本申請是申請日為2011年4月15日的題為“靶向吡咯并苯并二氮雜卓結合物”的中國專利申請號201180029867.4的分案申請。本發明涉及靶向吡咯并苯并二氮雜卓(吡咯并苯并二氮雜，pbd)結合物，具體地通過單體之一的c2位置結合到靶向劑上的吡咯并苯并二氮雜卓二聚體。
背景技術：
：一些吡咯并苯并二氮雜卓(pbd)能夠識別并且結合到dna的特定序列上；優選的序列是pugpu。第一種pbd抗腫瘤抗生素，安曲霉素，發現于1965年(leimgruber,etal.,j.am.chem.soc.,87,5793-5795(1965)；leimgruber,etal.,j.am.chem.soc.,87,5791-5793(1965))。從那時起，已經報道了許多天然發生的pbd，并且針對各種各樣的類似物已經開發了10種以上的合成路徑(thurston,etal.,chem.rev.1994,433-465(1994))。家族成員包括abbeymycin(hochlowski,etal.,j.antibiotics,40,145-148(1987))，契卡霉素(chicamycin)(konishi,etal.,j.antibiotics,37,200-206(1984))，dc-81(日本專利58-180487；thurston,etal.,chem.brit.,26,767-772(1990)；bose,etal.,tetrahedron,48,751-758(1992))，甲基氨茴霉素(kuminoto,etal.,j.antibiotics,33,665-667(1980))，新絲拉霉素a和b(takeuchi,etal.,j.antibiotics,29,93-96(1976))，porothramycin(tsunakawa,etal.,j.antibiotics,41,1366-1373(1988))，prothracarcin(shimizu,etal,j.antibiotics,29,2492-2503(1982)；langleyandthurston,j.org.chem.,52,91-97(1987))，西班米星(dc-102)(hara,etal.,j.antibiotics,41,702-704(1988)；itoh,etal.,j.antibiotics,41,1281-1284(1988))，西伯利亞霉素(leber,etal.,j.am.chem.soc.,110,2992-2993(1988))以及托馬霉素(arima,etal.,j.antibiotics,25,437-444(1972))。pbd具有通式結構：它們的差別在于在它們的芳族a環和吡咯并c環兩者中取代基的數目、類型和位置，以及在于c環的飽和度。在b環中，在n10-c11位置處，存在亞胺(n＝c)、甲醇胺(nh-ch(oh))、或甲醇胺甲醚(nh-ch(ome))，它是負責烷基化dna的親電中心。所有已知的天然產物在手性c11a位置處具有(s)-構型，當從c環朝向a環看時，所述構型為它們提供了右手轉動(right-handedtwist)。這給予它們適當的三維形狀以與b型dna的小溝具有相同螺旋性(isohelicity)，這導致在結合位點處滑動配合(kohn,inantibioticsiii.springer-verlag,newyork,pp.3-11(1975)；hurleyandneedham-vandevanter,acc.chem.res.,19,230-237(1986))。pbd在小溝中形成加合物的能力使它們能夠干擾dna加工，因此它們用作抗腫瘤劑。可以通過柔性亞烷基接頭通過它們的c8/c’-羥基官能團將兩個pbd單元連接在一起來增強這些分子的生物活性(bose,d.s.,etal.,j.am.chem.soc.,114,4939-4941(1992)；thurston,d.e.,etal.,j.org.chem.,61,8141-8147(1996))。pbd二聚體被認為形成序列選擇性dna損傷例如回文的5’-pu-gatc-py-3’鏈間交聯(smellie,m.,etal.,biochemistry,42,8232-8239(2003)；martin,c.,etal.,biochemistry,44,4135-4147)，它被認為主要負責它們的生物活性。pbd二聚體的一個實施是sg2000(sjg-136)：(gregson,s.,etal.,j.med.chem.,44,737-748(2001)；alley,m.c.,etal.,cancerresearch,64,6700-6706(2004)；hartley,j.a.,etal.,cancerresearch,64,6693-6699(2004))。由于這些高度有效化合物在交聯dna中的作用方式，已經對稱地制造pbd二聚體，即，二聚體的兩個單體是相同的。通過構建同時具有已經形成的二聚體鍵的pbd二聚體部分，或者通過使已經構建的pbd單體部分與二聚體連接基團反應，這種合成路徑提供了直接合成。這些合成方法已經限制了用于制備包含pbd的靶向結合物的選項。然而，由于pbd二聚體的觀察到的效力，對于可結合到靶向劑上以用于靶向治療的pbd二聚體存在需要。技術實現要素：本發明涉及包含連接到靶向劑上的pbd的二聚體的結合物，其中在為了將化合物連接于靶向劑上提供錨定物的c2位置處，pbd單體具有取代基。本發明還涉及包含結合到靶向劑上的pbd二聚體的結合物，其中二聚體的pbd單體是不同的。在為了將化合物連接到靶向劑上提供錨定物的c2位置處，pbd單體之一具有取代基。本文描述的結合物對于表達靶分子的細胞(如癌細胞或免疫細胞)具有強有力的細胞毒性和/或細胞抑制活性。與相應的不含pbd二聚體的藥物化合物相比較，這些結合物顯示出具有降低毒性的良好效力。在一些實施方式中，結合物具有下面式i：l-(lu-d)p(i)其中l是配體單元(即，靶向劑)，lu是接頭單元，并且d是包含pbd二聚體的藥物單元。下標p是1至20的整數。因此，結合物包含通過接頭單元共價地連接到至少一個藥物單元上的配體單元。下面更全面描述的配體單元是結合到靶部分上的靶向劑。配體單元可以，例如，特異性地結合到細胞成分(細胞結合劑)上或結合到感興趣的其他靶分子上。因此，本發明還提供了例如用于治療各種癌癥和自身免疫病的方法。這些方法包括使用結合物，其中配體單元是特異性地結合到靶分子上的靶向劑。配體單元可以是，例如，蛋白質、多肽或肽，例如抗體，抗體的抗原結合片段，或其他結合劑，如fc融合蛋白。在第一方面，所述結合物包括式i(同上)的結合物，其中藥物單元包含下面式ii的pbd二聚體：其中：r2具有式iii：其中a是c5-7芳基，x是用于結合到接頭單元上的可活化基團，其中x選自包括-o-、-s-、-c(o)o-、-c(o)-、-nhc(o)-、以及–n(rn)-的組中，其中rn選自包括h、c1-4烷基以及(c2h4o)mch3的組中，其中m是1至3，以及(i)q1是單鍵，并且q2選自單鍵和-z-(ch2)n-，其中z選自單鍵、o、s以及nh，并且n是1至3；或者(ii)q1是-ch＝ch-，并且q2是單鍵；r12是c5-10芳基，被選自下組的一個或多個取代基可選地取代，該組包括：鹵素、硝基、氰基、醚、c1-7烷基、c3-7雜環基和雙氧-c1-3亞烷基；r6和r9獨立地選自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、硝基、me3sn和鹵素；其中r和r’獨立地選自可選地取代的c1-12烷基、可選地取代的c3-20雜環基以及可選地取代的c5-20芳基；r7選自h、r、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nhrr’、硝基、me3sn和鹵素；(a)r10是h，并且r11是oh或ora，其中ra是c1-4烷基；(b)在它們結合到其上的氮原子與碳原子之間，r10和r11形成氮-碳雙鍵；或者(c)r10是h并且r11是sozm，其中z是2或3并且m是單價藥學上可接受的陽離子；r″是c3-12亞烷基，它的鏈可以被一個或多個雜原子中斷(例如，o、s、nrn2(其中rn2是h或c1-4烷基))，和/或是芳環(例如，苯或吡啶)；y和y’選自o、s、或nh；r6’、r7’、r9’分別選自與r6、r7和r9相同的組中，并且r10’和r11’與r10和r11相同，其中如果r11和r11’是sozm，則m可以表示二價藥學上可接受的陽離子。在第二方面，提供了式i的結合物用于制造用于治療增生性疾病或自身免疫病的藥物的用途。在相關的第三方面，提供了式i的結合物用于治療增生性疾病或自身免疫病的用途。在另一個方面，提供了式i的結合物用于在目標位置提供pbd二聚體、或它的鹽或溶劑化物的用途。本領域普通技術人員能夠容易地確定候選結合物是否治療任何特定細胞類型的增生性病癥。例如，在以下實施例中描述了可以常規地用于評估由特定化合物提供的活性的測定法。術語“增生性疾病”是指不希望的過多或異常細胞的不想要的或不受控制的細胞增殖，如，新生性或增生性生長(無論在體外或在體內)。增生性病癥的實例包括，但不限于，良性、惡性前期、以及惡性細胞增殖，包括但不限于，新生物和腫瘤(例如，組織細胞瘤、膠質瘤、星形細胞瘤、骨瘤)、癌癥(例如，肺癌、小細胞肺癌、胃腸癌、腸癌、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、肝癌、腎癌、膀胱癌、胰腺癌、腦癌、肉瘤、骨肉瘤、卡波西肉瘤、黑素瘤)、白血病、牛皮癬、骨病、纖維增生性疾病(例如結締組織的纖維增生性疾病)、以及動脈粥樣硬化。感興趣的其他癌癥包括，但不限于，血液學惡性腫瘤如白血病和淋巴瘤，如非霍奇金淋巴瘤、以及亞型如dlbcl、邊緣區、外套區(mantlezone)、和濾泡性霍奇金淋巴瘤、aml、以及b或t細胞起源的其他癌癥。自身免疫病的實例包括下面各項：類風濕性關節炎、自身免疫性脫髓鞘疾病(例如，多發性硬化癥、變應性腦脊髓炎)、銀屑病關節炎、內分泌性眼病、葡萄膜視網膜炎(uveoretinitis)、系統性紅斑狼瘡、重癥肌無力、格雷夫斯病、腎小球腎炎、自身免疫性肝臟疾病、炎性腸病(例如，克羅恩病)、過敏反應、變態反應、舍格倫綜合征、i型糖尿病、原發性膽汁性肝硬化、韋格納肉牙腫病、纖維肌痛、多肌炎、皮肌炎、多發性內分泌功能衰竭、施密特綜合征、自身免疫性葡萄膜炎、艾迪生病、腎上腺炎、甲狀腺炎、橋本甲狀腺炎、自身免疫性甲狀腺病、惡性貧血、胃萎縮、慢性肝炎、狼瘡樣肝炎、動脈粥樣硬化、亞急性皮膚紅斑狼瘡、甲狀旁腺功能減退、德雷斯勒綜合征、自身免疫性血小板減少癥、特發性血小板減少性紫癜、溶血性貧血、尋常性天皰瘡、天皰瘡、皰疹樣皮炎、脫發(alopeciaarcata)、類天皰瘡、硬皮病、進行性系統性硬化病、crest綜合征(鈣質沉著癥、雷諾現象、食道運動功能障礙、指端硬化、以及毛細管擴張)、男性和女性自身免疫性不孕、強直性脊柱炎、潰瘍性結腸炎、混合性結締組織病、結節性多動脈炎、系統性壞死性血管炎、特應性皮炎、特應性鼻炎、古德帕斯丘綜合征、查加斯病、結節病、風濕熱、哮喘、復發性流產、抗磷脂綜合征、農夫肺、多形性紅斑、心臟切開術后綜合征、庫欣綜合征、自身免疫性慢性活動性肝炎、鳥愛好者肺(bird-fancier’slung)、中毒性表皮壞死溶解癥、奧爾波特綜合征、牙槽炎、變應性肺泡炎、纖維性肺泡炎、間質性肺病、結節性紅斑、壞疽性膿皮癥、輸血反應、高安動脈炎、風濕性多肌痛、顳動脈炎、血吸蟲病、巨細胞性動脈炎、蛔蟲病、曲霉病、sampter氏綜合征、濕疹、淋巴瘤樣肉芽腫病、白塞病、卡普蘭綜合征、川畸病、登革熱、腦脊髓炎、心內膜炎、心肌心內膜纖維化、眼內炎、持久性隆起性紅斑、牛皮癬、胎兒成紅細胞增多、嗜酸性筋膜炎、舒爾曼綜合征、費爾蒂綜合征、絲蟲病、睫狀體炎、慢性睫狀體炎、異時性睫狀體炎、富克斯睫狀體炎、iga腎病、亨-舍紫癜、移植物抗宿主病、移植排斥、心肌病、伊-蘭綜合征、復發性多軟骨炎、冷球蛋白血癥、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、埃文斯綜合征、以及自身免疫性性腺衰竭。在一些實施方式中，自身免疫病是b淋巴細胞的疾病(例如，系統性紅斑狼瘡、古德帕斯丘綜合征、類風濕性關節炎、以及ⅰ型糖尿病)、th1-淋巴細胞的的疾病(例如，類風濕性關節炎、多發性硬化、牛皮癬、舍格倫綜合征、橋本甲狀腺炎、格雷夫斯病、原發性膽汁性肝硬化、韋格納肉牙腫病、結核病、或移植物抗宿主病)、或th2-淋巴細胞的疾病(例如，特應性皮炎、系統性紅斑狼瘡、特應性哮喘、鼻結膜炎、變應性鼻炎、澳門綜合征、系統性硬化病、或慢性移植物抗宿主病)。通常，涉及樹突狀細胞的疾病涉及th1-淋巴細胞或th2-淋巴細胞的疾病。在一些實施方式中，自身免疫性疾病是t細胞介導的免疫紊亂。在第四方面，本發明包括制造式i的結合物的方法。通過與前面用于制造對稱二聚體pbd化合物的策略同于的策略，來制造用于本發明的二聚體pbd化合物。具體地，本發明的發明人已經開發了涉及以分離方法步驟將每個c2芳基取代基加入對稱pbd二聚體核心的方法。因此，本發明的第六方面提供了制造式i結合物的方法，包括本文描述的方法步驟中至少一個。附圖說明圖1至圖6顯示了本發明的結合物在腫瘤中的作用。具體實施方式定義當本文中使用商品名時，除非上下文另有說明，提及商品名還指商品名產品的產品配方、通用名藥物、以及一種或多種活性藥物成分。結合劑和靶向劑如在本文中使用的術語“結合劑”和“靶向劑”是指特異性地結合到靶分子上的分子，例如蛋白質、多肽或肽。實例可以包括全長抗體、全長抗體的抗原結合片段、包括特異性地結合到靶分子上的抗體重鏈和/或輕鏈可變區的其他試劑(蛋白質、多肽或肽)，或包含結合到靶分子上以及連接到抗體的fc區、結構域或其一部分上的蛋白質、肽、多肽的胞外域的fc融合蛋白。特異性地結合術語“特異性地結合”和“特異性結合”是指抗體或其他蛋白、多肽或肽結合到預先確定的分子上(例如，抗原)。典型地，抗體或其他分子以至少約1x107m-1的親合力結合，并且以比它結合到與預先確定的分子或緊密相關分子不同的非特異性分子(例如，bsa、酪蛋白)上的親和力高至少兩倍的親合力結合到預先確定的分子上。藥學上可接受的陽離子藥學上可接受的單價和二價陽離子的實例在berge,etal.,j.pharm.sci.,66,1-19(1977)中進行討論，通過引用將其結合在此。藥學上可接受的陽離子可以是無機的或有機的。藥學上可接受的單價無機陽離子的實例包括，但不限于，堿金屬離子如na+和k+。藥學上可接受的二價無機陽離子的實例包括，但不限于，堿土金屬陽離子如ca2+和mg2+。藥學上可接受的有機陽離子的實例包括，但不限于，銨離子(即nh4+)和取代的銨離子(例如nh3r+、nh2r2+、nhr3+、nr4+)。一些適當取代的銨離子的實例是來自下面的那些：乙胺、二乙胺、二環己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、芐胺、苯基芐胺、膽堿、葡甲胺、和氨丁三醇，以及氨基酸，如賴氨酸和精氨酸。常見的季銨離子的實例是n(ch3)4+。