專利名稱：包括凝血酶抑制化合物和凝血因子Xa抑制劑的復合產物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新復合藥用活性化合物。
背景和已有技術血液凝固是涉及止血(即防止血管損傷失血)和血栓形成(即血管中血塊形成，有時導致血管阻塞)二者中的關鍵過程。
凝固是復雜系列酶促反應的結果。
在這系列反應中最終的一個步驟是前酶凝血酶原(proenzymeprothrombin)轉化為凝血活酶(active enzyme thrombin)。
已知凝血酶在凝固中起重要作用。它活化血小板，導致血小板凝集，轉化纖維蛋白原為纖維蛋白單體，它自發聚合為纖維蛋白多聚體，接著它又交聯該多聚體，形成不溶性血纖維蛋白。此外，凝血酶活化凝血因子V及凝血因子VIII導致由凝血酶原產生凝血酶的一種“正反饋”。
WO 94/29336披露了一族凝血酶抑制化合物，其包括HOOC-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-H(其中Cgl代表環己基甘氨酸，Aze代表S-三甲叉亞-2-羧酸及Pab-H代表4-氨甲基脒基苯(aminomethylamidinobenzene))，它也被稱為melagatran(參見實施例1的WO 94/29336)。WO 97/23499披露了尤其是melagatran的前體藥物。
凝血因子Xa是一種涉及血液凝固過程的連串蛋白酶類(a cascade ofproteases)。凝血因子Xa是在前蛋白酶(preceding protease)，它分裂凝血酶原，產生凝血酶。
已知某些化合物具有凝血因子Xa抑制的特性，R.B.Wallis對這個領域已有評述，參見Current Opinion in Therapeutic Patents(治療學專利中當前看法)，1993，1173-1179。眾所周知，有兩種蛋白質，一種被稱為抗抑制素，另一種被稱為標記抗凝蛋白(tick anbticoagulant protein，縮寫為TAP)，它們都屬于特殊凝血因子Xa抑制劑，在各種動物型血栓形成疾病中它具有抗血栓形成的特性。
也已知某些非胃蛋白酶的化合物具有凝血因子Xa抑制特性。
上述文件沒有公開或提出結合凝血因子Xa抑制劑給用melagatran或其藥用衍生物的藥物。我們現在發現，令人驚奇地是，剛好這種結合用藥產生了一種顯著的協同抗凝劑效應。

發明內容
按照本發明的第一個方面，提供了一種復合產物，包括(A)melagatran或其一種藥用的衍生物；及(B)一種凝血因子Xa抑制劑或其藥用的衍生物，其中各組分(A)及(B)是按與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的形式而配制的。
按照本發明的這種復合產物提供了結合凝血因子Xa抑制劑(或其衍生物)給用melagatran(或其衍生物)的藥物，并由此可按單獨制劑提供二者之一，其中至少一個制劑包括melagatran和至少一個包括凝血因子Xa抑制劑，或可作為一種復合制劑(即配制)提供它，(即提供包括melagatran和凝血因子Xa抑制劑的單一制劑)。
因此，還提供了(1)一種與藥用的輔劑、稀釋劑或載體成混合物的藥物制劑，其包括melagatran或其藥用衍生物和凝血因子Xa抑制劑或其藥用的衍生物，(此制劑以下簡稱“復合制劑”)；和(2)一種包括以下組分的試劑盒(a)包括與藥用的輔劑，稀釋劑或載體成混合物的melagatran或其藥用衍生物的一種藥物制劑；和(b)包括與藥用的輔劑，稀釋劑或載體成混合物的凝血因子Xa抑制劑或其藥用衍生物的一種藥物制劑，其組分(a)和(b)是各自以適合與另一組分結合用藥的形式提供的。
按照本發明的另一方面，提供了一種制備以上定義的試劑盒的方法，該方法包括使定義同上的組分(a)與定義同上的組分(b)相組合，從而提供適用于彼此結合用藥的兩個組分。
通過使該兩個組分彼此“相組合”，包括在該試劑盒部分內的組分(a)和(b)可以是(i)按單獨制劑(即彼此無關)提供，隨后將它們組合一起，彼此結合用于綜合治療(combination therapy)中；或(ii)按“復合包裝”的單獨組分被包裝在一起，并被同時提供，彼此結合用于綜合治療中。
因此，這里還進一步提供一種試劑盒，包括(I)按這里所定義的組分(a)和(b)中的一種；與(II)與兩個組分中另一組分相結合的那個組分的使用說明書。
