本發(fā)明屬于口服乳劑技術領域，具體涉及一種雙嘧達莫口服乳劑給藥系統(tǒng)及其制備方法。
背景技術：
雙嘧達莫又名潘生丁，作為一種較強的擴冠脈藥物用于急、慢性冠脈功能不全、心絞痛,具有抗血栓形成作用，可抑制血小扳聚集，高濃度可抑制血小板釋放，雙嘧達莫對冠狀血管有較強的擴張作用，可顯著增加冠脈流量，增加心肌供血量。長期以來在臨床上成功用于防治心絞痛，預防心肌梗死復發(fā)及血栓形成等。近年來有研究發(fā)現(xiàn)，雙嘧達莫有廣譜抗病毒活性，能抑制病毒特異性增殖過程，還能誘生干擾素增強機體對病毒的免疫功能，臨床應用廣泛，尤其在兒科應用普遍。對小RNA病毒、正粘液病毒和某些DNA病毒有抑制作用。目前臨床還用于嬰幼兒病毒性腹瀉、小兒病毒性急性上呼吸道感染、小兒手足口病、水痘、小兒皰疹性咽峽炎、流行性腮腺炎、乙型肝炎、流行性乙型腦炎、慢性腎功能衰竭、以及過敏性疾病、兒童哮喘、新生兒硬腫癥等疾病。
在治療小兒秋季腹瀉方面：雙嘧達莫抑制二氧嘧啶核苷通過細胞膜進入FL細胞，同時可以選擇性抑制病毒RNA的合成，而不會影響宿主正常的細胞內(nèi)RNA的合成。雙嘧達莫還可影響體內(nèi)前列腺素的代謝，減慢腸道活動，使其分泌減少，進而增加腸道對水和電解質(zhì)的吸收，恢復腸道功能。
在治療小兒病毒性上呼吸道感染方面：雙嘧達莫具有廣譜抗病毒活性，能完全抑制病毒特異的增殖過程。其機制是阻止二氧嘧啶核苷、腺苷、脫氧胞嘧啶核苷等進入細胞內(nèi)，從而選擇性地抑制病毒RNA的合成，而治療量的雙嘧達莫對宿主的RNA合成無影響。雙嘧達莫還能誘生干擾素，增加機體對病毒的免疫功能。同時研究證明雙嘧達莫可抑制血小板、上皮細胞和紅細胞攝取腺苷，治療濃度時該抑制作用成依賴性，局部腺苷濃度增高使cAMP增多，同時雙嘧達莫可抑制各種組織中的磷酸二酯酶(PDF)，治療濃度抑制環(huán)磷酸鳥苷二酯酶(cGMP-PDE)，對cAMP-PDE的抑制作用弱，因而強化內(nèi)皮舒張因子(EDRF)引起的cGMP的濃度增高。而cAMP既可穩(wěn)定細胞膜，抑制過敏性遞質(zhì)的釋放和減輕支氣管黏膜的充血水腫，又具有擴張平滑肌的作用。同時雙嘧達莫能擴張冠狀動脈等血管，降低血液黏稠度，從而對改善微循環(huán)、減輕肺水腫有一定作用，且安全范圍較大。
由于雙嘧達莫親脂性強，溶出度差，口服生物利用度僅為50％左右。鑒于以上原因?qū)е律锢枚鹊偷娜秉c，有必要采用制劑學手段以提高其生物利用度。而且目前國內(nèi)己上市的產(chǎn)品只有片劑，分散片，緩釋膠囊，注射劑。鑒于雙嘧達莫在小兒相關疾病的應用日漸增多，且以上劑型均不適合兒童使用，開發(fā)一款適合于兒童使用的劑型，提高兒童服藥順應性，改善口感，提高生物利用度成為現(xiàn)在迫切需要解決的問題。
將雙嘧達莫制作成口服乳制劑，具有其他劑型所無法比擬的優(yōu)勢。首先液體劑型方便兒童服用，不會出現(xiàn)吞咽困難，無需用水送服，改善病人患者對服用藥物的恐懼心理，使病人患者(尤其兒童)從心理上樂于接受，病人患者(尤其兒童)服藥依從性好?？诜橹苿┛筛纳扑幤啡艹龆龋龠M藥物吸收，提高生物利用度，經(jīng)高壓勻質(zhì)后乳劑劑的粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好。本發(fā)明藥物包裝為單劑量，且劑量根據(jù)兒童用量，制備兒童最小單次劑量包裝，使服藥劑量準確，避免過量或劑量人為分割不準確而引起的兒童用藥安全隱患。
現(xiàn)有專利比如中國專利CN201010105210.9公開了雙嘧達莫自乳化給藥系統(tǒng)及其制備方法，該專利的目的是改善雙嘧達莫的溶出度；口服后能顯著促進藥物吸收，提高生物利用度，減小個體差異；其制得的雙嘧達莫自乳化給藥系統(tǒng)，加水后經(jīng)輕微攪拌或口服給藥后在體內(nèi)通過胃腸道蠕動能自發(fā)形成乳滴粒徑為10～500nm的乳液。但是眾所周知乳劑在輕微攪拌或胃腸道蠕動下，很難形成穩(wěn)定的乳狀液體，且粒徑大，乳劑的穩(wěn)定性至今仍是工藝上面臨解決的問題。
技術實現(xiàn)要素：
為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供了一種雙嘧達莫口服乳劑給藥系統(tǒng)及其制備方法。
本發(fā)明具體技術方案如下：
本發(fā)明提供了一種雙嘧達莫乳劑，所述雙嘧達莫乳劑包括如下重量份數(shù)的成分：雙嘧達莫1～2.5份、乳化劑5～75份、助乳化劑0.1～15份、油25～150份以及水250～500份；
所述油包括大豆油、芝麻油、蓖麻油、茶油、花生油、玉米油、橄欖油、油酸乙酯、油酸丁酯、長鏈甘油三酯以及中鏈甘油三酯中的至少一種；
所述乳化劑包括吐溫類、司盤類、泊洛沙姆類、大豆磷脂、卵磷脂、聚氧乙烯脂肪酸酯類、聚氧乙烯脂肪醇醚類、絲氨酸磷脂、肌醇磷脂、磷脂酸、腦磷脂、氫化磷脂以及蔗糖脂肪酸酯類中的至少一種；