取代基如在本文中使用的短語“可選地取代”是指可以是未取代的或可以是取代的母體基團。除非另有說明，如在本文中使用的，術語“取代”是指具有一個或多個取代基的母體基團。術語“取代基”在本文中以常規含義使用并且是指共價連接到，或者如果適當的話，融合到母體基團上的化學部分。多種多樣的取代基是熟知的，并且用于它們形成以及引入多種母體基團中的方法也是熟知的。下面更詳細地說明取代基的實例。c1-12烷基：如在本文中使用的，術語“c1-12烷基”是指通過從具有1至12個碳原子的碳氫化合物的碳原子上去除氫原子而獲得的單價部分，它可以是脂肪族或脂環族，并且它可以是飽和或不飽和的(例如部分不飽和、完全不飽和)。因此，術語“烷基”包括下面討論的子類：鏈烯基、炔基、環烷基等。飽和烷基的實例包括，但不限于，甲基(c1)、乙基(c2)、丙基(c3)、丁基(c4)、戊基(c5)、己基(c6)和庚基(c7)。飽和的線性烷基的實例包括，但不限于，甲基(c1)、乙基(c2)、正丙基(c3)、正丁基(c4)、正戊基(戊基)(c5)、正己基(c6)和正庚基(c7)。飽和的支鏈烷基的實例包括異丙基(c3)、異丁基(c4)、仲丁基(c4)、叔丁基(c4)、異戊基(c5)、和新戊基(c5))。c2-12鏈烯基：如在本文中使用的術語“c2-12鏈烯基”是指具有一個或多個碳-碳雙鍵的烷基。不飽和的鏈烯基的實例包括，但不限于乙烯基(ethenyl)(乙烯基，vinyl，-ch＝ch2)、1-丙烯基(-ch＝ch-ch3)、2-丙烯基(烯丙基，-ch-ch＝ch2)、異丙烯基(1-甲基乙烯基，-c(ch3)＝ch2)、丁烯基(c4)、戊烯基(c5)、和己烯基(c6)。c2-12炔基：如在本文中使用的，術語“c2-12炔基”是指具有一個或多個碳-碳三鍵的烷基。不飽和的炔基的實例包括，但不限于，乙炔基(-c≡ch)和2-丙炔基(炔丙基，-ch2-c≡ch)。c3-12環烷基：如在本文中使用的，術語“c3-12環烷基”是指還是環基的烷基；即，通過從環烴(碳環)化合物的脂環原子上去除氫原子而獲得的單價部分，所述部分具有3至7個碳原子(包括3至7個環原子)。環烷基的實例包括，但不限于，來自下面的那些：飽和的單環碳氫化合物：環丙烷(c3)、環丁烷(c4)、環戊烷(c5)、環己烷(c6)、環庚烷(c7)、甲基環丙烷(c4)、二甲基環丙烷(c5)、甲基環丁烷(c5)、二甲基環丁烷(c6)、甲基環戊烷(c6)、二甲基環戊烷(c7)和甲基環己烷(c7)；不飽和的單環碳氫化合物：環丙烯(c3)、環丁烯(c4)、環戊烯(c5)、環己烯(c6)、甲基環丙烯(c4)、二甲基環丙烯(c5)、甲基環丁烯(c5)、二甲基環丁烯(c6)、甲基環戊烯(c6)、二甲基環戊烯(c7)和甲基環己烯(c7)；以及飽和的多環碳氫化合物：降蒈烷(c7)、降蒎烷(c7)、降莰烷(c7)。c3-20雜環基：如在本文中使用的，術語“c3-20雜環基”是指通過從雜環化合物的環原子上去除氫原子而獲得的單價部分，所述單價部分具有3至20個環原子，其中1至10個是環雜原子。優選地，每個環具有3至7個環原子，其中1至4個是環雜原子。在本發明上下文中，前綴(例如c3-20、c3-7、c5-6等)表示環原子的數目、或環原子(無論是碳原子還是雜原子)的數目范圍。例如，如在本文中使用的，術語“c5-6雜環基”是指具有5或6個環原子的雜環基。單環雜環基的實例包括，但不限于，來自下面的那些：n1：氮丙啶(c3)、氮雜環丁烷(c4)、吡咯烷(四氫吡咯)(c5)、吡咯啉(例如，3-吡咯啉、2,5-二氫吡咯)(c5)、2h-吡咯或3h-吡咯(異吡咯)(c5)、哌啶(c6)、二氫吡啶(c6)、四氫吡啶(c6)、氮雜卓(c7)；o1：氧雜環丙烷(oxirane)(c3)、氧雜環丁烷(oxetane)(c4)、氧雜環戊烷(oxolane)(四氫呋喃)(c5)、氧雜環戊二烯(二氫呋喃)(c5)、噁烷(四氫吡喃)(c6)、二氫吡喃(c6)、吡喃(c6)、噁庚(c7)；s1：硫雜環丙烷(c3)、硫雜環丁烷(c4)、硫雜環戊烷(四氫噻吩)(c5)、硫雜環己烷(四氫噻喃)(c6)、硫雜環庚烷(thiepane)(c7)；o2：二氧雜環戊烷(c5)、二氧雜環己烷(c6)、和二氧雜環庚烷(c7)；o3：三氧雜環己烷(c6)；n2：咪唑烷(c5)、吡唑烷(二氮雜環戊烷)(c5)、咪唑啉(c5)、吡唑啉(二氫吡唑)(c5)、哌嗪(c6)；n1o1：四氫噁唑(c5)、二氫噁唑(c5)、四氫異噁唑(c5)、二氫異噁唑(c5)、嗎啉(c6)、四氫噁嗪(c6)、二氫噁嗪(c6)、噁嗪(c6)；n1s1：噻唑啉(c5)、噻唑烷(c5)、硫代嗎啉(c6)；n2o1：噁二嗪(c6)；o1s1：氧硫雜環戊二烯(oxathiole)(c5)和氧硫雜環己烷(噻噁烷)(c6)；以及n1o1s1：噁噻嗪(c6)。取代的單環雜環基的實例包括來自環形式糖的那些：例如，呋喃糖(c5)，如阿拉伯呋喃糖、來蘇呋喃糖(lyxofuranose)、呋喃核糖、和呋喃木糖(xylofuranse)；以及吡喃糖(c6)，如吡喃阿洛糖(allopyranose)、吡喃阿卓糖(altropyranose)、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡喃古洛糖(gulopyranose)、吡喃艾杜糖(idopyranose)、吡喃半乳糖、和吡喃塔羅糖(talopyranose)。c5-20芳基：如在本文中使用的，術語“c5-20芳基”是指通過從芳香族化合物的芳環原子上去除氫原子而獲得的單價部分，所述單價部分具有3至20個環原子。優選地，每個環具有5至7個環原子。在本發明上下文中，前綴(例如，c3-20、c5-7、c5-6等)表示環原子的數目、或環原子(無論碳原子還是雜原子)的數目范圍。例如，如在本文中使用的，術語“c5-6芳基”是指具有5或6個環原子的芳基。環原子可以都是碳原子(如在“碳芳基”中)。碳芳基的實例包括，但不限于，來自下面的那些：苯(例如苯基)(c6)、萘(c10)、甘菊環(c10)、蒽(c14)、菲(c14)、萘并萘(c18)、和芘(c16)。芳基(所述芳基包含稠環，其中至少一個是芳環)的實例包括，但不限于來自下面的基團：茚滿(例如2,3-二氫-1h-茚)(c9)、茚(c9)、異茚(c9)、四氫化萘(1,2,3,4-四氫化萘)(c10)、苊(c12)、芴(c13)、菲烯(非那烯，phenalene)(c13)、醋菲(c15)、和醋蒽(c16)。可替換地，環原子可以包括一個或多個雜原子(如在“雜芳基”中)。單環雜芳基的實施例包括，但不限于，來自下面的那些：n1：吡咯(pyrrole)(吡咯，azole)(c5)、吡啶(吖嗪)(c6)；o1：呋喃(氧雜環戊二烯)(c5)；s1：噻吩(thiophene)(噻吩，thiole)(c5)；n1o1：噁唑(c5)、異噁唑(c5)、異噁嗪(c6)；n2o1：噁二唑(呋咱)(c5)；n3o1：噁三唑(c5)；n1s1：噻唑(c5)、異噻唑(c5)；n2：咪唑(1,3-二唑)(c5)、吡唑(1,2-二唑)(c5)、噠嗪(1,2-二嗪)(c6)、嘧啶(1,3-二嗪)(c6)(例如，胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1,4-二嗪)(c6)；n3：三唑(c5)、三嗪(c6)；以及n4：四唑(c5)。包含稠環的雜芳基的實例包括，但不限于：c9(具有2個稠環)，來自苯并呋喃(o1)、異苯并呋喃(o1)、吲哚(n1)、異吲哚(n1)、中氮茚(n1)、二氫吲哚(n1)、異二氫吲哚(n1)、嘌呤(n4)(例如，腺嘌呤、鳥嘌呤)、苯并咪唑(n2)、吲唑(n2)、苯并噁唑(n1o1)、苯并異噁唑(n1o1)、苯并二氧雜環戊二烯(o2)、苯并呋咱(n2o1)、苯并三唑(n3)、苯并噻吩(s1)、苯并噻唑(n1s1)、苯并噻二唑(n2s)；c10(具有2個稠環)，來自色烯(o1)、異色烯(o1)、色滿(o1)、異色滿(o1)、苯并二噁烷(o2)、喹啉(n1)、異喹啉(n1)、喹嗪(n1)、苯并噁嗪(n1o1)、苯并二嗪(n2)、吡啶并吡啶(n2)、喹喔啉(n2)、喹唑啉(n2)、噌啉(n2)、酞嗪(n2)、萘啶(n2)、蝶啶(n4)；c11(具有2個稠環)，來自苯并二氮雜卓(n2)；c13(具有3個稠環)，來自咔唑(n1)、二苯并呋喃(o1)、二苯并噻吩(s1)、咔啉(n2)、萘嵌間二氮雜苯(n2)、吡啶并吲哚(n2)；以及c14(具有3個稠環)，來自吖啶(n1)、氧雜蒽(o1)、噻噸(s1)、噁蒽(oxanthrene)(o2)、氧硫雜蒽(phenoxathiin)(o1s1)、吩嗪(n2)、吩噁嗪(n1o1)、吩噻嗪(n1s1)、噻蒽(s2)、菲啶(n1)、菲咯啉(n2)、吩嗪(n2)。上述基團(無論單獨地或其他取代基的一部分)本身可以可選地被選自它們本身和下面列出的另外取代基的一個或多個基團取代。鹵素：-f、-cl、-br、和-i。羥基：-oh。醚：-or，其中r是醚取代基，例如，c1-7烷基(也稱為c1-7烷氧基，在下面討論)、c3-20雜環基(也稱為c3-20雜環氧基)、或c5-20芳基(也稱為c5-20芳氧基)，優選c1-7烷基。烷氧基：-or，其中r是烷基，例如，c1-7烷基。c1-7烷氧基的實例包括，但不限于，-ome(甲氧基)、-oet(乙氧基)、-o(npr)(正丙氧基)、-o(ipr)(異丙氧基)、-o(nbu)(正丁氧基)、-o(sbu)(仲丁氧基)、-o(ibu)(異丁氧基)、和-o(tbu)(叔丁氧基)。縮醛：-ch(or1)(or2)，其中r1和r2獨立地是縮醛取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基，或者，在“環狀”縮醛基團的情況下，r1和r2，連同它們附連到其上的兩個氧原子以及它們附連到其上的碳原子一起，形成具有4至8個環原子的雜環。縮醛基團的實例包括，但不限于，-ch(ome)2、-ch(oet)2、和-ch(ome)(oet)。半縮醛：-ch(oh)(or1)，其中r1是半縮醛取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。半縮醛基團的實施例包括，但不限于，-ch(oh)(ome)和-ch(oh)(oet)。縮酮：-cr(or1)(or2)，其中r1和r2如針對縮醛所定義，并且r是不同于氫的縮酮取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。縮酮基團的實例包括，但不限于-c(me)(ome)2、-c(me)(oet)2、-c(me)(ome)(oet)、-c(et)(ome)2、-c(et)(oet)2、和-c(et)(ome)(oet)。半縮酮：-cr(oh)(or1)，其中r1如針對半縮醛所定義，并且r是不同于氫的半縮酮取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。半縮醛基團的實例包括，但不限于，-c(me)(oh)(ome)、-c(et)(oh)(ome)、-c(me)(oh)(oet)、和-c(et)(oh)(oet)。氧代(酮基、-酮)：＝o。硫酮(thione)(硫酮，thioketone)：＝s。亞氨基(亞胺)：＝nr，其中r是亞氨基取代基，例如，氫、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選氫或c1-7烷基。酯基團的實例包括，但不限于，＝nh、＝nme、＝net、和＝nph。甲酰(甲醛，carbaldehyde,carboxaldehyde)：-c(＝o)h。酰基(酮基)：-c(＝o)r，其中r是酰基取代基，例如，c1-7烷基(也稱為c1-7烷基酰基(alkylacyl)或c1-7烷酰基(alkanoyl))、c3-20雜環基(也稱為c3-20雜環基酰基)、或c5-20芳基(也稱為c5-20芳酰基)，優選c1-7烷基。酰基的實例包括，但不限于-c(＝o)ch3(乙酰基)、-c(＝o)ch2ch3(丙酰基)、-c(＝o)c(ch3)3(叔丁酰基)、和-c(＝o)ph(苯酰基，苯酮)。羧基(羧酸)：-c(＝o)oh。硫代羧基(硫代羧酸)：-c(＝s)sh。硫醇羧基(硫醇羧酸)：-c(＝o)sh。硫羰羧基(硫羰羧酸)：-c(＝s)oh。亞胺酸：-c(＝nh)oh。異羥肟酸：-c(＝noh)oh。酯(羧酸酯，carboxylate,carboxylicacidester，oxycarbonyl)：-c(＝o)or，其中r是酯取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。酯基團的實例包括,但不限于-c(＝o)och3、-c(＝o)och2ch3、-c(＝o)oc(ch3)3、和-c(＝o)oph。酰氧基(反向酯)：-oc(＝o)r，其中r是酰氧基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。酰氧基的實例包括，但不限于，-oc(＝o)ch3(乙酰氧基)、-oc(＝o)ch2ch3、-oc(＝o)c(ch3)3、-oc(＝o)ph、和-oc(＝o)ch2ph。氧羧酸酯(oxycarboyloxy)：-oc(＝o)or，其中r是酯取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。酯基團的實例包括，但不限于，-oc(＝o)och3、-oc(＝o)och2ch3、-oc(＝o)oc(ch3)3、和-oc(＝o)oph。氨基：-nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，例如，氫、c1-7烷基(也稱為c1-7烷基氨基或二c1-7烷基氨基)、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選h或c1-7烷基，或者，在“環狀”氨基的情況下，r1和r2，連同它們附連到其上的氮原子一起，形成具有4至8個環原子的雜環。氨基可以是伯胺(-nh2)、仲胺(-nhr1)、或叔胺(-nhr1r2)，以及陽離子形式，可以是季胺(-+nr1r2r3)。氨基的實例包括，但不限于，-nh2、-nhch3、-nhc(ch3)2、-n(ch3)2、-n(ch2ch3)2、和-nhph。環狀氨基的實例包括，但不限于，氮雜環丙烷基(aziridino)、氮雜環丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉代、和硫代嗎啉代。酰氨基(氨基甲酰基，氨基甲酰，氨基羰基,，羧酰胺)：-c(＝o)nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的。酰氨基的實例包括，但不限于，-c(＝o)nh2、-c(＝o)nhch3、-c(＝o)n(ch3)2、-c(＝o)nhch2ch3、和-c(＝o)n(ch2ch3)2，以及酰氨基，其中r1和r2，連同它們附連到其上的氮原子一起，形成雜環結構，如在，例如，哌啶基羰基、嗎啉代羰基、硫代嗎啉代羰基、和哌嗪基羰基中。