Lps疫苗的制作方法
【專利摘要】提供了一種禽用疫苗組合物，其包含作為活性成分的含有源自革蘭氏陰性菌的O-抗原的結(jié)構(gòu)，其中所述結(jié)構(gòu)范圍內(nèi)不含有全細(xì)胞，及產(chǎn)生所述疫苗組合物的方法。在本發(fā)明中，使用含有來(lái)自革蘭氏陰性菌的O-抗原(例如脂多糖)的結(jié)構(gòu)作為抗原用于疫苗。因此，與傳統(tǒng)全細(xì)胞疫苗相比，接種反應(yīng)的發(fā)生可以減少并且注射溶液的量也可以減少，并且可以制備多混合疫苗。
【專利說(shuō)明】LPS疫苗

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供可用于預(yù)防由革蘭氏陰性菌例如沙門(mén)氏菌和大腸桿菌佐cWi)引起 的傳染性疾病的新的疫苗。特別地，本發(fā)明涉及使用作為保護(hù)性抗原的源自革蘭氏陰性菌 的含0-抗原（例如脂多糖）的結(jié)構(gòu)免疫非人動(dòng)物，特別是禽類的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 細(xì)菌在用革蘭氏染色法進(jìn)行測(cè)試的時(shí)候具有不同的染料親和性，這取決于細(xì)胞壁 的不同組成，且細(xì)菌基于它們?nèi)玖嫌H和力的差異被分為兩種主要的群體，革蘭氏陰性和革 蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。在革蘭氏陰性菌的情況下，細(xì)胞壁由外膜和外膜內(nèi)側(cè)的肽聚糖層組成。外 膜由磷脂，脂多糖（LPS)，脂蛋白和膜蛋白組成。外膜的單位膜結(jié)構(gòu)由磷脂和脂多糖組成。 發(fā)現(xiàn)脂多糖在膜的外層，而磷脂在其內(nèi)層。脂多糖由高分子量的脂質(zhì)，稱為脂質(zhì)A，和與其 結(jié)合的多糖組成。脂質(zhì)A構(gòu)成外膜的外層，而脂多糖從外膜向外延伸。外部部分和鄰近脂 質(zhì)A部分的糖的種類互不相同。外部部分被稱為0-側(cè)鏈多糖（0-抗原），而內(nèi)部部分被稱 為核心多糖。由〇-抗原組成的糖主要是己糖和戊糖，并且由3-5種這些多糖組成的基本結(jié) 構(gòu)重復(fù)出現(xiàn)。在核心多糖中，除了這些糖外，還存在對(duì)于各個(gè)細(xì)菌來(lái)說(shuō)獨(dú)特的糖如辛糖，例 如酮脫氧辛酸，和庚糖。脂質(zhì)A是對(duì)各個(gè)細(xì)菌來(lái)說(shuō)獨(dú)特的脂質(zhì)，其包含糖，即兩分子的葡萄 糖胺，其相互以β-1，6-結(jié)合，和與所述糖結(jié)合的磷酸和脂肪酸。脂質(zhì)A與核心多糖在糖的 6'_位置結(jié)合。
[0003] 存在許多種革蘭氏陰性菌。沙門(mén)氏菌屬和埃希氏菌屬 (&cAe_ricAia)，屬于腸桿菌科（feieroAacieriaceae),以及嗜血桿菌屬 屬于巴氏桿菌科ieareWaceae)也都包括在革蘭氏陰性菌中。