所述助乳化劑包括油酸鈉、油酸、黃原膠、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、甘油、丙二醇、海藻酸鈉、瓊脂、瓜爾豆膠、果膠、單硬脂酸甘油脂、硬脂酸、聚乙二醇、月桂酸單甘油酯、聚甘油脂以及聚維酮中的至少一種。
上述配比經(jīng)過優(yōu)化，可顯著提高雙嘧達莫乳劑的均一性和穩(wěn)定性，在保證藥效的同時使其更易于服用和儲存。
進一步地，所述乳化劑為重量份數(shù)比為3～5:1～4:1的大豆磷脂、泊洛沙姆以及絲氨酸磷脂。
使用上述乳化劑組合，可以顯著改善雙嘧達莫乳劑的質(zhì)地，提高乳劑的均勻性和穩(wěn)定性，使乳劑質(zhì)地均勻、不易分層。
進一步地，所述助乳化劑為重量份數(shù)比為2～3:1～2:1的海藻酸鈉、油酸鈉以及月桂酸單甘油酯。
使用上述助乳化劑組合，可以調(diào)節(jié)乳化劑的HLB值，提升乳化劑的乳化作用，形成的乳滴更小，使乳劑更加穩(wěn)定、均勻。
進一步地，所述雙嘧達莫乳劑還包括重量份數(shù)為0.5～1份的甜味劑、1～2份的芳香劑以及0.25～0.5份的防腐劑。
進一步地，所述甜味劑包括蔗糖、木糖醇、葡萄糖、甜菊糖苷、阿斯巴甜以及果糖中的至少一種。
進一步地，所述芳香劑包括橘子香精、菠蘿香精、草莓香精、蘋果香精、香蕉香精、檸檬香精、櫻桃香精、牛奶香精以及巧克力香精中的至少一種。
甜味劑和芳香劑可以提升乳劑的口感，掩蓋不良味道，更利于使用者特別是兒童服用。
進一步地，所述防腐劑包括對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸乙酯、羥苯甲酸丙酯、山梨酸、山梨酸鉀、苯甲酸鈉、雙乙酸鈉、丙酸鈣、乳酸鈉、氯化膽堿以及納他霉素中的至少一種。
進一步地，所述防腐劑為重量份數(shù)比為2～3:1～2:1的丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素。
使用上述防腐劑組合，可以有效抑制乳劑中有害微生物的滋生，提高乳劑的穩(wěn)定性、延長保存期限。
本發(fā)明另一方面提供了一種制備上述所述的雙嘧達莫乳劑的方法，包括如下步驟：
(1)油相的制備：向所述油中加入雙嘧達莫、2/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50-80℃，制得油相；
(2)水相的制備：向1/2重量份數(shù)的水中加入1/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50-80℃，制得水相；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在4000～12000r/min的條件下攪拌1～5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入1/2重量份數(shù)的水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，在50～100Mpa的條件下均質(zhì)5～10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，或采用巴氏滅菌法進行滅菌，得到成品乳劑。
進一步地，所述方法包括如下步驟：
(1)油相的制備：向所述油中加入雙嘧達莫、2/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50-80℃，制得油相；
(2)水相的制備：向1/2重量份數(shù)的水中加入1/3重量份數(shù)的乳化劑以及1/2重量份數(shù)的助乳化劑，再加入所述甜味劑或所述芳香劑，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50-80℃，制得水相；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在4000～12000r/min的條件下攪拌1～5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入1/2重量份數(shù)的水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，加入所述防腐劑，在50～100Mpa的條件下均質(zhì)5～10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，或采用巴氏滅菌法進行滅菌，得到成品乳劑。