硫代酰氨基(硫代氨基甲酰)：-c(＝s)nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的。酰氨基的實例包括，但不限于，-c(＝s)nh2、-c(＝s)nhch3、-c(＝s)n(ch3)2、和-c(＝s)nhch2ch3。酰基酰氨基(酰氨基)：-nr1c(＝o)r2，其中r1是酰胺取代基，例如，氫、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優越氫或c1-7烷基，并且r2是酰基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選氫或c1-7烷基。酰胺基團的實例包括，但不限于，-nhc(＝o)ch3、-nhc(＝o)ch2ch3、和-nhc(＝o)ph。r1和r2可以一起形成環狀結構，如在，例如，琥珀酰亞胺基、馬來酰亞胺基、和鄰苯二甲酰亞胺基中：氨基羰氧基：-oc(＝o)nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的。氨基羰氧基的實例包括，但不限于，-oc(＝o)nh2、-oc(＝o)nhme、-oc(＝o)nme2、和-oc(＝o)net2。脲基：-n(r1)conr2r3，其中r2和r3獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的，并且r1是脲基取代基，例如，氫、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選氫或c1-7烷基。脲基的實例包括，但不限于，-nhconh2、-nhconhme、-nhconhet、-nhconme2、-nhconet2、-nmeconh2、-nmeconhme、-nmeconhet、-nmeconme2、和-nmeconet2。胍基：-nh-c(＝nh)nh2。四唑基：具有4個氮原子和1個碳原子的五元芳環，亞氨基：＝nr，其中r是亞氨基取代基，例如，氫、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選h或c1-7烷基。亞氨基的實例包括，但不限于，＝nh、＝nme、和＝net。脒(脒基)：-c(＝nr)nr2，其中每個r是脒取代基，例如，氫、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選h或c1-7烷基。脒基團的實例包括，但不限于，-c(＝nh)nh2、-c(＝nh)nme2、和-c(＝nme)nme2。硝基：-no2。亞硝基：-no。疊氮基：-n3。氰基(腈，nitrile，carbonitrile)：-cn。異氰基：-nc。氰氧基：-ocn。異氰氧基(isocyanato)：-nco。氰硫基(thiocyano)(氰硫基，thiocyanato)：-scn。異氰硫基(isothiocyano)(異氰硫基，isothiocyanato)：-ncs。巰基(sulfhydryl)(巰基，thiol，mercapto)：-sh。硫醚(硫化物)：-sr，其中r是硫醚取代基，例如，c1-7烷基(也稱為c1-7烷硫基)、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。c1-7烷硫基的實例包括，但不限于，-sch3和-sch2ch3。二硫化物：-ss-r，其中r是二硫化物取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基(在本文中也稱為c1-7烷基二硫化物)。c1-7烷基二硫化物基團的實例包括，但不限于，-ssch3和-ssch2ch3。锍化物(亞硫酰基，亞砜)：-s(＝o)r，其中r是锍化物取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。锍化物基團的實例包括，但不限于，-s(＝o)ch3和-s(＝o)ch2ch3。砜(磺酰基)：-s(＝o)2r，其中r是砜取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基，包括，例如，氟化或全氟化c1-7烷基。砜基團的實例包括，但不限于，-s(＝o)2ch3(甲磺酰基，methanesulfoyl,mesyl)、-s(＝o)2cf3(三氟甲磺酰基，triflyl)、-s(＝o)2ch2ch3(乙磺酰基，esyl)、-s(＝o)2c4f9(九氟甲磺酰基，nonaflyl)、-s(＝o)2ch2cf3(三氟乙磺酰基，tresyl)、-s(＝o)2ch2ch2nh2(牛磺酰基)、-s(＝o)2ph(苯磺酰基，phenylsulfonyl,besyl)、4-甲基苯磺酰基(甲苯磺酰基)、4-氯苯磺酰基(氯苯磺酰基，closyl)、4-溴苯磺酰基(溴苯磺酰基，brosyl)、4-硝基苯基(硝基苯磺酰基，nosyl)、2-萘磺酸酯(萘磺酰基，napsyl)、和5-二甲基氨基-萘-1-基磺酸酯(丹磺酰基)。亞磺酸(亞磺基)：-s(＝o)oh、-so2h。磺酸(磺基)：-s(＝o)2oh、-so3h。亞磺酸酯(sulfinate)(亞磺酸酯，sulfinicacidester)：-s(＝o)or；其中r是亞磺酸酯取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。亞磺酸酯基團的實例包括，但不限于，-s(＝o)och3(甲氧基亞硫酰基；亞磺酸甲酯)和-s(＝o)och2ch3(乙氧基亞硫酰基；亞磺酸乙酯)。磺酸酯(sulfonate)(磺酸酯，sulfonicacidester)：-s(＝o)2or，其中r是磺酸酯取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。磺酸酯基團的實例包括，但不限于，-s(＝o)2och3(甲氧基磺酰基；磺酸甲酯)和-s(＝o)2och2ch3(乙氧基磺酰基；磺酸乙酯)。亞磺酰氧基：-os(＝o)r，其中r是亞磺酰氧基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。亞磺酰氧基的實例包括，但不限于，-os(＝o)ch3和-os(＝o)ch2ch3。磺酰氧基：-os(＝o)2r，其中r是磺酰氧基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。磺酰氧基的實例包括，但不限于，-os(＝o)2ch3(磺酸甲酯)和-os(＝o)2ch2ch3(磺酸乙酯)。硫酸酯：-os(＝o)2or；其中r是硫酸酯取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。硫酸酯基團的實例包括，但不限于，-os(＝o)2och3和-so(＝o)2och2ch3。氨磺酰基(sulfamyl)(氨磺酰基(sulfamoyl)；亞磺酸酰胺；亞磺酰胺)：-s(＝o)nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的。氨磺酰基的實例包括，但不限于，-s(＝o)nh2、-s(＝o)nh(ch3)、-s(＝o)n(ch3)2、-s(＝o)nh(ch2ch3)、-s(＝o)n(ch2ch3)2、和-s(＝o)nhph。磺酰胺(亞磺氨基；磺酸酰胺；磺酰胺)：-s(＝o)2nr1r2，其中r1和r2獨立地是氨基取代基，如針對氨基所定義的。磺酰胺基的實例包括，但不限于，-s(＝o)2nh2、-s(＝o)2nh(ch3)、-s(＝o)2n(ch3)2、-s(＝o)2nh(ch2ch3)、-s(＝o)2n(ch2ch3)2、和-s(＝o)2nhph。磺氨基：-nr1s(＝o)2oh，其中r1是氨基取代基，如針對氨基所定義的。磺氨基的實例包括，但不限于，-nhs(＝o)2oh和-n(ch3)s(＝o)2oh。磺酰氨基：-nr1s(＝o)2r，其中r1是氨基取代基，如針對氨基所定義的，并且r是磺酰氨基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。磺酰氨基的實例包括，但不限于，-nhs(＝o)2ch3和-n(ch3)s(＝o)2c6h5。亞磺氨基：-nr1s(＝o)r，其中r1是氨基取代基，如針對氨基所定義的，并且r是亞磺氨基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基。亞磺氨基的實例包括，但不限于，-nhs(＝o)ch3和-n(ch3)s(＝o)c6h5。膦基(膦)：-pr2，其中r是膦基取代基，例如，-h、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。膦基的實例包括，但不限于，-ph2、-p(ch3)2、-p(ch2ch3)2、-p(t-bu)2、和-p(ph)2。磷酸基：-p(＝o)2。磷酰基(氧化膦)：-p(＝o)r2，其中r是磷酰基取代基，例如，c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選c1-7烷基或c5-20芳基。磷酰基的實例包括，但不限于，-p(＝o)(ch3)2、-p(＝o)(ch2ch3)2、-p(＝o)(t-bu)2、和-p(＝o)(ph)2。膦酸(膦酰基)：-p(＝o)(oh)2。膦酸酯(膦酰酯)：-p(＝o)(or)2，其中r是膦酸酯取代基，例如，-h、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。膦酸酯基團的實例包括，但不限于，-p(＝o)(och3)2、-p(＝o)(och2ch3)2、-p(＝o)(o-t-bu)2、和-p(＝o)(oph)2。磷酸(膦酰氧基)：-op(＝o)(oh)2。磷酸酯(膦酰氧基酯)：-op(＝o)(or)2，其中r是磷酸酯取代基，例如，-h、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。磷酸酯基團的實例包括，但不限于，-op(＝o)(och3)2、-op(＝o)(och2ch3)2、-op(＝o)(o-t-bu)2、和-op(＝o)(oph)2。亞磷酸：-op(oh)2。亞磷酸酯：-op(or)2，其中r是亞磷酸酯取代基，例如，-h、c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。亞磷酸酯基團的實例包括，但不限于，-op(och3)2、-op(och2ch3)2、-op(o-t-bu)2、和-op(oph)2。亞磷酰胺：-op(or1)-nr22，其中r1和r2是亞磷酰胺取代基，例如，-h、(可選地取代的)c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。亞磷酰胺基團的實例包括，但不限于，-op(och2ch3)-n(ch3)2、-op(och2ch3)-n(i-pr)2、和-op(och2ch2cn)-n(i-pr)2。氨基磷酸酯：-op(＝o)(or1)-nr22，其中r1和r2是氨基磷酸酯取代基，例如，-h、(可選地取代的)c1-7烷基、c3-20雜環基、或c5-20芳基，優選-h、c1-7烷基、或c5-20芳基。氨基磷酸酯基團的實例包括，但不限于，-op(＝o)(och2ch3)-n(ch3)2、-op(＝o)(och2ch3)-n(i-pr)2、和-op(＝o)(och2ch2cn)-n(i-pr)2。亞烷基c3-12亞烷基：如在本文中使用的，術語“c3-12亞烷基”是指通過從具有3至12個碳原子(除非另有說明)的碳氫化合物的相同碳原子、或從兩個不同碳原子的每一個上去除兩個氫原子而獲得的雙配位基部分，它可以是脂肪族或脂環族的，并且它可以是飽和、部分不飽和、或完全不飽和的。因此，術語“亞烷基”包括下面討論的子類：亞鏈烯基、亞炔基、環亞烷基等。線性飽和的c3-12亞烷基的實例包括，但不限于，-(ch2)n-，其中n是3至12的整數，例如，-ch2ch2ch2-(亞丙基)、-ch2ch2ch2ch2-(亞丁基)、-ch2ch2ch2ch2ch2-(亞戊基)和-ch2ch2ch2ch2ch2ch2ch2-(亞庚基)。支鏈飽和的c3-12亞烷基的實例包括，但不限于，-ch(ch3)ch2-、-ch(ch3)ch2ch2-、-ch(ch3)ch2ch2ch2-、-ch2ch(ch3)ch2-、-ch2ch(ch3)ch2ch2-、-ch(ch2ch3)-、-ch(ch2ch3)ch2-、和-ch2ch(ch2ch3)ch2-。線性部分不飽和的c3-12亞烷基(c3-12亞鏈烯基、和亞炔基)的實例包括，但不限于，-ch＝ch-ch2-、-ch2-ch＝ch2-、-ch＝ch-ch2-ch2-、-ch＝ch-ch2-ch2-ch2-、-ch＝ch-ch＝ch-、-ch＝ch-ch＝ch-ch2-、-ch＝ch-ch＝ch-ch2-ch2-、-ch＝ch-ch2-ch＝ch-、-ch＝ch-ch2-ch2-ch＝ch-、和-ch2-c≡c-ch2-。支鏈的部分不飽和的c3-12亞烷基(c3-12亞鏈烯基和亞炔基)的實例包括，但不限于，-c(ch3)＝ch-、-c(ch3)＝ch-ch2-、-ch＝ch-ch(ch3)-和-c≡c-ch(ch3)-。脂環族的飽和c3-12亞烷基(c3-12環亞烷基)的實例包括，但不限于，亞環戊基(例如，環戊-1,3-亞基)、和亞環己基(例如，環己-1,4-亞基)。脂環族的部分不飽和的c3-12亞烷基(c3-12環亞烷基)的實例包括，但不限于，亞環戊烯基(例如，4-環戊烯-1,3-亞基)、亞環己烯基(例如，2-環己烯-1,4-亞基；3-環己烯-1,2-亞基；2,5-環己二烯-1,4-亞基)。氧保護基團：術語“氧保護基團”是指掩蔽羥基的部分，并且這些是本領域熟知的。大量適宜的基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999的第23至200頁，通過引用將其結合在此。特別感興趣的類型包括甲硅烷基醚(例如，tms、tbdms)、取代的甲醚(例如，thp)和酯(例如乙酸酯)。氨基甲酸酯氮保護基團：術語“氨基甲酸酯氮保護基團”是指掩蔽亞胺鍵中的氮的部分，并且這些是本領域眾所周知的。這些基團具有以下結構：其中r’10是如上文所定義的r。大量適宜的基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999的第503至549頁，通過引用將其結合在此。半縮醛胺氮保護基團：術語“半縮醛胺氮保護基團”是指具有以下結構的基團：其中r’10是如上文所定義的r。大量適宜的基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999的第633至647頁作為酰胺保護基團，通過引用將其結合在此。本發明的詳細說明本發明提供了包含通過接頭單元連接到配體單元上的pbd二聚體的結合物。