這里所述的試劑盒可包括一種以上的包括適宜量/劑的melagatran或其衍生物的制劑，及/或一種以上的包括適宜量/劑的凝血因子Xa抑制劑或其衍生物的制劑，以便提供重復劑量。如果出現一種以上的制劑(包括二活性化合物之一)，則根據melagatran(或衍生物)的劑量或凝血因子Xa抑制劑(或衍生物)，化學組成及/或外觀，這種制劑可以是相同的或不同的。
本發明另一方面，提供了一種指示抗凝血治療條件的處理方法，它包括給用一種與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的藥物制劑藥，包括melagatran(或其藥用衍生物)和凝血因子Xa抑制劑(或其藥用的衍生物)。
本發明另一方面，提供了一種指示抗凝血治療條件(由它指示需要抗凝作用的場合)的處理方法，它包括給用患者對這種條件可容忍或敏感的藥物(a)包括與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的melagatran(或其藥用衍生物)的一種藥物制劑藥；并結合(b)包括與藥用的輔劑、稀釋劑或載體成混合物的凝血因子Xa抑制劑(或其藥用衍生物)的一種藥物制劑。
為避免疑問，這里所用術語“處理”包括治療及/或預防性處理。
對于此處所述試劑盒，所謂“與...結合用藥”，指的是在急性或慢性相關條件下的處理過程中，順序、單獨及/或同時地給用各自包括melagatran(或其衍生物)和凝血因子Xa抑制劑(或其衍生物)的制劑藥物。
因此，關于按照本發明的復合產物，術語“與...結合用藥”包括(任選反復)給用復合產物的兩種組分(melagatran/衍生物和凝血因子Xa抑制劑/衍生物)，(在復合制劑情況下)二者同時地，或(在試劑盒的情況下)非常及時地給藥，以能達到對病人有利的效果，即在相關條件處理過程中，效果高于在同一處理過程中沒有另一組分存在下單獨(任選反復)給用包括melagatran/衍生物的制劑或包括凝血因子Xa抑制劑/衍生物的制劑的效果。確定在有關具體條件下和處理過程中結合給藥是否獲得了較大的有利效果，將取決于接受處理或預防的條件，但是對于技術熟練人員通常都可以實現的。
此外，在按照本發明試劑盒的上下文中，術語“結合”包括在給用另一組分藥之前，之后及/或同時，可(任選反復)給用兩種制劑中一種或另一種藥物。在本文闡述中，術語“同時用藥”和“與...同時用藥”包括在彼此48小時(如24小時)內給用單獨劑量的melagatran(或其衍生物)和凝血因子Xa抑制劑(或其衍生物)的藥物。
melagatran和凝血因子Xa抑制劑的“藥用衍生物”包括鹽類(如藥用及無毒的有機酸或無機酸的加成鹽類)和溶劑化物。應當知道，該術語視情況而定還包括具有與melagatran或凝血因子Xa抑制劑相同生物學功能及/或活性的衍生物。此外，對于本發明目的，該術語還包括melagatran或凝血因子Xa抑制劑的前體藥物。melagatran，或凝血因子Xa抑制劑的“前體藥物”，視情況而定，包括在預定時間內(如在6-24小時之間給藥間隔內(即每日一次到四次”))經口服或腸胃外投藥后，在體內代謝可形成可實驗檢測的melagatran或各自凝血因子Xa抑制劑二物質之一的任一組合物。為避免疑問，該術語“腸胃外的”給藥包括所有非口服給藥。
可提及的melagatran的前體藥物包括在WO 97/23499中公開的那些。優選前體藥物為化學式R1O2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH(參見以上或WO97/23499中的略語表)的那些，其中R1代表C1-10烷基或芐基，諸如直鏈或分支鏈的C1-6烷基(如C1-4烷基，尤其甲基、正丙基、異丙基、叔丁基及，特別乙基)和OH基團替代Pab中的脒基氫。
可以按照本發明用于這種復合產物中的凝血因子Xa抑制劑包括在Current Opinion in Therapeutic Patents(治療學專利中當前看法)，1993，1173-1179中和國際專利申請所描述的那些WO 00/20416、WO 00/12479、WO 00/09480、WO 00/08 005、WO 99/64392、WO 99/62904、WO 99/57096、WO99/52895、WO 99/50263、WO 99/50257、WO 99/50255、WO 99/50254、WO99/48870、WO 99/47503、WO 99/42462、WO 99/42439、WO 