素，有利其生長發(fā)育。試驗(yàn)表明，飼養(yǎng)效果優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，幼蟲死亡率顯著低于現(xiàn)有技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)從卵孵化開始全程取食人工飼料完成整個(gè)世代。cn200710068384.0中茶尺蠖是從2齡才開始取食人工飼料，無法實(shí)現(xiàn)用人工飼料全程飼養(yǎng)。②配制人工飼料需加入防腐劑，一般均是將防腐劑直接加入瓊脂液體中。由于防腐劑不溶于水，這樣防腐劑在人工飼料中是小顆粒狀的，也難于分布均勻，對(duì)茶尺蠖影響很大。本發(fā)明采用將防腐劑先用有機(jī)溶劑溶解，混入茶葉粉等主要材料后再低溫烘干、使有機(jī)溶劑徹底蒸發(fā)的方法，使防腐劑能十分均勻地分布在人工飼料中，防腐效果好，同時(shí)對(duì)茶尺蠖生長發(fā)育不會(huì)產(chǎn)生影響。③本發(fā)明充分考慮茶尺蠖幼蟲的取食習(xí)性，1-2齡期（幼蟲活動(dòng)性不強(qiáng)，有較強(qiáng)趨光性）采用將飼料貼在瓶內(nèi)一側(cè)瓶壁的方式飼喂，3齡起幼蟲活動(dòng)性增強(qiáng)，采用將人工飼料串在毛細(xì)管上、毛細(xì)管交叉放置的方式，利于幼蟲爬行與取食，飼養(yǎng)效果好。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)例1：
一、飼料材料準(zhǔn)備
1茶葉粉，自制。采集春季或秋季的新鮮嫩茶梢，在室內(nèi)空調(diào)房中（溫度26℃左右）自然晾干后，用高速粉碎機(jī)將之磨成粉，過60目篩后倒入瓶中，瓶口用玻璃紙?jiān)o密封，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
2黃豆粉，自制。購買食用黃豆，用高速粉碎機(jī)磨成粉，過60目篩，在鍋中炒熟炒香，倒入瓶中，瓶口用玻璃紙?jiān)o，低溫保存?zhèn)溆谩?/p>
3山梨酸，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。
4苯甲酸，西隴化工股份有限公司產(chǎn)品。
5維生素c，浙江瑞新藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品。
6瓊脂粉，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。
7酵母粉，浙江富陽市杭福生物制品廠生產(chǎn)（濃縮酵母浸出粉）。
8蔗糖，杭州雅麗食品有限公司產(chǎn)品。
二、人工飼料配制
按以下配方稱好各原料：茶葉粉12.5克，黃豆粉4.0克，酵母粉1.5克，蔗糖2.5克，vc0.3克，瓊脂1.5克，山梨酸0.1克，苯甲酸0.1克，純凈水72～77.5ml。
先用少量丙酮（或無水乙醇）將山梨酸和苯甲酸分別溶解后，混勻倒入茶葉粉、黃豆粉和酵母粉的混合粉中攪拌均勻，以混合粉全部濕潤為度，再將混合物放入烘箱中低溫（40℃）烘干，使溶劑全部蒸發(fā)，后研磨攪拌均勻備用。
用10ml純凈水溶解蔗糖，5ml純凈水溶解vc片劑，57-62.5ml純凈水溶解瓊脂。將瓊脂液加熱至沸騰，持續(xù)3～5min。待冷卻至60℃時(shí)加入已用水溶解的蔗糖和vc。充分?jǐn)嚢杈鶆?，倒入上述茶葉粉、黃豆粉和酵母粉的混合粉中，迅速攪拌均勻后，倒入100ml小燒杯中或培養(yǎng)皿中，其中少量倒成1mm厚的薄層，供飼養(yǎng)前期使用，將小燒杯中或培養(yǎng)皿用保鮮膜封口后放入冰箱冷藏備用。
每次配制的飼料量應(yīng)根據(jù)飼養(yǎng)需要而確定。一般幼蟲低齡期用量較少，高齡期則需成倍增加。
三、人工飼料飼養(yǎng)
將薄層飼料切成小塊（1cm×0.5~1cm），較分散地貼在養(yǎng)蟲瓶（500ml罐頭瓶）內(nèi)一側(cè)的瓶壁上，接入初孵的茶尺蠖幼蟲，每瓶接蟲60～100頭。注意將貼有飼料的一側(cè)朝向光源。以鮮葉飼喂作為對(duì)照。所有養(yǎng)蟲瓶均用白紙和保鮮膜封口，放置在養(yǎng)蟲室內(nèi)養(yǎng)蟲架上。飼養(yǎng)條件為自然變溫20～26℃、濕度70～80%、光照l/d=12h/12h。