在一種實施方式中，接頭單元包括延伸物單元(a)、特異性單元(l1)、和間隔物單元(l2)。接頭單元一端連接到配體單元上而另一端連接到pbd二聚體化合物上。一方面，在下面式ia中顯示了這種結合物：l-(a1a-l1s-l2y-d)p(ia)其中：l是配體單元；并且-a1a-l1s-l2y-是接頭單元(lu)，其中：-a1-是延伸物單元(延伸單元)，a是1或2，l1–是特異性單元，s是范圍從1至12的整數，-l2-是間隔物單元(間隔單元)，y是0、1或2；-d是pbd二聚體；并且p是1至20。載藥量由p表示(藥物分子的數目/配體單元(例如，抗體))。載藥量可以范圍從1至20個藥物單元(d)/配體單元(例如，ab或mab)。對于組合物，p表示在組合物中結合物的平均載藥量，并且p范圍從1至20。在一些實施方式中，p是約1至約8個藥物單元/配體單元。在一些實施方式中，p為1。在一些實施方式中，p為2。在一些實施方式中，p為約2至約8個藥物單元/配體單元。在一些實施方式中，p為約2至約6、2至約5、或2至約4個藥物單元/配體單元。在一些實施方式中，p為約2、約4、約6或約8個藥物單元/配體單元。可以通過常規手段如質譜法、elisa測定法、和hplc，來表征在來自結合反應的制備中藥物單元的平均數/配體單元。還可以確定就p而言的結合物的定量分布。在一些情況下，可以通過多種手段如反相hplc或電泳，來實現從具有其他載藥量的結合物中分離、純化、以及表征均勻的結合物，其中p為某一數值。在另一方面，在下面式ib中顯示了這種結合物：還表示為：l-(a1a-l2y(-l1s)-d)p(ib)其中：l是配體單元；并且-a1a-l1s(l2y)-是接頭單元(lu)，其中：-a1-是連接到延伸物單元(l2)上的延伸物單元，a是1或2，l1-是連接到延伸物單元(l2)上的特異性單元，s是范圍從0至12的整數，-l2-是間隔物單元，y是0、1或2；-d是pbd二聚體；并且p是1至20。優選項以下優選項可以用于如上所述的本發明的所有方面，或可以涉及單個方面。這些優選項能夠以任何組合方式結合在一起。在一種實施方式中，結合物具有下式：l-(a1a-l1s-l2y-d)p其中l、a1、a、l1、s、l2、d和p如上所述。在一種實施方式中，配體單元(l)是特異性地結合到靶細胞表面上的靶分子上的細胞結合劑(cba)。一個示例性分子式顯示如下：其中星號表示與藥物單元(d)的附著點，cba是細胞結合劑，l1是特異性單元，a1是將l1連接到細胞結合劑上的延伸物單元，l2是間隔物單元，它是共價鍵、自切除基團(self-immolativegroup)或連同-oc(＝o)-一起形成自切除基團，并且l2是可選的。在另一種實施方式中，配體單元(l)是特異性地結合到靶細胞表面上的靶分子上的細胞結合劑(cba)。一個示例性分子式顯示如下：cba–a1a–l1s–l2y–*其中，星號表示與藥物單元(d)的附著點，cba是細胞結合劑，l1是特異性單元，a1是將l1連接到細胞結合劑上的延伸物單元，l2是間隔物單元，它是共價鍵或自切除基團，并且a是1或2，s是0、1或2，并且y是0或1或2。在上述實施方式中，l1可以是可切割的特異性單元，并且可以稱作，當一種或多種自切除基團存在時，當被切割時，激活一個自切除基團(或多個自切除基團)l2的“觸發物”。當特異性單元l1被切割、或位于l1與l2之間的鍵(即，共價鍵)被切割時，自切除基團釋放藥物單元(d)。在另一種實施方式中，配體單元(l)是特異性地結合到靶細胞表面上的靶分子上的細胞結合劑(cba)。一個示例性分子式顯示如下：其中星號表示與藥物(d)的附著點，cba是細胞結合劑，l1是連接到l2上的特異性單元，a1是將l2連接到細胞結合劑上的延伸物單元，l2是自切除基團，并且是1或2，s是1或2，并且y是1或2。在本文討論的多個實施方式中，l1和l2的特性可以有很大的不同。這些基團是基于它們的特性選擇的，它們可以部分地通過結合物遞送到其上的位點處的條件來指示。當特異性單元l1可切割時，選擇l1的結構和/或序列，從而通過存在于靶位點(例如，靶細胞)的酶的作用將其切割。還可以使用通過改變ph(例如，酸或堿可分解的)、溫度或當照射(例如光可分解的)時可以切割的l1單元。在還原或氧化條件下可切割的l1單元還可以應用于結合物。在一些實施方式中，l1可以包含一個氨基酸或氨基酸的連續序列。氨基酸序列可以是酶的靶向底物。在一種實施方式中，通過酶的作用可以切割l1。在一種實施方式中，酶是酯酶或肽酶。例如，可以通過溶酶體蛋白酶，如組織蛋白酶，來切割l1。在一種實施方式中，存在l2并且連同-c(＝o)o-一起形成一個或多個自切除基團。在一些實施方式中，-c(＝o)o-也是自切除基團。在一種實施方式中，當通過酶的作用可以切割l1并且存在l2時，酶切割位于l1與l2之間的鍵，由此所述一個或多個自切除基團釋放藥物單元。l1和l2，當存在時，可以通過選自下面的鍵來連接：-c(＝o)nh-，-c(＝o)o-，-nhc(＝o)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-nhc(＝o)o-，-oc(＝o)nh-，-nhc(＝o)nh，以及-o-(糖苷鍵)。連接到l2上的l1的氨基可以是氨基酸的n端或可以來自氨基酸側鏈的氨基，例如賴氨酸氨基酸側鏈。連接到l2上的l1的羧基可以是氨基酸的c端或可以來自氨基酸側鏈的羧基，例如，谷氨酸氨基酸側鏈。連接到l2上的l1的羥基可以來自氨基酸側鏈的羥基，例如絲氨酸氨基酸側鏈。在一種實施方式中，-c(＝o)o-和l2一起形成以下基團：其中星號表示與藥物單元的附著點，波形線表示與l1的附著點，y是-n(h)-、-o-、-c(＝o)n(h)-或-c(＝o)o-，并且n是0至3。亞苯基環被如本文所述的一個、兩個或三個取代基可選地取代。在一種實施方式中，y是nh。在一種實施方式中，n是0或1。優選地，n是0。當y是nh并且n是0時，自切除基團可以稱作對氨基芐基羰基接頭(pabc)。當接頭中的遠側位點被激活時(沿著下面所示路線進行(對于n＝0))，自切除基團將允許釋放藥物單元(即，非對稱pbd)：其中星號表示與藥物的附著，l*是接頭剩余部分的激活形式，并且未示出釋放的藥物單元。這些基團具有使激活位點與藥物分開的優點。在另一種實施方式中，-c(＝o)o-和l2一起形成選自下面的基團：其中星號、波形線、y、和n如上定義。每個亞苯基環被如本文所述的一個、兩個或三個取代基可選地取代。在一種實施方式中，具有y取代基的亞苯基環是可選地取代的并且不具有y取代基的亞苯基環是未取代的。在另一種實施方式中，-c(＝o)o-和l2一起形成選自下面的基團：其中星號、波形線、y、和n如上定義，e是o、s或nr，d是n、ch、或cr，并且f是n、ch、或cr。在一種實施方式中，d是n。在一種實施方式中，d是ch。在一種實施方式中，e是o或s。在一種實施方式中，f是ch。在一種優選實施方式中，位于l1與l2之間的共價鍵是組織蛋白酶可分解(例如，可切割)的鍵。在一種實施方式中，l1包含二肽。在二肽中的氨基酸可以是天然氨基酸和非天然氨基酸的任何組合。在一些實施方式中，二肽包含天然氨基酸。當接頭是組織蛋白酶可分解的接頭時，二肽是組織蛋白酶介導切割的作用位點。因而二肽是組織蛋白酶的識別位點。在一種實施方式中，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-選自：-phe-lys-，-val-ala-，-val-lys-，-ala-lys-，-val-cit-，-phe-cit-，-leu-cit-，-ile-cit-，-phe-arg-，以及-trp-cit-；其中cit是瓜氨酸。在這樣的二肽中，-nh-是x1的氨基，并且co是x2的羰基。優選地，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-選自：-phe-lys-，-val-ala-，-val-lys-，-ala-lys-，以及-val-cit-。最優選地，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-是-phe-lys-、val-cit或-val-ala-。其他感興趣的二肽組合包括：-gly-gly-，-pro-pro-，以及-val-glu-。可以使用其他二肽組合，包括由dubowchik等人描述的那些，通過引用將其結合在此。在一種實施方式中，當適當時，氨基酸側鏈被化學保護。側鏈保護基團可以是如下討論的基團。可以通過酶來切割被保護的氨基酸序列。例如，可以通過組織蛋白酶來切割包含boc側鏈保護的lys殘基的二肽序列。氨基酸側鏈的保護基團是本領域熟知的并且描述于novabiochemcatalog中。在protectivegroupsinorganicsynthesis,greeneandwuts中提出了另外的保護基團策略。下面針對具有反應性側鏈功能的那些氨基酸顯示了可能的側鏈保護基團：arg：z、mtr、tos；asn：trt、xan；asp：bzl、t-bu；cys：acm、bzl、bzl-ome、bzl-me、trt；glu：bzl、t-bu；gln：trt、xan；his：boc、dnp、tos、trt；lys：boc、z-cl、fmoc、z；ser：bzl、tbdms、tbdps；thr：bz；trp：boc；tyr：bzl、z、z-br。在一種實施方式中，將-x2-間接地連接到藥物單元上。在這樣的實施方式中，存在間隔物單元l2。在一種實施方式中，二肽與一個或多個自切除基團(間隔物單元)結合地使用。所述一個或多個自切除基團可以連接到-x2-上。當存在自切除基團時，將-x2-直接地連接到自切除基團上。在一種實施方式中，將-x2-連接到自切除基團的基團y上。優選地，將基團-x2-co-連接到y上，其中y是nh。將-x1-直接地連接到a1上。在一種實施方式中，將-x1-直接地連接到a1上。優選地，將基團nh-x1-(x1的氨基端)連接到a1上。a1可以包含官能團-co-，從而與-x1-一起形成酰胺鍵。在一種實施方式中，l1和l2連同-oc(＝o)-一起包含基團-x1-x2-pabc-。將pabc基團直接地連接到藥物單元上。在一個實施例中，自切除基團和二肽一起形成基團-phe-lys-pabc-，它顯示如下：其中星號表示與藥物單元的附著點，而波形線則表示與l1的剩余部分的附著點或與a1的附著點。優選地，波形線表示與a1的附著點。可替換地，自切除基團和二肽一起形成基團-val-ala-pabc-，它顯示如下：其中星號和波形線如上定義。在另一種實施方式中，l1和l2連同-oc(＝o)-一起表示：其中星號表示與藥物單元的附著點，波形線表示與a1的附著點，y是共價鍵或官能團，并且e是易于切割的基團，從而激活自切除基團。選擇e，使得基團易于切割(例如，通常光或通過酶的作用)。e可以是-no2或葡糖醛酸(例如，β-葡糖醛酸)。前者可以對硝基還原酶的作用敏感，而后者對β-葡糖醛酸酶的作用敏感。基團y可以是共價鍵。基團y可以是選自下面的官能團：-c(＝o)-，-nh-，-o-，-c(＝o)nh-，-c(＝o)o-，-nhc(＝o)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-nhc(＝o)o-，-oc(＝o)nh-，-nhc(＝o)nh-，-nhc(＝o)nh，-c(＝o)nhc(＝o)-，so2，以及-s-。基團y優選為-nh-、-ch2-、-o-、和-s-。在一些實施方式中，l1和l2連同-oc(＝o)-一起表示：其中星號表示與藥物單元的附著點，波形線表示與a的附著點，y是共價鍵或官能團，并且e是葡糖醛酸(例如，β-葡糖醛酸)。y優選為選自-nh-的官能團。在一些實施方式中，l1和l2一起表示：其中星號表示與的l2的剩余部分或藥物單元的附著點，波形線表示與a1的附著點，y是共價鍵或官能團，并且e是葡糖醛酸(例如，β-葡糖醛酸)。y優選地為選自–nh-、-ch2_、-o-、和-s-的官能團。在一些另外的實施方式中，y是如上所述的官能團，將官能團連接到氨基酸上，并且將氨基酸連接到延伸物單元a1上。在一些實施方式中，氨基酸是β-丙氨酸。在這樣的實施方式中，氨基酸被等效地認為是延伸物單元的一部分。通過延伸物單元間接地連接特異性單元l1和配體單元。可以通過選自下面的鍵來連接l1和a1：-c(＝o)nh-，-c(＝o)o-，-nhc(＝o)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-nhc(＝o)o-，-oc(＝o)nh-，以及-nhc(＝o)nh-。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示配體單元與的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團a1是：其中星號表示與l1的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，配體單元與a1之間的連接是通過配體單元的硫醇殘基和a1的馬來酰亞胺基團。在一種實施方式中，配體單元與a1之間的連接是：其中星號表示與a1、l1、l2或d的剩余部分的附著點，以及波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點。在此實施方式中，s原子典型地來自配體單元。在上述每種實施方式中，可以使用可替換的官能團來替代下面顯示的馬來酰亞胺類基團：其中波形線表示與配體單元的附著點(如前所述)，并且星號表示與a1基團的剩余部分、或者與l1、l2或d的鍵。在一種實施方式中，用以下基團來替代馬來酰亞胺類基團：其中波形線表示與配體單元的附著點，并且星號表示與a1基團的剩余部分、或者與l1、l2或d的鍵。在一種實施方式中，用可選地連同配體單元(例如，細胞結合劑)一起選自下面的基團來替代馬來酰亞胺類基團：-c(＝o)nh-，-c(＝o)o-，-nhc(＝o)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-nhc(＝o)o-，-oc(＝o)nh-，-nhc(＝o)nh-，-nhc(＝o)nh，-c(＝o)nhc(＝o)-，-s-，-s-s-，-ch2c(＝o)-，-c(＝o)ch2-，＝n-nh-，以及-nh-n＝。在一種實施方式中，用可選地連同配體單元一起選自下面的基團來替代馬來酰亞胺類基團：其中波形線表示與配體單元的附著點或者與a1基團的剩余部分的鍵，并且星號表示另一個與配體單元的附著點或者與a1基團的剩余部分的鍵。在wo2005/082023中描述了適合將l1連接到細胞結合劑上的其他基團。在一種實施方式中，存在延伸物單元a1，存在特異性單元l1并且不存在間隔物單元l2。因此，通過鍵直接地連接l1和藥物單元。等效地，在此實施方式中，l2是鍵。可以通過選自下面的鍵來連接l1和d：-c(＝o)nh-，-c(＝o)o-，-nhc(＝o)-，-oc(＝o)-，-oc(＝o)o-，-nhc(＝o)o-，-oc(＝o)nh-，以及-nhc(＝o)nh-。在一種實施方式中，優選地通過選自下面的鍵來連接l1和d：-c(＝o)nh-，以及-nhc(＝o)-。