99/40075、WO99/37304、WO 99/36428、WO 99/33805、WO 99/33800、WO 99/32477、WO99/32454、WO 99/31092、WO 99/26941、WO 99/26933、WO 99/26932、WO99/26919、WO 99/26918、WO 99/25720、WO 99/16751、WO 99/16747、WO99/12935、WO 99/12903、WO 99/11658、WO 99/11617、WO 99/10316、WO99/07732、WO 99/07731、WO 99/05124、WO 99/00356、WO 99/00128、WO99/00127、WO 99/00126、WO 99/00121、WO 98/57951、WO 98/57937、WO98/57934、WO 98/54164、WO 98/46591、WO 98/31661、WO 98/28282、WO98/28269、WO 98/25611、WO 98/24784、WO 98/22483、WO 98/16547、WO98/16525、WO 98/16524、WO 98/16523、WO 98/15547、WO 98/11094、WO98/07725、WO 98/06694、WO 98/01428、WO 97/48706、WO 97/46576、WO97/46523、WO 97/38984、WO 97/30971、WO 97/30073、WO 97/29067、WO97/24118、WO 97/23212、WO 97/21437、WO 97/08165、WO 97/05161、WO96/40744、WO 96/40743、WO 96/40679、WO 96/40100、WO96//38421、WO96/28427、WO 96/19493、WO 96/16940、WO 95/28420、WO 94/13693、WO00/24718、WO 99/55355、WO 99/51571、WO 99/40072、WO 99/26926、WO98/51684、WO 97/48706、WO 97/24135、WO 97/11693、WO 00/01704、WO00/71493、WO 00/71507、WO 00/71508、WO 00/71509、WO 00/71511、WO00/71512、WO 00/71515、WO 00/71516、WO 00/13707、WO 00/31068、WO00/32590、WO 00/33844、WO 00/35859、WO 00/35886、WO 00/38683、WO00/39087、WO 00/39092、WO 00/39102、WO 00/39108、WO 00/39111、WO00/39117、WO 00/39118、WO 00/39131、WO 00/40548、WO 00/40571、WO00/40583、WO 00/40601、WO 00/47207、WO 00/47553、WO 00/47554、WO00/47563、WO 00/47578、WO 00/51989、WO 00/53264、WO 00/59876、WO00/59902、WO 00/71510、WO 00/76970、WO 00/76971、WO 00/78747、WO01/02356、WO 01/02397、WO 01/05784、WO 01/09093、WO 01/12600、WO01/19788、WO 01/19795、WO 01/19798、WO 93/15756、WO 94/17817、WO95/29189、WO 96/18644、WO 96/20689、WO 96/39380、WO 97/22712、WO97/36580、WO 97/36865、WO 97/48687、WO 98/09987、WO 98/46626、WO98/46627、WO 98/46628、WO 98/54132、WO 99/07730、WO 99/33458、WO 99/37643和WO 99/64446；US 6,034,093、6,020,357、5,994,375、5,886,191、5,849,519、5,783,421、5,731,315、5,721,214、5,693,641、5,633,381、5,612,378、6,034,127、5,670,479、5,658,939、5,658,930、5,656,645、5,656,600、5,639,739、5,741,819、6,057,342、6,060,491、6,080,767、6,087,487、6,140,351和5,646,165；在日本專利申請中，JP 