本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供的雙嘧達莫乳劑質(zhì)地均勻、穩(wěn)定性好，藥品溶出度提高、易于被人體吸收、生物利用率高。經(jīng)高壓勻質(zhì)后乳劑的粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好。顯著改善了雙嘧達莫的溶出度，提高口服生物利用度，經(jīng)過初乳的高剪切-高壓勻質(zhì)后，乳劑粒徑小且分布均勻，穩(wěn)定性好，使藥物口感順滑，液體劑型更易吞咽，無需沖泡使用方便，減小胃腸道不良反應，提高患者服藥順應性；乳劑中還可加入甜味劑、芳香劑等矯味劑，可有效掩蓋藥物不良味道，多種口味也為兒童提供了多種選擇。安全性高，服藥簡單方便。采用充氮灌裝，105℃滅菌30min或采用巴氏滅菌生產(chǎn)工藝，可以少加或不加防腐劑，得到成品乳劑品質(zhì)更高，進一步增加了兒童用藥的安全性。
具體實施方式
實施例1
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
實施例2
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
實施例3
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向茶油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至60℃；
(2)水相的制備：向125份水中加入油酸鈉和海藻酸鈉，充分攪拌后置于水浴中恒溫至70℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在4000r/min的條件下攪拌5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入125份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，在50Mpa的條件下均質(zhì)10次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實施例4
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向橄欖油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50℃；
(2)水相的制備：向125份水中加入油酸鈉和海藻酸鈉，充分攪拌后置于水浴中恒溫至80℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在12000r/min的條件下攪拌1min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入125份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，在100Mpa的條件下均質(zhì)5次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進行滅菌，得到成品乳劑。
實施例5
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向大豆油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至60℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、蔗糖以及鮮奶香精，充分攪拌后置于水浴中恒溫至60℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在10000r/min的條件下攪拌3min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在80Mpa的條件下均質(zhì)8次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實施例6
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向茶油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至60℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、阿斯巴甜和巧克力香精，充分攪拌后置于水浴中恒溫至70℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在4000r/min的條件下攪拌5min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在50Mpa的條件下均質(zhì)10次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進行滅菌，得到成品乳劑。