在一種實施方式中，l1包含二肽并且所述二肽的一端連接到d上。如上所述，二肽中的氨基酸可以是天然氨基酸和非天然氨基酸的任何組合。在一些實施方式中，二肽包含天然氨基酸。當接頭是組織蛋白酶可分解的接頭時，二肽是用于組織蛋白酶介導切割的作用位點。于是二肽是組織蛋白酶的識別位點。在一種實施方式中，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-選自：-phe-lys-，-val-ala-，-val-lys-，-ala-lys-，-val-cit-，-phe-cit-，-leu-cit-，-ile-cit-，-phe-arg-，以及-trp-cit-；其中cit是瓜氨酸。在這樣的二肽中，-nh-是x1的氨基，并且co是x2的羰基。優選地，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-選自：-phe-lys-，-val-ala-，-val-lys-，-ala-lys-，以及-val-cit-。最優選地，在二肽-nh-x1-x2-co-中的基團-x1-x2-是-phe-lys-或-val-ala-。其他感興趣的二肽組合包括：-gly-gly-，-pro-pro-，以及-val-glu-。可以使用其他二肽組合，包括上述的那些。在一種實施方式中，l1-d是：其中-nh-x1-x2-co是二肽，-nh-是藥物單元的一部分，星號表示與藥物單元的剩余部分的附著點，以及波形線表示與l1的剩余部分的附著點或與a1的附著點。優選地，波形線表示與a1的附著點。在一種實施方式中，二肽是纈氨酸-丙氨酸并且l1-d是：其中星號、-nh-和波形線如上定義。在一種實施方式中，二肽是苯丙氨酸-賴氨酸并且l1-d是：其中星號、-nh-和波形線如上定義。在一種實施方式中，二肽是纈氨酸-瓜氨酸。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至7，優選3至7，最優選3或7。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，s是配體單元的硫基，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，s是配體單元的硫基，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，s是配體單元的硫基，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與d的附著點，波形線表示與配體單元的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至7，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，基團l-a1-l1是：其中星號表示與l2或d的附著點，波形線表示與配體單元的剩余部分的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，最優選4或8。在一種實施方式中，延伸物單元是乙酰胺單元，具有下式：其中星號表示與延伸物單元l1或d的剩余部分的附著點，并且波形線表示與配體單元的附著點。在其他實施方式中，提供接頭-藥物化合物，用于結合到配體單元上。在一種實施方式中，接頭-藥物化合物設計成連接到細胞結合劑上。在一種實施方式中，藥物接頭化合物具有下式：其中星號表示與藥物單元的附著點，g1是用于形成與配體單元連接的延伸基團(a1)，l1是特異性單元，l2(間隔物單元)是共價鍵或連同-oc(＝o)-一起形成一個或多個自切除基團。在另一種實施方式中，藥物接頭化合物具有下式：g1-l1-l2-*其中星號表示與藥物單元的附著點，g1是用于形成與配體單元連接的延伸物單元(a1)，l1是特異性單元，l2(間隔物單元)是共價鍵或一個或多個自切除基團。l1和l2如上定義。在本文中提及連接到a1上可以認為是指連接到g1上。在一種實施方式中，當l1包含氨基酸時，可以保護所述氨基酸的側鏈。可以使用任何適當的保護基團。在一種實施方式中，可以用其他保護基團(當存在時)來去除化合物中的側鏈保護基團。在其他實施方式中，在所述分子中保護基團可以與其他保護基團正交(當存在時)。用于氨基酸側鏈的適當的保護基團包括在novabiochemcatalog2006/2007中說明的那些基團。在dubowchik等人文章中還討論了用于組織蛋白酶可分解的接頭的保護基團。在本發明的某些實施方式中，基團l1包括lys氨基酸殘基。可以用boc或alloc保護基團來保護這種氨基酸的側鏈。boc保護基團是最優選的。當與配體單元(例如，細胞結合劑)反應時，官能團g1形成連接基團。在一種實施方式中，官能團g1是或包含氨基、羧酸、羥基、巰基、或馬來酰亞胺基團，用來與配體單元上的適當基團反應。在一種優選實施方式中，g1包含馬來酰亞胺基團。在一種實施方式中，基團g1是烷基馬來酰亞胺基團。這個基團適合與細胞結合劑中存在的(例如抗體中存在的)巰基基團反應(尤其是半胱氨酸巰基基團)。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1、l2或d的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1、l2或d的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至2，優選4至8，以及最優選4或8。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，以及最優選4或8。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1、l2或d的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1、l2或d的附著點，并且n是0至6。在一種實施方式中，n是5。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至2，優選4至8，以及最優選4或8。在一種實施方式中，基團g1是：其中星號表示與l1的附著點，n是0或1，并且m是0至30。在一種優選實施方式中，n是1并且m是0至10，1至8，優選4至8，以及最優選4或8。在上述每種實施方式中，可以使用可替換的官能團來替代下面顯示的馬來酰亞胺基團：其中星號表示與g基團的剩余部分的鍵。在一種實施方式中，用以下基團來替代馬來酰亞胺類基團：其中星號表示與g基團的剩余部分的鍵。在一種實施方式中，用選自下面的基團來替代馬來酰亞胺基團：-c(＝o)oh，-oh，-nh2，-sh，-c(＝o)ch2x，其中x是cl、br或i，-cho，-nhnh2，-c≡ch，以及-n3(疊氮化物)。在一種實施方式中，存在l1，并且g1是-nh2、-nhme、-cooh、-oh或-sh。在一種實施方式中，當存在l1時，g1是-nh2或-nhme。任何一種基團可以是l1氨基酸序列的n端。在一種實施方式中，存在l1并且g1是-nh2，并且l1是氨基酸序列-x1-x2-(如上定義)。在一種實施方式中，存在l1并且g1是cooh。這個基團可以是l1氨基酸序列的c端。在一種實施方式中，存在l1并且g1是oh。在一種實施方式中，存在l1并且g1是sh。可以將基團g1從一種官能團轉化成另一種官能團。在一種實施方式中，存在l1并且g1是-nh2。可以將這個基團轉化成包含馬來酰亞胺基團的另一種基團g1。例如，基團-nh2可以與包含上面顯示的馬來酰亞胺的那些g1基團的酸或活化的酸(例如，n-琥珀酰亞胺形式)進行反應。因此，可以將基團g1轉化成更適合與配體單元反應的官能團。如上所述，在一種實施方式中，存在l1并且g1是-nh2、-nhme、-cooh、-oh或-sh。在其他實施方式中，以化學保護形式來提供這些基團。因此，化學保護形式是提供有官能團的接頭的前體。在一種實施方式中，g1是化學保護形式的-nh2。可以用氨基甲酸酯保護基團來保護所述基團。氨基甲酸酯保護基團可以選自由以下組成的組中：alloc、fmoc、boc、troc、teoc、cbz和pnz。優選地，當g1是-nh2時，用alloc或fmoc基團來保護它。在一種實施方式中，當g1是-nh2時，用fmoc基團來保護它。在一種實施方式中，保護基團與封端基團的氨基甲酸酯保護基團相同。在一種實施方式中，保護基團與封端基團的氨基甲酸酯保護基團不同。在此實施方式中，優選的是，在并不去除封端基團的氨基甲酸酯保護基團的條件下，可以去除保護基團。可以去除化學保護基團從而提供官能團來形成與配體單元的連接。可選地，然后可以將這種官能團轉化成另一種官能團(如上所述)。在一種實施方式中，活性基團是胺。這種胺優選地是肽的n端胺，并且可以是本發明的優選二肽的n端胺。可以使活性基團反應從而產生用來形成與配體單元的連接的官能團。在其他實施方式中，接頭單元是具有活性基團的接頭單元的前體。在此實施方式中，接頭單元包含活性基團，所述活性基團通過保護基團進行提供。可以去除保護基團從而提供具有活性基團的接頭單元。當活性基團是胺時，保護基團可以是胺保護基團，如在greenandwuts中描述的那些。在接頭單元中保護基團優選地與其他保護基團正交(當存在時)。在一種實施方式中，保護基團與封端基團正交。因此，可以去除活性基團保護基團，同時保留封端基團。在其他實施方式中，在與用于去除封端基團的那些相同的條件下，可以去除保護基團和封端基團。在一種實施方式中，接頭單元是：其中星號表示與藥物單元的附著點，并且波形線表示與接頭單元的剩余部分的附著點、或者與g1的附著點(當適用時)。優選地，波形線表示與g1的附著點。在一種實施方式中，接頭單元是：其中星號和波形線如上定義。在wo2005/082023中描述了適合用于在l1與細胞結合劑之間形成連接的其他官能團。配體單元配體單元可以是任何種類，并且包括特異性地結合到靶分子上的蛋白質、多肽、肽以及非肽試劑。在一些實施方式中，配體單元可以是蛋白質、多肽或肽。在一些實施方式中，配體單元可以是環狀多肽。這些配體單元可以包括抗體或包含至少一個靶分子結合位點的抗體片段，淋巴因子，激素，生長因子，或可以特異性地結合到靶上的任何其他細胞結合分子或物質。配體單元的實例包括針對wo2007/085930中使用所描述的那些試劑，將其結合于本文中。在一些實施方式中，配體單元是結合到細胞上的胞外靶上的細胞結合劑。這樣的細胞結合劑可以是蛋白質、多肽、肽或非肽試劑。在一些實施方式中，細胞結合劑可以是蛋白質、多肽或肽。在一些實施方式中，細胞結合劑可以是環狀多肽。細胞結合劑還可以是抗體或抗體的抗原結合片段。因此，在一種實施方式中，本發明提供了抗體-藥物結合物(adc)。在一種實施方式中，抗體是單克隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體、或單鏈抗體。在一種實施方式中，抗體是具有生物活性的這些抗體之一的片段。這類片段的實例包括fab、fab'、f(ab')2和fv片段。抗體可以是雙特異抗體、域抗體(dab)或單鏈抗體。在一種實施方式中，抗體是單克隆抗體。用于本發明的抗體包括在wo2005/082023中描述的那些抗體，將其結合于本文中。特別優選的是針對腫瘤相關抗原的那些抗體。本領域已知的那些抗原的實例包括，但不限于，在wo2005/082023中提出的那些腫瘤相關抗原。參見，例如，第41-55頁。在一些實施方式中，結合物設計成通過它們的細胞表面抗原靶向腫瘤細胞。抗原可以是過表達或在異常時間或細胞類型表達的細胞表面抗原。優選地，靶抗原僅表達在增殖細胞(優選腫瘤細胞)上；然而，在實踐中，這很少被觀測到。其結果是，通常基于增生組織與健康組織之間的差異表達來選擇靶抗原。已經產生抗體用于靶向特定的腫瘤相關抗原，包括：cripto、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、糖蛋白nmb、canag、her2(erbb2/neu)、cd56(ncam)、cd70、cd79、cd138、psca、psma(前列腺特異性膜抗原)、bcma、e-選擇蛋白、ephb2、黑色素轉鐵蛋白(melanotransferin)、muc16和tmeff2。將配體單元連接到接頭單元上。在一種實施方式中，將配體單元連接到接頭單元的a上(當存在時)。在一種實施方式中，配體單元與接頭單元之間的連接是通過硫醚鍵。在一種實施方式中，配體單元與接頭單元之間的連接是通過二硫鍵。在一種實施方式中，配體單元與接頭單元之間的連接是通過酰胺鍵。在一種實施方式中，配體單元與接頭單元之間的連接是通過酯鍵。在一種實施方式中,在配體單元的半胱氨酸殘基的巰基基團與接頭單元的馬來酰亞胺基團之間形成配體單元與接頭之間的連接。配體單元的半胱氨酸殘基可以用于與接頭單元的官能團進行反應以形成連接。在其他實施方式中，例如當配體單元是抗體時，抗體的巰基基團可以參與鏈間二硫鍵。在與接頭單元的官能團進行反應之前，通過例如用dtt處理抗體，可以將這些鏈間鍵轉化成游離的巰基基團。在一些實施方式中，將半胱氨酸殘基引入到抗體的重或輕鏈中。在抗體重鏈或輕鏈中通過取代用于半胱氨酸插入的位置包括在公開的美國申請號2007-0092940和國際專利公開wo2008070593中描述的那些，將其結合于本文中。治療方法本發明的結合物可以用于治療方法中。還提供了一種治療方法，包括將治療有效量的式i的結合物給予需要治療的受試者。術語“治療有效量”是足以顯示對患者有利的量。這種益處可以是至少改善至少一種癥狀。給予的結合物的實際量、以及給予的速率和時間進程將取決于所治療的特性和嚴重性。治療處方，例如劑量的決定，是在全科醫生和其他醫生的責任范圍內。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.01至約10mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.01至約5mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.05至約5mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.1至約5mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.1至約4mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.05至約3mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.1至約3mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.1至約2mg/kg/劑量。在一些實施方式中，給予的結合物的量范圍從約0.01至約1mg/kg/劑量。結合物可以單獨地或與其他治療結合地，同時地或順序地給予，這取決于有待治療的病癥。