99152269、JP10017549、JP 10001467、JP 98017549、JP 00178243、JP 11140040、JP12143623、JP 12204081、JP 12302765、JP 6327488和JP 98001467；在歐洲專利申請中，EP 937 723、EP 937 711、EP 874 629、EP 842 941、EP 728758、EP 540 051、EP 419 099、EP 686 642、EP 1 016 663和EP 529 715；和德國專利申請，DE 19845153、DE 19835950、DE 19743435、DE 19829964、DE 19834751、DE 19839499、DE19900355、DE19900471和DE 19530996，所有文件的具體和一般披露均在此引以參考。
可以提及的凝血因子Xa也包括在國際專利申請中所公開的那些WO96/10022、WO 97/28129、WO 97/29104、WO 98/21188、WO 99/06371、WO99/57099、WO 99/57112、WO 00/47573、WO 00/78749、WO 99/09027和WO99/57113，所有文件中的具體和一般披露在此引以參考，以及4-{4-[4-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)哌嗪-1-羰基]苯基}吡啶-1-氧化物和其藥用衍生物，它們可以按照以下實施例1中所述的方法制備。
優選的凝血因子Xa抑制劑包括抗抑制素、標記抗凝蛋白和那些被稱為SQ-311和SQ-315的(參見國際專利申請WO 98/57951)；SN-292(參見國際專利申請WO 98/28282)；SN-429和SN-116(參見國際專利申請WO98/28269)；RPR-208707(參見國際專利申請WO 98/25611，實施例48)；XU-817(參見國際專利申請WO 98/01428)；SF-324和SF-303(參見國際專利申請WO97/23212)；YM 60828(參見國際專利申請WO 96/16940，實施例75)；FACTOREX(參見US 5,783,421)；SF-324(參見歐洲專利申請EP 874 629)；DX9065A(參見歐洲專利申請EP 540 051，實施例39)；1-(4-脒基芐基)-4-(6-氯代萘-2-基磺酰基)哌嗪-2-酮(參見JP 12204081，實施例2)；M55555(參見國際專利申請WO 99/33805，實施例39)；DPC423(1-(3-脒基芐基)-2-(2′-氨基磺酰基[1，1’-聯苯基]-4-)-4-溴代吡咯，參見國際專利申請WO98/28269)；3-(3，5-二氟-6-[3-(4，5二氫-1-甲基咪唑-2-基)苯氧基]-4-[2，3-二羥基丙氧基]吡啶-2-氧基)-4-羥基芐脒(參見國際專利申請WO00/31068)；ZK-807834(參見國際專利申請WO 97/29067)；1，4-二氮雜-4-(6-氯萘-2-基-磺酰基)-6-(甲氧甲基)-7-氧雜-1′-(吡啶-4-基)螺[雙環[4.3.0]壬烷-8，4′-哌啶]-2-酮(參見國際專利申請WO 01/02397)；(S)-1-(4-氨基喹唑啉-7-基-甲基)-4-[2-(5-氯噻吩-2-基氧)乙酰基]-3-甲氧甲基哌嗪-2-酮(參見國際專利申請WO 00/32590)；3-(2-[4-(2-氨基磺酰基苯基)苯甲酰氨基]苯氧基)芐脒(參見國際專利申請WO 01/19788)；和4-(2-[4-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)-2-(吡咯烷-1-基羰基甲基)哌嗪-1-基羰基]噻唑-5-基)吡啶N-氧化物(參見日本專利申請數JP 12143623)；以及以下專利實施例中的化合物國際專利申請WO 98/21188的實施例7，國際專利中請WO99/57113的實施例3和6，國際專利申請WO 00/78747的實施例6，US6,080,767的實施例188、211和167，國際專利申請WO 99/33805的實施例40、54和55，國際專利申請WO 01/05784的實施例5、6、8、9、10、11、12、13、15、16和17，國際專利申請WO 01/12600的實施例6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、22、23、25、26、28、29、30、31、32、33、34、38、39、40、41、42和43，和國際專利申請WO 00/35886的實施例802和877。