實施例7
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向橄欖油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、甜菊糖苷以及檸檬香精，充分攪拌后置于水浴中恒溫至80℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在12000r/min的條件下攪拌1min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入水補至250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在100Mpa的條件下均質(zhì)5次，放涼后充氮灌裝，105℃滅菌30min，得到成品乳劑。
實施例8
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法如下：
(1)油相的制備：向蓖麻油中加入雙嘧達莫、大豆磷脂、泊洛沙姆、絲氨酸磷脂以及月桂酸單甘油酯，充分攪拌后置于水浴中恒溫至80℃；
(2)水相的制備：向250份水中加入油酸鈉、海藻酸鈉、木糖醇以及菠蘿香精，充分攪拌后置于水浴中恒溫至50℃；
(3)初乳的制備：將所述水相置于組織搗碎機中，在8000r/min的條件下攪拌3min；將所述油相緩慢加入所述水相中，邊加入邊攪拌，全部加入后繼續(xù)以上述條件攪拌5min；加入250份水后繼續(xù)攪拌10min即制得初乳；
(4)乳劑的制備：將所述初乳倒入高壓勻質(zhì)機進料口中，加入丙酸鈣、氯化膽堿以及納他霉素，在70Mpa的條件下均質(zhì)8次，放涼后充氮灌裝，采用巴氏滅菌法進行滅菌，得到成品乳劑。
對照例1
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例1。
對照例2
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例1。
對照例3
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例1。
對照例4
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例5。
對照例5
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例5。
對照例6
一種雙嘧達莫乳劑，由如下重量份數(shù)的成分組成：
所述雙嘧達莫乳劑的制備方法同實施例5。
實驗例1
物理穩(wěn)定性實驗
以實施例1～4中提供的乳劑作為實驗組1～4，以對照例1～3中提供的乳劑作為對照組1～3，進行如下實驗：
(1)極端溫度貯存實驗
在60℃下敞口放置15天，分別于第5天、第10天和第15天取樣，比較各組乳劑的穩(wěn)定性。首先將各組乳劑置于潔凈的透明容器中，肉眼觀察、比較各組乳劑的性狀；然后取各組乳劑置于15ml尖底離心管中，以4000r/min的轉速離心10min，比較各組乳劑的性狀。
通過肉眼觀察，各組乳劑均為乳白色液體、帶有微黃顏色，流動性好、無分層，無粘壁性、也無漂油，表明各組乳劑均質(zhì)地均一、質(zhì)感良好；經(jīng)過離心，各實驗例中乳劑的顏色和氣味均無明顯變化，也未出現(xiàn)肉眼可見的不均勻、分層等現(xiàn)象；各對照例中乳劑在前10天無明顯變化，但在第15天時出現(xiàn)不同程度的顏色變深、油相水相分層等現(xiàn)象。這表明各實驗例中乳劑較各對照例中乳劑穩(wěn)定性更好、貨架壽命更長，能夠耐受較高的溫度。
(2)強光照射試驗
將乳劑放在裝有日光燈的光照箱內(nèi)，于照度為4500lx±500lx的條件下放置15天，分別于第5天、第10天和第15天取樣，按照實驗例1中所述的肉眼觀察和離心方法比較各組乳劑的穩(wěn)定性。
通過比較，各實驗例中乳劑的顏色和氣味均無明顯變化，也未出現(xiàn)肉眼可見的不均勻、分層等現(xiàn)象；各對照例中乳劑在前10天無明顯變化，但在第15天時出現(xiàn)顏色變深、油相水相分層等現(xiàn)象。這表明各實驗例中乳劑較各對照例中乳劑穩(wěn)定性更好、貨架壽命更長，能夠耐受較長時間的光照。由此可知，大豆磷脂+泊洛沙姆+絲氨酸磷脂的乳化劑組合加上海藻酸鈉+油酸鈉+月桂酸單甘油酯的助乳化劑組合共同使用時，乳劑的穩(wěn)定性優(yōu)于使用其中個別幾種或其他種類乳化劑和助乳化劑時的乳劑穩(wěn)定性。
實驗例2
微生物穩(wěn)定性實驗
以實施例5～8中提供的乳劑作為實驗組1～4，以對照例4～6中提供的乳劑作為對照組1～3，進行如下實驗：