治療和療法的實例包括，但不限于，化療(給予活性劑，包括，例如藥物；外科手術；以及放射治療)。根據本發明的藥物組合物、以及根據本發明的用途，可以包括，除了活性組分(即式i的結合物)之外，本領域技術人員熟知的藥學上可接受的賦形劑、載體、緩沖劑、穩定劑或其他物質。這類物質應是無毒的并且不應干擾活性組分的功效。載體或其他物質的確切特性將取決于給藥途徑，所述給藥途徑可以是口服，或通過注射，例如皮膚注射、皮下注射、或靜脈內注射。用于口服給藥的藥物組合物可以是片劑、膠囊劑、粉末或液體形式。片劑可以包含固體載體或佐劑。液體藥物組合物通常包含液體載體，如水、石油、動物油或植物油、礦物油或合成油。可以包括生理鹽水溶液、右旋糖或其他糖溶液或二醇類例如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。膠囊劑可以包含固體載體如明膠。對于靜脈內、皮膚或皮下注射、或在痛苦部位的注射，活性組分可以是胃腸道外可接受的水溶液的形式，它是無熱原的并且具有適當的ph值、等滲性和穩定性。本領域相關技術人員能夠使用例如，等滲載體(如氯化鈉注射液、ringer注射液、乳酸鹽林格注射液)來很好地制備適當的溶液。根據需要，可以包括防腐劑、穩定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其他添加劑。包括其他形式除非另有規定，在上述中包括的是這些取代基的熟知的離子形式、鹽形式、溶劑化物形式、以及保護形式。例如，提及羧酸(-cooh)還包括其陰離子(羧酸酯)形式(-coo-)、鹽或溶劑化物，以及常規的保護形式。類似地，提及氨基包括氨基的質子化形式(-n+hr1r2)、鹽或溶劑化物，例如，鹽酸鹽，以及氨基的常規保護形式。類似地，提及羥基還包括其陰離子形式(-o-)、鹽或溶劑化物，以及常規的保護形式。鹽可以方便地或令人希望地制備、純化、和/或處理活性化合物(結合物)相應的鹽，例如，藥學上可接受的鹽。在berge,etal.,j.pharm.sci.,66,1-19(1977)中討論了藥學上可接受的鹽的實例。例如，如果化合物是陰離子的，或具有可以成為陰離子的官能團(例如，-cooh可以成為-coo-)，那么可以與適當的陽離子形成鹽。適當的無機陽離子的實例包括，但不限于，堿金屬離子(如na+和k+)，堿土金屬陽離子(如ca2+和mg2+)，以及其他陽離子(如al+3)。適當的有機陽離子的實例包括，但不限于，銨離子(即nh4+)以及取代的銨離子(例如nh3r+、nh2r2+、nhr3+、nr4+)。一些適當的取代銨離子的實例是來自下面的那些：乙胺、二乙胺、二環己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、芐胺、苯基芐胺、膽堿、葡甲胺、以及氨丁三醇，以及氨基酸，如賴氨酸和精氨酸。常見的季銨離子的實例是n(ch3)4+。如果結合物是陽離子的、或具有可以成為陽離子的官能團(例如，-nh2可以成為-nh3+)，那么可以與適當的陰離子形成鹽。適當的無機陰離子的實例包括，但不限于，來自以下無機酸的那些：鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、亞硫酸、硝酸、亞硝酸、磷酸、和亞磷酸。適當的有機陰離子的實例包括，但不限于，來自以下有機酸的那些：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗壞血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟腦磺酸、肉桂酸、檸檬酸、依地酸、乙二磺酸、乙磺酸、富馬酸、葡庚糖酸、葡萄糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羥基馬來酸、羥基萘甲酸、羥乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、馬來酸、蘋果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕櫚酸、雙羥萘酸、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、對氨基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸、和戊酸。適當的聚合物有機陰離子的實例包括，但不限于，來自以下聚合物酸的那些：鞣酸、羧甲基纖維素。溶劑化物可以方便地或令人希望地制備、純化、和/或處理所述一種或多種結合物的相應的溶劑化物。術語“溶劑化物”在本文中以常規含義使用，是指溶質(例如，活性結合物、活性結合物的鹽)和溶劑的復合物。如果溶劑是水，溶劑化物可以方便地稱為水合物，例如，一水合物、二水合物、三水合物等。甲醇胺本發明包括結合物，其中橫過pbd部分的亞胺鍵添加溶劑，針對pbd單體說明如下，其中溶劑是水或醇(raoh，其中ra是c1-4烷基)：這些形式可以稱為pbd的甲醇胺和甲醇胺醚形式。這些等式的平衡取決于其中發現化合物的條件、以及所述部分本身的特性。例如，可以通過冰凍干燥法以固體形式分離這些特定化合物。異構體某些化合物能夠以一種或多種特定的幾何形式、光學形式、對映體形式、非對映體形式、差向異構體形式、異位異構體形式、立體異構體形式、互變異構體形式、構象形式、或異頭異構體形式存在，包括，但不限于，順-和反-(cis-andtrans-forms)形式；e-和z-形式；c-、t-、和r-形式；內-和外-形式；r-、s-、和內消旋形式；d-和l-形式；d-和l-形式；(+)型和(-)形式；酮-、烯醇-、和烯醇化物形式；順-和反-形式(syn-andanti-forms)；向斜-和背斜-形式；α-和β-形式；軸向和平伏形式；船-、椅-、扭曲-、信封-、和半椅形式；以及它們的組合，在下文中統稱為“異構體”(或“異構體形式”)。需要注意的是，除了下面針對互變異構形式所討論的，如在本文中使用的，從術語“異構體”中明確排除在外的是結構(或構造)異構體(即，其差別在于原子之間的連接而不僅僅在于原子空間位置的異構體)。例如，提及甲氧基(-och3)不應認為提及它的結構異構體(羥甲基，-ch2oh)。類似地，提及鄰-氯苯基不應認為提及它的結構異構體(間-氯苯基)。然而，提及一類結構可以很好地包括落在所述類別內的結構異構體形式(例如，c1-7烷基包括正丙基和異丙基；丁基包括正丁基、異丁基、仲丁基、和叔丁基；甲氧基苯基包括鄰-甲氧基苯基、間-甲氧基苯基、和對-甲氧基苯基)。上述排除并不涉及互變異構體形式，如在，例如，以下互變異構體對中：酮/烯醇(如下所示)、亞胺/烯胺、酰胺/亞氨基醇、脒/脒、亞硝基/肟、硫酮/烯硫醇、n-亞硝基/羥基偶氮、和硝基/異硝基中的例如，酮-、烯醇-、和烯醇化物形式。需要注意的是，明確地包括在術語“異構體”內的是具有一個或多個同位素取代的化合物。例如，h可以處于任何同位素形式，包括1h、2h(d)、和3h(t)；c可以處于任何同位素形式，包括12c、13c、和14c；o可以處于任何同位素形式，包括16o和18o；等等。除非另有規定，提及特定的化合物或結合物包括所有這些異構體形式，(全部地或部分地)包括其外消旋混合物以及其他混合物。用于制備(例如不對稱合成)和分離(例如，分級結晶和層析方式)這類異構體形式的方法是本領域熟知的或通過采用本文中教導的方法、或已知方法以已知方式容易獲得的。一般性合成路徑在以下參考文獻中廣泛地討論了pbd二聚體化合物的合成，通過引用將所述討論結合于本文中：a)wo00/12508(第14至30頁)；b)wo2005/023814(第3至10頁)；c)wo2004/043963(第28至29頁)；以及d)wo2005/085251(第30至39頁)。合成路徑可以由化合物式2的化合物合成本發明的結合物，其中r10和r11在它們結合到其上的氮原子與碳原子之間形成氮-碳雙鍵：其中r2、r6、r7、r9、r6’、r7’、r9’、r12、x、x’和r”是如針對式ii的化合物所定義的，protn是用于合成的氮保護基團并且proto是用于合成的保護的氧基團或氧代基團(通過使用標準方法來將亞胺鍵脫保護)。產生的化合物可以處于它的甲醇胺或甲醇胺醚形式，這取決于所使用的溶劑，。例如，如果protn是alloc并且proto是用于合成的氧保護基團，則使用鈀來進行脫保護以便去除n10保護基團，接著消除用于合成的氧保護基團。如果protn是troc并且proto是用于合成的氧保護基團，則使用cd/pb對進行脫保護從而產生式(i)的化合物。如果protn是sem、或類似基團，并且proto是氧代基團，則可以通過還原來去除氧代基團，這導致保護的甲醇胺中間體，然后可以對其進行處理以去除sem保護基團，接著消除水。可以通過，例如，四硼氫化鋰，來還原化合物式2的化合物，同時用于去除sem保護基團的適當方式是用硅膠處理。可以通過偶合包含r12的有機金屬衍生物(如有機硼衍生物)由化合物式3a的化合物合成化合物式2的化合物：其中r2、r6、r7、r9、r6’、r7’、r9’、x、x’和r”是如針對化合物式2的化合物所定義的。有機硼衍生物可以是硼酸鹽或硼酸。可以通過偶合包含r2的有機金屬衍生物(如有機硼衍生物)由化合物式3b的化合物合成化合物式2的化合物：其中r12、r6、r7、r9、r6’、r7’、r9’、x、x’和r”是如針對化合物式2的化合物所定義的。有機硼衍生物可以是硼酸鹽或硼酸。可以通過偶合約單個當量(例如0.9或1至1.1或1.2)的包含r2或r12的有機金屬衍生物(如有機硼衍生物)由式4的化合物合成化合物式3a和3b的化合物：其中r2、r6、r7、r9、r6’、r7’、r9’、x、x’和r”是如針對化合物式2的化合物所定義的。通常在鈀催化劑(例如pd(pph3)4、pd(ococh3)2、pdcl2、或pd2(dba)3)存在下進行上述偶合。可以在標準條件下進行偶合，或者還可以在微波條件下進行偶合。通常順序地進行兩個偶合步驟。可以在兩個步驟之間具有或不具有純化的情況下來進行它們。如果未進行純化，則可以在相同的反應容器中進行這兩個步驟。在第二偶合步驟之后通常需要純化。可以通過柱層析法或離子交換分離來從不希望的副產物中純化所述化合物。在wo00/12508(通過引用將其結合于本文中)中詳細描述了化合物式4的化合物的合成，其中proto是氧代基團并且protn是sem。具體地，參考第24頁上的方案7，其中上述化合物被指定為中間體p。在wo2004/043963中還描述了這種合成方法。在wo2005/085251中描述了化合物式4的化合物的合成，其中proto是用于合成的保護的氧基團，所述合成通過引用結合于本文中。可以通過添加適當的亞硫酸氫鹽或亞磺酸鹽，緊接著適當的純化步驟，由式i的化合物(其中r10和r11在它們結合到其上的氮原子與碳原子之間形成氮-碳雙鍵)合成式i的化合物(其中r10和r10’是h并且r11和r11’是sozm)。另外的方法描述于gb2053894，通過引用將其結合于本文中。用于合成的氮保護基團用于合成的氮保護基團是本領域熟知的。在本發明中，特別感興趣的保護基團是氨基甲酸酯氮保護基團以及半縮醛胺氮保護基團。氨基甲酸酯氮保護基團具有以下結構：其中r’10是如上定義的r。大量適當的基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999的第503至549頁上，通過引用將其結合于本文中。特別優選的保護基團包括troc、teoc、fmoc、boc、doc、hoc、tcboc、1-adoc和2-adoc。其他可能的基團是硝基芐氧基羰基(例如4-硝基芐氧基羰基)和2-(苯基磺酰基)乙氧基羰基。用鈀催化可以去除的那些保護基團不是優選的，例如，alloc。半縮醛胺氮保護基團具有以下結構：其中，r’10是如上定義的r。大量適當的基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999的第633至647頁上，作為酰胺保護基團，通過引用將其結合于本文中。本文公開的基團可以用于本發明中使用的化合物。這類基團包括，但不限于，sem、mom、mtm、mem、bom、硝基或甲氧基取代的bom、以及cl3cch2och2-。用于合成的保護的氧基團用于合成的保護的氧基團是本領域熟知的。大量適當的氧保護基團描述于greene,t.w.andwuts,g.m.,protectivegroupsinorganicsynthesis,3rdedition,johnwiley&sons,inc.,1999中的第23至200頁，通過引用將其結合于本文中。特別感興趣的類別包括甲硅烷基醚、甲醚、烷基醚、芐基醚、酯、乙酸酯、苯甲酸酯、碳酸酯、和磺酸酯。優選的氧保護基團包括乙酸酯、tbs和thp。進一步優選項下面優選項可以用于如上所述的本發明的所有方面，或可以涉及單個方面。這些優選項能夠以任何組合形式結合在一起。在一些實施方式中，r6’、r7’、r9’、r10’、r11’和y’優選地分別與r6、r7、r9、r10、r11和y相同。二聚體連接y和y’優選地是o。r”優選地是不具有取代基的c3-7亞烷基。更優選地，r”是c3、c5或c7亞烷基。r6至r9r9優選地是h。r6優選地選自h、oh、or、sh、nh2、硝基和鹵素，并且更優選地是h或鹵素，并且最優選地是h。r7優選地選自h、oh、or、sh、sr、nh2、nhr、nrr’、和鹵素，并且更優選地獨立選自h、oh和or，其中r優選地選自可選地取代的c1-7烷基、c3-10雜環基和c5-10芳基。r可以更優選地是可以或不可以被取代的c1-4烷基。感興趣的取代基是c5-6芳基(例如苯基)。在7位置處特別優選的取代基是ome和och2ph。這些優選項分別應用于r9’、r6’和r7’。r2r2中的a可以是苯基或c5-7雜芳基，例如呋喃基、苯硫基和吡啶基。在一些實施方式中，a優選地是苯基。在其他實施方式中，a優選地是苯硫基，例如，噻吩-2-基和噻吩-3-基。x是選自包括-o-、-s-、-c(o)o-、-c(o)-、-nh(c＝o)-和–n(rn)-的列表中的基團，其中rn選自由h和c1-4烷基組成的組中。x可以優選地是-o-、-s-、-c(o)o-、-nh(c＝o)-或–nh-，并且可以更優選地是-o-、-s-、或–nh-，并且最優選地是–nh-。q2-x可以在c5-7芳基的任何一個可供使用的環原子上，但是優選在并不鄰近化合物的剩余部分的鍵的環原子上，即，它優選相對于化合物的剩余部分的鍵的β或γ位。因而，當c5-7芳基(a)是苯基時，取代基(q2-x)優選地在間位或對位，并且更優選在對位。在一些實施方式中，q1是單鍵。在這些實施方式中，q2選自單鍵和-z-(ch2)n-，其中z選自單鍵、o、s和nh并且為1至3。在這些實施方式的一些中，q2是單鍵。在其他實施方式中，q2是-z-(ch2)n-。在這些實施方式中，z可以是o或s并且n可以是1或n可以是2。在這些實施方式的其他中，z可以是單鍵并且n可以是1。在其他實施方式中，q1是-ch＝ch-。在一些實施方式中，r2可以是-a-ch2-x和-a-x。在這些實施方式中，x可以是-o-、-s-、-c(o)o-、-c(o)-和-nh-。