待幼蟲長至2齡后（約4天后），添加飼料。將小塊薄層飼料貼在瓶內(nèi)原飼料間或附近，便于幼蟲爬至新飼料取食。待幼蟲長至3齡時(shí)，將冷藏備用的飼料取出切成小塊，用玻璃毛細(xì)管將飼料塊串起，一根毛細(xì)管上串2～4塊，每瓶放置2～4根，相互交叉放置，任幼蟲爬行取食。因1～3齡幼蟲取食量較小，飼料添加的量較少。是否添加或更換飼料根據(jù)飼料的干濕情況而定。幼蟲進(jìn)入4齡后，飼料添加量相應(yīng)加大，可每天或隔天添加1次。飼養(yǎng)1代幼蟲一般只需配制2～3次飼料。
幼蟲飼養(yǎng)直至化蛹，在瓶中羽化后，按常規(guī)方法配對(duì)、取卵。然后按上述方法繼續(xù)飼養(yǎng)下1代。也可將飼養(yǎng)瓶內(nèi)的蛹取出，放入干凈的瓶中飼養(yǎng)，每瓶40-50頭蛹，羽化后按常規(guī)方法配對(duì)、取卵。再按上述方法繼續(xù)飼養(yǎng)下1代。
本發(fā)明幼蟲飼養(yǎng)過程中蟲糞不長霉。比鮮葉飼養(yǎng)更換食料次數(shù)少很多，十分簡便實(shí)用。人工飼料飼喂的茶尺蠖生長發(fā)育正常，幼蟲歷期比鮮葉飼喂的略有延長，存活率、生殖力等生物學(xué)指標(biāo)與取食鮮葉的對(duì)照無顯著差異（表1），可從卵孵化開始全程取食人工飼料，并可連續(xù)飼養(yǎng)多代（表2）。
表1人工飼料與鮮葉飼養(yǎng)茶尺蠖的效果
表2用人工飼料繼代飼養(yǎng)茶尺蠖的效果
實(shí)例2：利用本發(fā)明的飼料進(jìn)行eonpv增殖
一、帶毒（eonpv）人工飼料制備
人工飼料所用材料同上，eonpv為中國農(nóng)科院茶葉研究所制備的提純液，多角體含量為5×108pib/ml。
按以下配方稱好各原料：茶葉粉12.5克，黃豆粉4.0克，酵母粉1.5克，蔗糖2.5克，vc0.3克，瓊脂1.5克，山梨酸0.1克，苯甲酸0.1克，eonpv提純液0.23ml。
先用少量丙酮（或無水乙醇）將山梨酸和苯甲酸分別溶解后，混勻倒入茶葉粉、黃豆粉和酵母粉的混合粉中攪拌均勻，再將混合物放入烘箱中低溫（40℃）烘干后，研磨攪拌均勻備用。
用10ml純凈水溶解蔗糖，5ml純凈水溶解vc片劑，57ml純凈水溶解瓊脂。將瓊脂液加熱至沸騰，持續(xù)3~5min。待冷卻至60℃時(shí)加入蔗糖液、vc液和eonpv病毒的混合液。攪拌均勻后，倒入上述茶葉粉、黃豆粉和酵母粉的混合粉中，迅速攪拌均勻后，倒入100ml小燒杯中或小培養(yǎng)皿中，用保鮮膜封口后放入冰箱冷藏備用。
二、飼毒增殖
將飼料切成小塊（1cm×1~2cm），用玻璃毛細(xì)管將飼料塊串起放入養(yǎng)蟲瓶中，一根毛細(xì)管上串4～5塊，每瓶放置2～3根，相互交叉放置。接入健康茶尺蠖3齡幼蟲，每瓶接入30～40頭，任幼蟲取食。以飼喂帶病毒鮮葉（鮮葉在1×106pib/ml病毒液中浸漬晾干）為對(duì)照。待幼蟲全部死亡后，收集死蟲，按常規(guī)方法離心提純病毒并測(cè)定多角體含量。
試驗(yàn)結(jié)果（表3）表明，用本發(fā)明人工飼料添加病毒后飼喂3齡茶尺蠖幼蟲進(jìn)行病毒增殖可行，其病毒產(chǎn)量與鮮葉飼毒增殖的相當(dāng)，相互之間沒有顯著差異。
表3人工飼料增殖病毒與鮮葉增殖病毒的比較
實(shí)例3：本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)進(jìn)行對(duì)比飼養(yǎng)
設(shè)置了3種人工飼料的對(duì)比試驗(yàn)，按照茶粉制備方法的不同，設(shè)置了以下處理：（1）鮮葉自然晾干后磨粉（同本發(fā)明方法）,（2）鮮葉110℃烘干后磨粉（同李云壽等1992），（3）購買的特級(jí)炒青綠茶磨粉（同cn200710068384.0方法），按實(shí)例1方法分別配制3種飼料并進(jìn)行飼養(yǎng)。結(jié)果（表4）表明，茶尺蠖卵孵化后取食人工飼料3，幼蟲發(fā)育不良，未至3齡即陸續(xù)死亡，死亡率達(dá)100%，不能完成一個(gè)世代；而取食人工飼料1和人工飼料2則能順利完成一個(gè)世代。與人工飼料2相比，本發(fā)明所用方法（取食人工飼料1），幼蟲死亡率顯著更低，幼蟲歷期與鮮葉對(duì)照更接近。
表43種人工飼料的飼養(yǎng)效果比較