[0004] 沙門(mén)氏菌屬，具有周身鞭毛的第二大桿菌，根據(jù)0-抗原的類型被分為多組，且進(jìn) 一步根據(jù)H-抗原的類型進(jìn)行細(xì)分，導(dǎo)致超過(guò)2000種血清型。沙門(mén)氏菌的宿主范圍非常廣 泛，已知多種哺乳動(dòng)物包括人和禽類被沙門(mén)氏菌感染或攜帶沙門(mén)氏菌。當(dāng)雞被感染時(shí)，沙門(mén) 氏菌可以在小雞中引起敗血癥。然而，在成年雞中，雞攜帶者因無(wú)癥狀而避免被捕殺，且其 結(jié)果是源自于被沙門(mén)氏菌污染的雞的雞肉和雞蛋被發(fā)售，通過(guò)由此制造的食品而導(dǎo)致人食 物中毒。
[0005] 沙門(mén)氏菌引起的食物中毒在攝入被污染食物之后的12-48小時(shí)的潛伏期之后發(fā) 生。潛伏期依賴于細(xì)菌的攝入量，患者的狀況和年齡可能不同。癥狀主要是急性腸胃炎，且 主要癥狀是，腹瀉，腹部疼痛，嘔吐和發(fā)熱。因此，雞的沙門(mén)氏菌疫苗不僅僅是預(yù)防雞發(fā)生疾 病，而且還是用于公共衛(wèi)生的重要疫苗。
[0006] 在傳統(tǒng)的針對(duì)沙門(mén)氏菌的疫苗中，是包含滅活沙門(mén)氏菌細(xì)胞的全細(xì)胞疫苗。然而， 全細(xì)胞疫苗可能引起副作用，這是因?yàn)樗痪哂锌乖缘牟糠帧Ｔ诔扇猴曫B(yǎng)的雞中，考 慮到疫苗接種的人力節(jié)約，強(qiáng)烈需要可以通過(guò)單次注射預(yù)防多種疾病的多價(jià)疫苗。而且，多 價(jià)疫苗可以有助于減少雞的壓力，因?yàn)樗鼫p少了注射的次數(shù)。但是，雖然多價(jià)疫苗具有這樣 的便利性，它容易在注射部位引起接種反應(yīng)，特別是當(dāng)它包含細(xì)菌如沙門(mén)氏菌時(shí)。
[0007] 在這種情況下，已進(jìn)行了針對(duì)沙門(mén)氏菌的組分疫苗的研究，其中研究了脂多糖 (0-抗原）的應(yīng)用。例如，有報(bào)道由源自鼠傷寒沙門(mén)氏菌皿riw?)的 〇-抗原與載體蛋白結(jié)合的綴合物施用給小鼠，以證實(shí)其效力（非專利參考文獻(xiàn)1)。還有報(bào) 道源自傷寒沙門(mén)氏菌7>#i)的脂多糖施用給小鼠以證實(shí)其效力（專利參考 文獻(xiàn)1)。除沙門(mén)氏菌外，有報(bào)道源自泰國(guó)伯克氏菌或類鼻 疽伯克氏菌你 MeWiZoffiaWei)的脂多糖施用給小鼠以證實(shí)其效力（專利參考 文獻(xiàn)2,非專利參考文獻(xiàn)2)。
[0008] 但是，在用于活體的藥物中脂多糖的污染被謹(jǐn)慎地避免，因?yàn)橹嗵窃谂R床上 可能引起多種高致死的疾病，例如敗血性休克，彌散性血管內(nèi)凝血（DIC)和多器官衰竭 (MOF)，而且甚至是在痕量的情況下也可能成為發(fā)熱的病因（非專利參考文獻(xiàn)3)。在實(shí)踐 中，據(jù)報(bào)道在施用脂多糖之后72小時(shí)內(nèi)，超過(guò)90%的小鼠死亡（專利參考文獻(xiàn)3)。在這種 情況下，通常不會(huì)提出使用脂多糖本身作為疫苗抗原的想法。
[0009] 專利參考文獻(xiàn) 專利參考文獻(xiàn)I: W02004/052394 專利參考文獻(xiàn)2: W02010/082020 專利參考文獻(xiàn)3:日本專利
【發(fā)明者】坂元隆一, 坂口正士 申請(qǐng)人:一般財(cái)團(tuán)法人化學(xué)及血清療法研究所