在特別優選的實施方式中，x可以是-nh-。r12r12可以是c5-7芳基。c5-7芳基可以是苯基或c5-7雜芳基，例如呋喃基、苯硫基和吡啶基。在一些實施方式中，r12優選為苯基。在其他實施方式中，r12優選為苯硫基，例如，噻吩-2-基和噻吩-3-基。r12可以是c8-10芳基，例如喹啉基或異喹啉基。可以通過任何可供使用的環位置，將喹啉基或異喹啉基結合到pbd核心上。例如，喹啉基可以是喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4-基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基和喹啉-8-基。其中喹啉-3-基和喹啉-6-基可以是優選的。異喹啉基可以是異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、異喹啉-4-基、異喹啉-5-基、異喹啉-6-基、異喹啉-7-基和異喹啉-8-基。其中異喹啉-3-基和異喹啉-6-基可以是優選的。r12可以具有任何數目的取代基。它優選具有1至3個取代基，其中1和2個取代基是更優選的，并且單取代的基團是最優選的。取代基可以處于任何位置。當r12是c5-7芳基時，單取代基優選在并不鄰近化合物的剩余部分的鍵的環原子上，即，它優選相對于化合物的剩余部分的鍵的β或γ位。因此，當c5-7芳基是苯基時，取代基優選在間位或對位，并且更優選在對位。當r12是c8-10芳基時，例如喹啉基或異喹啉基，它可以在喹啉或異喹啉環的任何位置具有任何數目的取代基。在一些實施方式中，它具有一個、兩個或三個取代基，并且這些取代基可以在近側環和遠側環上或在兩者上(如果多于一個取代基)。r12取代基如果r12上的取代基是鹵素，它優選為f或cl，更優選cl。如果r12上的取代基是醚，在一些實施方式中它可以是烷氧基，例如，c1-7烷氧基(例如甲氧基、乙氧基)，或者在一些實施方式中它可以是c5-7芳氧基(例如苯氧基、吡啶氧基、呋喃氧基)。烷氧基本身可以進一步被例如氨基(例如二甲基氨基)取代。如果r12上的取代基是c1-7烷基，它可以優選為c1-4烷基(例如甲基、乙基、丙基、丁基)。如果r12上的取代基是c3-7雜環基，在一些實施方式中它可以是c6含氮雜環基，例如嗎啉代、硫代嗎啉代、哌啶基、哌嗪基。通過氮原子，這些基團可以結合到pbd部分的剩余部分上。這些基團可以進一步被例如c1-4烷基取代。如果c6含氮雜環基是哌嗪基，所述進一步的取代基可以在第二氮環原子上。如果r12上的取代基是雙氧-c1-3亞烷基，它優選為雙氧-亞甲基或雙氧-亞乙基。r12的特別優選的取代基包括甲氧基、乙氧基、氟基、氯基、氰基、雙氧-亞甲基、甲基-哌嗪基、嗎啉代和甲基-苯硫基。r12的另一種特別優選的取代基是二甲基氨基丙氧基。r12基團特別優選的取代的r12基團包括，但不限于，4-甲氧基-苯基、3-甲氧基苯基、4-乙氧基-苯基、3-乙氧基-苯基、4-氟-苯基、4-氯-苯基、3,4-雙氧亞甲基-苯基、4-甲基苯硫基、4-氰基苯基、4-苯氧基苯基、喹啉-3-基和喹啉-6-基、異喹啉-3-基和異喹啉-6-基、2-噻吩基、2-呋喃基、甲氧基萘基、和萘基。另一種可能的取代的r12基團是4-硝基苯基。m和z優選的是，m和m’是單價藥學上可接受的陽離子，并且更優選為na+。z優選為3。實施例一般性實驗方法在adp220旋光儀(bellinghamstanleyltd.)上測量旋光性并且以g/100ml給出濃度(c)。使用數字熔點儀器(electrothermal)來測量熔點。在perkin-elmerspectrum1000ftirspectrometer上記錄紅外光譜。在300k下，分別在400和100mhz下，使用brukeravancenmr分光計，來獲得1h和13cnmr譜。相對于tms(δ＝0.0ppm)報告了化學位移，并且信號指示為s(單峰)、d(雙峰)、t(三重峰)、dt(雙三重峰)、dd(雙峰的雙峰)、ddd(雙峰的雙雙峰)或m(多重峰)，其中以hertz(hz)為單位給出偶合常數。使用連接到具有waters2996pda的waters2695hplc上的watersmicromasszq儀器來收集質譜(ms)數據。使用的watersmicromasszq參數是：毛細管(kv)，3.38；錐體(v)，35；提取器(v)，3.0；源溫度(℃)，100；去溶劑化溫度(℃)，200；錐體流量(l/h)，50；去溶劑化流量(l/h)，250。使用金屬涂覆的硼硅酸鹽玻璃尖端將樣品引入儀器中，以正w-模式在watersmicromassqtofglobal上記錄高分辨率質譜(hrms)。在硅膠鋁板(merck60，f254)上進行薄層色譜法(tlc)，并且快速色譜法使用硅膠(merck60，230-400目astm)。除了hobt(novabiochem)和固體支持試劑(argonaut)之外，所有其他化學品和溶劑均購自sigma-aldrich并且未進行進一步純化以所提供的形式使用。在適當干燥劑存在下，在干燥氮氣氛下，通過蒸餾來制備無水溶劑，并且儲存在分子篩或鈉線(sodiumwire)上。石油醚是指在40-60℃下沸騰的餾分。如在wo00/012508(化合物210)(通過引用將其結合于本文中)中所述合成化合物1b。一般lc/ms條件：使用水(a)(甲酸0.1％)和乙腈(b)(甲酸0.1％)的流動相來運行hplc(watersalliance2695)。梯度：初始組成5％b，持續1.0分鐘，然后5％b至95％b，3分鐘內。在95％b下將組成保持0.5分鐘，然后在0.3分鐘內回到5％b。總梯度運行時間等于5分鐘。通過進入質譜儀的零死容積t管來分開流量3.0ml/分鐘，400μl。波長檢測范圍：220至400nm。功能類型：二極管陣列(535次掃描)。柱：onyxmonolithicc1850x4.60mm。專門用于被troc和tbdm兩個基團保護的化合物的lc/ms條件：使用來自phenomenexcorp的onyxmonolitic反相柱(3μm顆粒，50x4.6mm)在watersalliance2695hplc系統上進行troc和tbdms保護的化合物的色譜分離。流動相a由5％乙腈–包含0.1％甲酸的95％水組成，并且流動相b由95％乙腈–包含0.1％甲酸的5％水組成。在5％b下1分鐘之后，將b的比例升高至95％b，再持續2.5分鐘，并且保持在95％b下再持續1分鐘，然后在10s內返回到95％a，并且再平衡再持續50秒，從而產生5.0分鐘的總運行時間。流量保持在3.0ml/分鐘。專門用于化合物33的lc/ms條件：在與waters2996光電二極管陣列檢測器和waterszq單四重質譜儀連接的waters2767樣品manager上運行lc。使用的柱是lunaphenyl-hexyl150x4.60mm，5μm，零件號00f-4257-e0(phenomenex)。采用的流動相是：流動相a：100％的hplc級水(0.05％三乙胺)，ph＝7流動相b：20％的hplc級水和80％的hplc級乙腈(0.05％三乙胺)，ph＝7使用的梯度是：以正離子模式和sir(選擇性離子監視器)進行質譜法并且監測的離子是m/z＝727.2。關鍵中間體的合成(a)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二[(5-甲氧基-2-硝基-1,4-亞苯基)羰基]]二[(2s,4r)-甲基-4-羥基吡咯烷-2-羧酸酯](2a)方法a：將催化量的dmf(2滴)加入處于無水thf(20ml)中的硝基酸1a(1.0g，2.15mmol)和草酰氯(0.95ml，1.36g，10.7mmol)的攪拌溶液。在室溫下攪拌反應混合物16小時，然后通過真空蒸發來去除溶劑。在-30℃(干冰/乙二醇)下在氮氣氛下，將得到的殘余物再溶解于無水thf(20ml)中，然后將酰基氯溶液逐滴加入處于thf(10ml)中的(2s,4r)-甲基-4-羥基吡咯烷-2-羧酸鹽酸鹽(859mg，4.73mmol)和tea(6.6ml，4.79g，47.3mmol)的攪拌混合物。可以將反應混合物升溫至室溫并且攪拌另外3小時，此后，tlc(95:5v/vchcl3/meoh)和lc/ms(2.45分鐘(es+)m/z(相對強度)721([m+h]+.，20))顯示產物形成。通過旋轉蒸發來去除過量的thf，然后將得到的殘余物溶解于dcm(50ml)中。用1nhcl(2x15ml)、飽和的nahco3(2x15ml)、h2o(20ml)、鹽水(30ml)洗滌有機層，然后干燥(mgso4)。過濾和蒸發溶劑產生粗產物，為深色油。通過快速色譜法(梯度洗脫：100％chcl3至96:4v/vchcl3/meoh)純化分離出純酰胺2a，為橙色玻璃(840mg，54％)。方法b：將草酰氯(9.75ml，14.2g，111mmol)加入處于無水dcm(200ml)中的硝基酸1a(17.3g，37.1mmol)和dmf(2ml)的攪拌懸浮液。在初始泡騰之后，反應懸浮液變成溶液，然后在室溫下攪拌混合物16小時。通過用meoh處理反應混合物的樣品證實轉化成酰基氯并且通過lc/ms觀測得到的二甲酯。通過真空蒸發來去除大部分溶劑，將得到的濃縮溶液再溶解于最小量的干燥dcm中并且用二乙醚研磨。通過過濾來收集得到的黃色沉淀物，用冷的二乙醚洗滌，然后在40℃的真空烘箱中干燥1小時。在-40℃(干冰/ch3cn)下，在25分鐘內，將固體酰基氯分批加入處于dcm(150ml)中的(2s,4r)-甲基-4-羥基吡咯烷-2-羧酸鹽酸鹽(15.2g，84.0mmol)和tea(25.7ml，18.7g，185mmol)的攪拌懸浮液中。立即地，如通過lc/ms(2.47分鐘(es+)m/z(相對強度)721([m+h]+.，100))所判斷的，反應完成。用dcm(150ml)稀釋混合物，并用1nhcl(300ml)、飽和的nahco3(300ml)、鹽水(300ml)洗滌，過濾(通過相分離器)，然后真空蒸發溶劑，從而給出純產物2a，為橙色固體(21.8g，82％)。分析數據：[α]22d＝-46.1°(c＝0.47,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)(旋轉異構體)δ7.63(s,2h),6.82(s,2h),4.79-4.72(m,2h),4.49-4.28(m,6h),3.96(s,6h),3.79(s,6h),3.46-3.38(m,2h),3.02(d,2h,j＝11.1hz),2.48-2.30(m,4h),2.29-2.04(m,4h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)(旋轉異構體)δ172.4,166.7,154.6,148.4,137.2,127.0,109.7,108.2,69.7,65.1,57.4,57.0,56.7,52.4,37.8,29.0；ir(atr,chcl3)3410(br),3010,2953,1741,1622,1577,1519,1455,1429,1334,1274,1211,1177,1072,1050,1008,871cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)721([m+h]+.,47),388(80)；hrms[m+h]+.理論值c31h36n4o16m/z721.2199，實測值(es+)m/z721.2227。(a)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二[(5-甲氧基-2-硝基-1,4-亞苯基)羰基]]二[(2s,4r)-甲基-4-羥基吡咯烷-2-羧酸酯](2b)按照方法b由1b制備產生純產物，為橙色泡沫(75.5g，82％)。分析數據：(es+)m/z(相對強度)749([m+h]+.,100)。(b)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(羥基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](3a)方法a：將處于dmf(40ml)中的10％pd/c(7.5g，10％w/w)的懸浮液加入處于dmf(360ml)中的硝基酯2a(75g，104mmol)的溶液中。在parr氫化器中氫化懸浮液持續8小時。在氫攝取停止之后，通過lc/ms(2.12分鐘(es+)m/z(相對強度)597([m+h]+.,100),(es-)m/z(相對強度)595([m+h]+.,100)來監測反應進展。通過過濾來去除固體pd/c并在40℃下在真空(低于10毫巴)下通過旋轉蒸發來濃縮濾液，從而提供包含痕量dmf和殘余炭的深色油。在水浴(旋轉蒸發器水浴)上在40℃etoh(500ml)中消化殘余物，通過c鹽來過濾得到的懸浮液，然后用乙醇(500ml)洗滌，從而產生清澈的濾液。將水合肼(10ml，321mmol)加入溶液中并且在回流下加熱反應混合物。在20分鐘之后，觀測到形成白色沉淀物并繼續回流另外30分鐘。使混合物冷卻至室溫并通過過濾來回收沉淀物，用二乙醚(2*1容積的沉淀物)洗滌并在真空干燥器中干燥，從而提供3a(50g，81％)。方法b：將處于meoh(300ml)中的硝基酯2a(6.80g，9.44mmol)的溶液加入處于三頸圓底燒瓶中的raneytm鎳(4個大刮勺末端的處于h2o中的～50％淤漿)和防暴沸顆粒中。在回流下加熱混合物，然后用處于meoh(50ml)中的水合肼(5.88ml，6.05g，188mmol)的溶液逐滴處理，這時觀測到劇烈的泡騰。當添加完成時(～30分鐘)，小心地添加另外的raneytm鎳，直到泡騰停止并且反應混合物的最初的黃色發生脫色。在回流下加熱混合物持續另外30分鐘，通過tlc(90:10v/vchcl3/meoh)和lc/ms(2.12分鐘(es+)m/z(相對強度)597([m+h]+，100))，此時認為反應完成。使反應混合物冷卻至約40℃，然后在沒有真空抽吸的情況下通過燒結漏斗進行過濾以去除過量鎳。通過真空蒸發來減小濾液的容積，這時形成無色沉淀物，通過過濾加以收集并在真空干燥器中干燥，從而提供3a(5.40g，96％)。分析數據:[α]27d＝+404°(c＝0.10,dmf)；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.2(s,2h,nh),7.26(s,2h),6.73(s,2h),5.11(d,2h,j＝3.98hz,oh),4.32-4.27(m,2h),4.19-4.07(m,6h),3.78(s,6h),3.62(dd,2h,j＝12.1,3.60hz),3.43(dd,2h,j＝12.0,4.72hz),2.67-2.57(m,2h),2.26(p,2h,j＝5.90hz),1.99-1.89(m,2h)；13cnmr(100mhz,dmso-d6)δ169.1,164.0,149.9,144.5,129.8,117.1,111.3,104.5,54.8,54.4,53.1,33.5,27.5；ir(atr,neat)3438,1680,1654,1610,1605,1516,1490,1434,1379,1263,1234,1216,1177,1156,1115,1089,1038,1018,952,870cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)619([m+na]+.,10),597([m+h]+.,52),445(12),326(11)；hrms[m+h]+理論值c29h32n4o10m/z597.2191，實測值(es+)m/z597.2205。