本領域技術人員對于術語“指示抗凝血治療的條件”，應當理解為包括以下內容處理及/或預防包括人類的動物血液及/或組織中的血栓形成和過高血液凝固性。眾所周知過高血液凝固性可以導致血栓栓塞的疾病。可以提及的有關過高血液凝固性和血栓栓塞疾病的條件包括遺傳的或后天的活化蛋白質C阻力，諸如凝血因子V-突變(factor V Leiden)，和在抗凝血酶III、蛋白質C、蛋白質S、肝素輔因子II中的遺傳或后天缺陷。已知與過高血液凝固性和血栓栓塞疾病相關的另一些條件，除凝固綜合癥(如彌漫性血管內凝血(DIC))和一般血管損傷(如由于手術)以外，還包括循環抗磷脂抗體(狼瘡抗凝物)、高胱氨酸血、誘導血小板減少的肝素和纖維蛋白溶解中的缺陷。
在例如神經變性疾病處理條件中，諸如阿爾茨海默氏病(Alzheimer′sdisease)，有一種不理想的過量凝血酶而無過高血液凝固性病征的情況。
可以提及的具體疾病狀態處理包括治療及/或預防處理各種靜脈血栓形成(如DVT)及肺栓塞、動脈血栓形成(如在心肌梗死，不穩定絞痛，血栓形成基脈搏和外動脈血栓形成)、和通常在心房纖維性顫動過程中來自心房的或在透壁性心肌梗塞來自左側心室的或由充血性心力衰竭所引起的全身性栓塞；預防在血栓溶解、經皮膚的反魯米那血管成形術(PTA)和冠狀動脈架搭橋手術之后的再閉塞(即血栓形成)；防止顯微手術和一般血管手術后血栓再形成。
更進一步指標包括由細菌、多處外傷、中毒或任何其它機制引起的彌漫性血管內凝血的治療及/或預防性處理；當血液與體內外來表面諸如血管接枝、血管斯坦特印模、血管導管、機械和生物人工瓣膜或任何其它醫用器材接觸時的抗凝血處理；及當血液與體外醫用器械接觸時，諸如利用心肺機或在血液透析進行心血管手術過程中的抗凝血處理；對自發病及成人呼吸窘迫綜合征、隨后用輻射處理或化學法治療的肺纖維化、膿毒性休克、敗血病、炎性反應的治療及/或預防處理，包括，但不局限于浮腫、急性或慢性動脈粥樣硬化諸如冠狀動脈疾病及動脈粥樣硬化噬菌斑的形成、大腦動脈疾病、腦梗死、腦血栓形成、腦栓塞、外部動脈疾病、局部缺血、絞痛(包括不穩定絞痛)、再灌注損害、經皮膚的反魯米那血管成形術(PTA)和冠狀動脈旁路術手術后再狹窄。
優選條件包括血栓形成。
按照本發明，均可通過口、靜脈、皮下、向頰、直腸、皮膚、鼻、氣管、支氣管、局部、通過任何其它腸胃外路徑，或經由吸入，以包括藥用劑型的melagatran及/或凝血因子Xa抑制劑的藥物制劑形式，給用melagatran、凝血因子Xa抑制劑及二者之一的衍生物的藥物。除用藥途徑以外，還可根據所治療的病癥及病人，以不同劑量給用這些組合物藥。
優選釋放方式是內吸收的(systemic)。對于melagatran及其衍生物，優選給藥方式是腸胃外的，更優選靜脈內的，而尤其皮下的。對于melagatran的前體藥物，優選給藥方式是口服。
對于哺乳動物，尤其對人類的治療處理，一般按與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的藥物制劑，根據所設想的用藥途徑和標準藥用慣例加以選擇，給用melagatran、凝血因子Xa抑制劑及其二者之一的衍生物的藥物。
給用melagatran及其衍生物(包括前體藥物)藥物的適宜制劑在文獻中已有描述，例如尤其國際專利申請WO 94/29336、WO 96/14084、WO 96/16671、WO 97/23499、WO 97/39770、WO 97/45138、WO 98/16252、WO 99/27912、WO99/27913、WO 00/12043及WO 00/13671，其中文件披露在此引以參考。
同樣，文獻中對給用凝血因子Xa抑制劑和衍生物(包括前體藥物)藥物的適宜制劑也有描述，例如已有技術文件中對關于以上提及的凝血因子Xa抑制劑所描述的那些，其中文件的披露在此引以參考。另外，對于技術熟練的人員，利用常規技術，易于實現適宜制劑的制劑，和包括melagatran/衍生物和凝血因子Xa抑制劑/衍生物二者的具體復合制劑。