(1)菌液制備
a.將大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分別接種于5ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)液的試管中，37℃培養(yǎng)18～24h。
b.將白色念珠菌和黑曲霉菌分別接種于10ml薩布羅氏培養(yǎng)液中，置于20～25℃下培養(yǎng)，白色念珠菌培養(yǎng)48小時，黑曲霉菌培養(yǎng)7d。
c.用0.1％蛋白胨水稀釋菌液，使其每毫升含菌量為1*108個，并立即使用。
(2)測定方法
A.以實施例6～8做為實驗組1～3，以對照例3～4作為對照組1～2，取10ml各組乳劑樣品于滅菌錐形瓶中，每組樣品做三組平行，另取0.1％滅菌蛋白胨水10ml一份作空白對照。以上各菌液各取1ml分別加入上述供試品和對照管中，使其各菌數(shù)控制在106～107之間，搖勻置于20～25℃避光貯存，分別于第0h、24h、48h、7d、14d取樣測定細菌和霉菌的存活數(shù)。
b.取上述接種的供試液和對照液各1ml，用0.1％的蛋白胨水按1:10稀釋至適宜含菌數(shù)，然后取適宜濃度的供試液和對照液1ml于平皿中，每組3個平皿，再注入培養(yǎng)基，分別在適宜條件下進行培養(yǎng)。細菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在30～37℃下培養(yǎng)48h后計算菌落數(shù)。霉菌用薩布羅氏瓊脂培養(yǎng)基，白色念球菌在20～25℃下培養(yǎng)72h、黑曲霉在20～25℃下培養(yǎng)5d后計算菌落數(shù)。
表3各組乳劑菌數(shù)變化情況
由表1可知，實驗組1～4在培養(yǎng)過程中細菌和真菌的菌體個數(shù)均出現(xiàn)顯著降低，并且在培養(yǎng)48h以后菌體個數(shù)適中保持在0.01*103以下，表明實驗組各組對細菌和真菌均具有良好的抑制能力。對照組1～3組在培養(yǎng)過程中細菌和真菌的菌體個數(shù)也出現(xiàn)明顯降低，但對照組各組的降低幅度顯著小于實驗組各組，并且在培養(yǎng)至14天時，對照組各組真菌的菌體個數(shù)又出現(xiàn)上升趨勢，表明對照組各組也具有一定的抑菌性能，但其抑菌能力顯著低于實驗組各組。由此可知，丙酸鈣+氯化膽堿+納他霉素的防腐劑組合，其抑菌能力顯著高于使用其中個別幾種防腐劑或其他防腐劑時的抑菌能力。
實驗例3
動物實驗
1.實驗材料
藥品：利巴韋林片，由馬應龍藥業(yè)集團股份有限公司生產(chǎn)，批號150401；
樣品：實施例1制得的雙嘧達莫口服乳；
甲型流感病毒A/PR8/34，由中國預防醫(yī)學科學院病毒研究所提供。
2.實驗動物
昆明種小鼠30只，每只體重20±2g，由哈爾濱腫瘤醫(yī)院動物室提供。
3.實驗方法
(1)將30只小鼠隨機分為3組，每組10只；
(2)用乙醚將小鼠輕度麻醉，陰性對照組小鼠以生理鹽水滴鼻，每鼠30μL；陽性對照組和實驗組分別以4倍LD50(半數(shù)致死量，LD50＝10-471)的甲型流感病毒(A/PR8/34)液滴鼻感染，每鼠30μL，感染量為1倍LD50；
(3)滴鼻感染半小時后，用生理鹽水0.2ml對陰性對照組小鼠進行灌胃，用利巴韋林溶液對陽性對照組小鼠進行灌胃(將利巴韋林片研碎后加生理鹽水混合，使利巴韋林濃度為10mg/kg)，用4mg/kg的雙嘧達莫乳劑對給藥組小鼠進行灌胃，每天灌胃一次，連續(xù)7天。
(4)實驗結果觀測記錄
A.對各組小鼠的生長情況及行為變化進行常規(guī)觀察；
B.計算肺指數(shù)：最后一次給藥后.以脫頸椎法處死各組小鼠，摘取小鼠完整肺組織，用潔凈紗布吸干水分，稱重后按照如下公式計算各組小鼠的肺指數(shù)：
肺指數(shù)＝肺全重(g)/體重(g)x10
4.實驗結果
(1)各組小鼠生長情況及行為變化常規(guī)觀察
陰性對照組小鼠感染病毒后2天內(nèi)未出現(xiàn)明顯異常癥狀.第3天開始出現(xiàn)呼吸急促，行動遲緩，毛發(fā)無光澤，飲食減少、消瘦等表現(xiàn)，第4日開始出現(xiàn)死亡.7天內(nèi)共死亡4只；給藥組和陽性對照組小鼠未出現(xiàn)明顯的病態(tài)癥狀，亦無小鼠死亡。飲食正常，毛色稍欠光澤。體重增長緩慢。
(2)觀察肺指數(shù)
*表示P<0.05，即有顯著性差異。
與陰性對照組比較，陽性對照組和給藥組均能降低上呼吸道感染小鼠肺指數(shù).與陰性對照組組比較具有顯著性差異(P<0.05)。表明雙嘧達莫口服乳劑能有效抑制甲型流感病毒引起的小鼠上呼吸道感染。
以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。