在各自的制劑中，melagatran、凝血因子Xa抑制劑或二者衍生物的用量除取決于所用化合物外，還取決于治療條件的苛刻程度及患者，但對于技術熟練的人員這些都是易于確定的。
對哺乳動物的患者，尤其對病人的治療及/或預防性處理，通常可由開業醫生或技術熟練人員確定melagatran(或其衍生物(包括前體藥物)及凝血因子Xa抑制劑適宜劑量，也包括已有技術文件中對有關melagatran(其衍生物(包括前體藥物))和以上提及的凝血因子Xa抑制劑所論述的各自劑量，其中文件的披露在此引以參考。
對于melagatran，在對哺乳動物患者，尤其對病人的治療及/或預防性處理中，活性化合物、前體藥物及其衍生物的適宜劑量包括使在相關條件處理期間達到平均血漿濃度最多5μmol/L，例如在0.001-5μmol/L范圍的劑量。因此，適宜劑量對melagatran可以在每日一次0.1mg至每日三次25mg的范圍，及/或24小時期間腸胃外注入患者最多100mg，而對包括以上具體提及的melagatran前體藥物，其范圍在每日一次0.1mg至每日三次100mg的范圍。
對于凝血因子Xa抑制劑，用于治療或預防目的的適宜劑量是在按需給用分配劑量，例如，使承受10-500mg的范圍。當采用腸胃外路徑時，一般應當給藥劑量較低，例如對靜脈注射，一般應采用給藥劑量在例如1-50mg范圍。在連續輸注時，一般使用劑量在0.1-5mg/kg/hr。
在任何情況下，醫師，或技術熟練的人員，應當能夠確定對各個患者最適合的實際劑量，其實際劑量，除隨年齡、體重、性別和具體患者對治療反應而變外，很可能會隨治療的條件而變化。上述劑量屬于普通案例的范例；當然會有各種較高或較低劑量范圍適宜的個別情況、而且這些都在本發明范疇內。
當給用藥為分離的制劑時，其中可以由醫師或技術熟練的人員確定其制劑包括melagatran(或其衍生物)和凝血因子Xa抑制劑(或其衍生物)的用藥順序(即是否順序、單獨及/或同時地，以及在什么位置給用藥)。例如，用藥順序可能取決于對技術熟練人員很明顯的許多因素，諸如在處理過程或期間任何時候由于實際原因不能對患者給用一種或另一種制劑(如患者不省人事，而不能采取口服包括melagatran或凝血因子Xa抑制劑二者的制劑)。
與已有技術已知的相同方法的這種處理條件相比，這里所述的方法可能優點在于，它們在指示抗凝血治療的條件中，對于醫師及/或患者會更方便、更有效、毒性更小、活性范圍更寬、更有力、產生副作用更少、或可能會有其它適宜藥理學特性。
參照附圖，通過以下實施例說明本發明，但并非對其限制。


圖1說明對melagatran(圓形)、凝血因子Xa抑制劑YM 60828(方形)和melagatran和YM 60828的50/50的混合物(三角形)在凝血酶原時間凝結檢驗中的劑量反應曲線。
實施例14-{4-[4-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)哌嗪-1-羰基]苯基}吡啶-1-氧化物將3-氯代過氧苯甲酸(70-75％濃度640mg，2.6mmol，2.5摩爾當量)加至二氯甲烷(25mL)與1-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)-4-[4-(4-吡啶基)苯甲酰基]哌嗪(500mg，1.04mmol)的攪拌懸浮液中，并在環境溫度下攪拌反應2小時，在此時期內用薄層色譜法指示反應完成。用焦亞硫酸鈉溶液(2×20mL，1M)和鹽水順序洗滌該反應混合物，然后加以干燥(相分離紙)。蒸發得到褐色固體的粗產物；經乙醇結晶得到4-{4-[4-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)哌嗪-1-羰基]苯基}吡啶-1-氧化物，它為一種淺黃結晶固體。
1H NMR(d6-DMSO)3.0-3.3(寬s，4H)，3.4-3.9(寬d，4H)，7.0ppm(s，1H)，7.35(d，1H)，7.5(m，3H)，7.8(m，5H)，8.3(d，2H)，12.4(s，1H)MS(M+H)+495/497熔點265-267℃1-(5-氯代吲哚-2-基磺酰基)-4-[4-(4-吡啶基)苯甲酰基]哌嗪的制備被描述于國際專利申請WO 99/57113實施例3中。
實施例2在凝血酶原時間凝結試驗(Prothrombin Time Clotting Assay)中melagatran和凝血因子Xa的協同效應把包括男人和婦女的來自健康志愿者的血液，收集在50mL圓錐體的塑料管中，塑料管內裝有5mL 0.13mol/L的檸檬酸三鈉緩沖液。在冰上迅速冷卻此血液，并對其以2000xg離心20分鐘。然后將貧小板血漿分為各自10mL的部分，并用melagatran或用YM 60828(一種直接凝血因子Xa抑制劑；參見WO 96/16940)“spiked”為最后濃度2.33μmol/L。然后用YM 60828按一系列的比例(9∶1、8∶2、7∶3等)與該melagatran溶液混合，如表1所示。
表1MelagatranYM60828 Mixtureμmol/L μmol/L μmol/L2.33 0.00 2.332.10 0.23 2.331.86 0.47 2.331.63 0.70 2.331.40 0.93 2.331.17 1.17 2.330.93 1.40 2.33
0.70 1.63 2.330.47 1.86 2.330.23 2.10 2.330.00 2.33 2.33在添加200μL預加熱檢驗試劑(凝血活酶-S(Thromboplastin-S)，ISI1.1，Biopool Umea，Sweden)引發凝固之前，預加熱100μL的人血漿至37℃180秒。用與CR-A計算器，CR 1010打印機和PR60加熱塊(KC10A Amelung，Germany)連接一起的一臺機械血凝度計，確定凝血酶原時間(PT)。每個凝結測試均重復進行兩次。melagatran和YM60828(2.33μmol/L)的凝血酶原時間分別為95.2和64.9秒，而所有抑制劑的混合物(總濃度仍然是2.33μmol/L)表明，當該抑制劑按60-40％凝血酶抑制劑和40-60％凝血因子Xa抑制劑的比例混合時，PT值延長得驚人，最大值約300-310秒。所有結果示于表2中。
表2Melagatran YM60828 混合物 PTμmol/Lμmol/L μmol/L sec2.33 0.00 2.33 95.22.10 0.23 2.33 203.81.86 0.47 2.33 264.41.63 0.70 2.33 300.01.40 0.93 2.33 311.31.17 1.17 2.33 311.80.93 1.40 2.33 306.00.70 1.63 2.33 284.20.47 1.86 2.33 243.40.23 2.10 2.33 185.50.00 2.33 2.33 64.9為了檢驗是否這是“真實”的協同效應，除對melagatran和YM 60828的50∶50混合物之外，還對各個抑制劑都繪制了全劑量反應曲線。對各抑制劑均在濃度范圍0-2.33μmol/L下進行測試，如表3所示(melagatran和YM 60828)和表4所示(melagatran和YM 60828的50∶50的混合物)。
表3血漿濃度 凝血酶原時間(秒)μmol/L melagatran YM608280.0014.414.90.2318.121.60.4721.827.70.7025.434.40.9332.641.81.1743.246.81.4053.852.11.6365.355.51.8676.360.22.1087.262.1表4血漿濃度(μmol/L)總數 melagatran YM60828凝血酶原時間0.00 0.00 0.00 14.20.0580.029 0.029 15.20.1170.058 0.058 17.00.2330.117 0.117 21.70.4660.233 0.233 30.20.5830.291 0.291 53.80.7770.388 0.388 85.41.1650.583 0.583 134.72.3301.165 1.165 300.0為了確定各抑制劑及其50∶50的混合物的相對效力，對使凝血酶原時間(IC50)加倍所需濃度按如下方法確定用對照血漿(PT0)中的凝血酶原時間對不同抑制劑濃度下的凝血酶原時間(PT抑制劑)的比值對抑制劑濃度(對數變換后的)作圖，并擬合為S形劑量反應曲線(sigmoidal dose-response curves)，根據該曲線按如下公式計算IC50值y＝a/[1+(x/IC50)s]此處y＝(PT0)/(PTmela)，其范圍1～0；當PTmela等于PT0時，a＝最大范圍，即a＝1；s＝劑量反應曲線的斜率，x＝log(抑制劑濃度)，IC50＝使凝血酶原時間加倍的melagatran濃度。此計算是在采用軟件程序GraFitErithacus Version 3.0版(Robin Leatherbarrow，Imperial Collage ofScience，Technology & Medicine，London)的PC機上進行的。
對于melagatran、YM 60828及這兩種抑制劑的50∶50混合物的劑量反應曲線示于圖1中，根據圖1計算出IC50值分別是0.74、0.54及0.34μmol/L。
為了檢測，與單獨用melagatran及YM 60828二者相比，其混合物IC50值低是否反映了真實的協同效應，將這些結果應用于如Beerenbaum所定義的協同作用公式中劑A/AE+劑B/BE＜1其中AE及BE是melagatran及YM60828的等效濃度(即這些化合物IC50值分別是0.74及0.54μmol/L)。劑A和B是使IC50值達到0.34μmol/L的50∶50混合物中melagatran及YM60828的濃度，即A和B為0.17μmol/L。將這些常數代入上式中，得到數值0.54，這證明了協同作用判據得到滿足，而且當在凝血酶原時間凝結檢驗中測試它們時，melagatran及YM60828起到了體外真實的協同效應。
權利要求
1.一種復合產物，包括(A)melagatran或其藥用衍生物；及(B)凝血因子Xa抑制劑或其藥用衍生物，其中各組分(A)及(B)是按照與藥用輔劑、稀釋劑或載體的混合物而配制的。
2.按照權利要求1的復合產物，其包括與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的一種藥用制劑，所述制劑包括melagatran或其藥用的衍生物，和凝血因子Xa抑制劑或其藥用的衍生物。
3.按照權利要求1的復合產物，它包括一種含有下列組分的試劑盒(a)包括與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的melagatran或其藥用衍生物的一種藥用制劑；和(b)包括與藥用輔劑、稀釋劑或載體成混合物的凝血因子Xa抑制劑或其藥用衍生物的一種藥用制劑；其組分(a)和(b)是各自以適合與另一組分結合用藥的形式提供的。
4.按照權利要求3的試劑盒，其中組分(a)和(b)適合于在指示抗凝血治療條件的處理中順序、單獨及/或同時地使用。
5.按照權利要求1-4任一項的復合產物，其中melagatran的衍生物是一種melagatran的前體藥物。
6.按照權利要求5的復合產物，其中該前體藥物化學式是R1O2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH，其中R1代表直鏈或分支鏈C1-6烷基，而OH基團替代Pab中的一個脒基氫。
7.按照權利要求6的復合產物，其中R1代表甲基、乙基、正丙基、異丙基或叔丁基。
8.按照權利要求1-7任一項的復合產物，其中凝血因子Xa抑制劑的衍生物是該抑制劑的一種前體藥物。
9.一種制備按照權利要求3-8任一項定義的試劑盒的方法，該方法包括使按照權利要求3-8任一項所定義的組分(a)與按照權利要求3-8任一項所定義的組分(b)相組合，從而提供適合于彼此結合用藥的兩個組分。
10.一種試劑盒包括(I)按照權利要求3-8任一項所定義的組分(a)和(b)中的一個；以及(II)與二個組分中另一組分相結合的那個組分的使用說明書。
11.一種指示抗凝血治療條件的處理方法，它包括給用患者對這種條件容忍或敏感的按照權利要求1-8任一項所定義的復合產物或按照權利要求10所定義的試劑盒的藥物。
12.對于按照權利要求1-8任一項所定義的復合產物，或按照權利要求10中所定義的試劑盒，用于配制針對指示抗凝血治療條件的處理或預防藥物方面的應用。
13.對于melagatran或其藥用衍生物和凝血因子Xa抑制劑或其藥用衍生物，用于配制針對指示抗凝血治療條件的處理或預防藥物方面的應用。
全文摘要
提供了一種復合產物，包括(A)melagatran或其藥用衍生物；及(B)凝血因子Xa抑制劑或其藥用衍生物，其中各組分(A)及(B)是按與藥用的輔劑、稀釋劑或載體混合物而配制的，以及這種復合產物在指示抗凝血治療條件的處理中的應用。
文檔編號A61K45/00GK1431912SQ0181022
公開日2003年7月23日 申請日期2001年6月6日 優先權日2000年6月10日
發明者C·馬特松 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司