(b)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(羥基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](3b)按照方法a由2b制備產生產物，為白色固體(22.1g，86％)。分析數據：ms(es-)m/z(相對強度)623.3([m-h]-.,100)；(c)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](4a)將tbscl(317mg，2.1mmol)和咪唑(342mg，5.03mmol)加入處于無水dmf(6ml)中的四內酰胺3a(250mg，0.42mmol)的混濁溶液中。在氮氣氛下攪拌混合物3小時，此后，如通過lc/ms(3.90分鐘(es+)m/z(相對強度)825([m+h]+.，100))所判斷的，認為反應完成。將反應混合物倒在冰上(～25ml)并在攪拌下升溫至室溫。通過真空過濾來收集得到的白色沉淀物，用h2o、二乙醚洗滌，然后在真空干燥器中干燥，從而提供純4a(252mg，73％)。分析數據：[α]23d＝+234°(c＝0.41,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.65(s,2h,nh),7.44(s,2h),6.54(s,2h),4.50(p,2h,j＝5.38hz),4.21-4.10(m,6h),3.87(s,6h),3.73-3.63(m,4h),2.85-2.79(m,2h),2.36-2.29(m,2h),2.07-1.99(m,2h),0.86(s,18h),0.08(s,12h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.4,165.7,151.4,146.6,129.7,118.9,112.8,105.3,69.2,65.4,56.3,55.7,54.2,35.2,28.7,25.7,18.0,-4.82和-4.86；ir(atr,chcl3)3235,2955,2926,2855,1698,1695,1603,1518,1491,1446,1380,1356,1251,1220,1120,1099,1033cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)825([m+h]+.,62),721(14),440(38)；hrms[m+h]+.理論值c41h60n4o10si2m/z825.3921，實測值(es+)m/z825.3948。(c)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](4b)按照上述方法由3b制備產生產物，為白色固體(27.3g，93％)。分析數據：ms(es+)m/z(相對強度)853.8([m+h]+.,100),(es-)m/z(相對強度)851.6([m-h]-.,100。(d)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](5a)在-30℃(干冰/乙二醇)下在氮氣氛下，將處于無水thf(10ml)中的正丁基鋰溶液(在己烷中4.17ml1.6m溶液，6.67mmol)逐滴加入處于無水thf(30ml)中的四內酰胺4a(2.20g，2.67mmol)的攪拌懸浮液中。在此溫度下攪拌反應混合物1小時(現為淡紅橙色)，此時，逐滴添加處于無水thf(10ml)中的semcl(1.18ml，1.11g，6.67mmol)溶液。在氮氣氛下，緩慢升溫反應混合物至室溫并攪拌16小時。如通過tlc(etoac)和lc/ms(4.77分鐘(es+)m/z(相對強度)1085([m+h]+.,100))所判斷的，認為反應完成。通過真空蒸發來去除thf，并且將得到的殘余物溶解于etoac(60ml)中，用h2o(20ml)、鹽水(20ml)洗滌，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物。通過快速色譜法(80:20v/v己烷/etoac)純化產生純n10-sem保護的四內酰胺5a，為油(2.37g，82％)。分析數據：[α]23d＝+163°(c＝0.41,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(s,2h),7.22(s,2h),5.47(d,2h,j＝9.98hz),4.68(d,2h,j＝9.99hz),4.57(p,2h,j＝5.77hz),4.29-4.19(m,6h),3.89(s,6h),3.79-3.51(m,8h),2.87-2.81(m,2h),2.41(p,2h,j＝5.81hz),2.03-1.90(m,2h),1.02-0.81(m,22h),0.09(s,12h),0.01(s,18h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ170.0,165.7,151.2,147.5,133.8,121.8,111.6,106.9,78.1,69.6,67.1,65.5,56.6,56.3,53.7,35.6,30.0,25.8,18.4,18.1,-1.24,-4.73；ir(atr,chcl3)2951,1685,1640,1606,1517,1462,1433,1360,1247,1127,1065cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)1113([m+na]+.,48),1085([m+h]+.,100),1009(5),813(6)；hrms[m+h]+.理論值c53h88n4o12si4m/z1085.5548，實測值(es+)m/z1085.5542。(d)1,1’-[[(戊烷1,5-二基)二氧]二(11as,2r)-2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](5b)按照上述方法由4b制備產生產物，為淺橙色泡沫(46.9g，100％)，無需進一步純化進行使用。分析數據：ms(es+)m/z(相對強度)1114([m+h]+.,90),(es-)m/z(相對強度)1158([m+2na]-.,100)。(e)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二(11as,2r)-2-羥基-7-甲氧基-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](6a)在室溫下，將tbaf溶液(在thf中5.24ml1.0m溶液，5.24mmol)加入處于thf(40ml)中的二甲硅烷基醚5a(2.58g，2.38mmol)的攪拌溶液中。在攪拌3.5小時之后，通過tlc(95:5v/vchcl3/meoh)分析反應混合物顯示反應完成。將反應混合物倒入飽和的nh4cl溶液(100ml)中并用etoac(3x30ml)萃取。用鹽水(60ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物。通過快速色譜法(梯度洗脫：100％chcl3至96:4v/vchcl3/meoh)純化產生純四內酰胺6a，為白色泡沫(1.78g，87％)。分析數據：[α]23d＝+202°(c＝0.34,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.28(s,2h),7.20(s,2h),5.44(d,2h,j＝10.0hz),4.72(d,2h,j＝10.0hz),4.61-4.58(m,2h),4.25(t,4h,j＝5.83hz),4.20-4.16(m,2h),3.91-3.85(m,8h),3.77-3.54(m,6h),3.01(brs,2h,oh),2.96-2.90(m,2h),2.38(p,2h,j＝5.77hz),2.11-2.05(m,2h),1.00-0.91(m,4h),0.00(s,18h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ169.5,165.9,151.3,147.4,133.7,121.5,111.6,106.9,79.4,69.3,67.2,65.2,56.5,56.2,54.1,35.2,29.1,18.4,-1.23；ir(atr,chcl3)2956,1684,1625,1604,1518,1464,1434,1361,1238,1058,1021cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)885([m+29]+.,70),857([m+h]+.,100),711(8),448(17)；hrms[m+h]+理論值c41h60n4o12si2m/z857.3819，實測值(es+)m/z857.3826。(e)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二(11as,2r)-2-羥基-7-甲氧基-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](6b)按照上述方法由5b制備產生產物，為白色泡沫(15.02g)。分析數據：ms(es+)m/z(相對強度)886([m+h]+.,10),739.6(100),(es-)m/z(相對強度)884([m-h]-.,40)。(f)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二[(11as)-11-磺基-7-甲氧基-2-氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11-二酮]](7a)方法a：在0℃下，將0.37m次氯酸鈉溶液(142.5ml，52.71mmol，2.4當量)逐滴加入處于dcm(115ml)中的二醇6a(18.8g，21.96mmol，1當量)、tempo(0.069g，0.44mmol，0.02當量)和0.5m溴化鉀溶液(8.9ml，4.4mmol，0.2當量)的劇烈攪拌的混合物中。通過調節添加速率來將溫度保持在0℃至5℃之間。在0℃至5℃下攪拌得到的黃色乳液1小時。tlc(etoac)和lc/ms[3.53分鐘(es+)m/z(相對強度)875([m+na]+.，50),(es-)m/z(相對強度)852([m–h]-.,100)]表明反應完成。過濾反應混合物，分離有機層，并用dcm(x2)回洗水層。用鹽水(x1)洗滌合并的有機部分，干燥(mgso4)并蒸發，從而產生黃色泡沫。通過快速柱層析法(梯度洗脫35/65v/v正己烷/etoac，30/70至25/75v/v正己烷/etoac)純化提供了雙酮7a，為白色泡沫(14.1g，75％)。使用次氯酸鈉溶液(試劑級，可供使用的氯為10-13％)。這被假定為10％(10gnaclo，在100g中)并計算為1.34m(在naclo中)。通過用水將它稀釋至0.37m，由其制備儲備溶液。這產生大約ph14的溶液。通過添加固體nahco3，將ph調節為9.3至9.4。然后使用等分部分的這種儲備溶液，來為反應提供2.4摩爾當量。當添加漂白溶液時，觀測到溫度的最初增加。控制添加速率，從而將溫度保持在0℃至5℃之間。反應混合物形成稠密的檸檬黃色乳狀液。氧化是在thomasfeyetal,j.org.chem.,2001,66,8154-8159中描述步驟的適應型。方法b：在0℃(冰/丙酮)下，將固體tcca(10.6g，45.6mmol)分批加入處于無水dcm(700ml)中的醇6a(18.05g，21.1mmol)和tempo(123mg，0.78mmol)的攪拌溶液中。在0℃下在氮氣氛下攪拌反應混合物15分鐘，此后，tlc(etoac)和lc/ms[3.57分鐘(es+)m/z(相對強度)875([m+na]+.，50)]顯示反應完成。通過c鹽來過濾反應混合物并用飽和的nahco3水溶液(400ml)、鹽水(400ml)洗滌濾液，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物。通過快速柱層析法(80:20v/vetoac/己烷)純化提供雙酮7a，為泡沫(11.7g，65％)。方法c：在-60℃(液氮/chcl3)下在氮氣氛下，在25分鐘內，將處于干燥dcm(18ml)中的無水dmso(0.72ml，0.84g，10.5mmol)溶液逐滴加入草酰氯的攪拌溶液(在dcm中2.63ml2.0m溶液，5.26mmol)中。在-55℃下攪拌20分鐘之后，在30分鐘內，將處于干燥dcm(36ml)中的基質6a(1.5g，1.75mmol)的淤漿逐滴加入反應混合物中。在-55℃下攪拌另外50分鐘之后，在20分鐘內，將處于干燥dcm(18ml)中的tea(3.42ml，2.49g，24.6mmol)溶液逐滴加入反應混合物中。使攪拌的反應混合物升溫至室溫(～1.5h)，然后用dcm(50ml)稀釋。用1nhcl(2x25ml)、h2o(30ml)、鹽水(30ml)洗滌有機溶液并干燥(mgso4)。真空過濾和蒸發溶劑產生粗產物，通過快速柱層析法(80:20v/vetoac/己烷)對其加以純化，從而提供雙酮7a，為泡沫(835mg，56％)。分析數據：[α]20d＝+291°(c＝0.26,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(s,2h),7.25(s,2h),5.50(d,2h,j＝10.1hz),4.75(d,2h,j＝10.1hz),4.60(dd,2h,j＝9.85,3.07hz),4.31-4.18(m,6h),3.89-3.84(m,8h),3.78-3.62(m,4h),3.55(dd,2h,j＝19.2,2.85hz),2.76(dd,2h,j＝19.2,9.90hz),2.42(p,2h,j＝5.77hz),0.98-0.91(m,4h),0.00(s,18h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ206.8,168.8,165.9,151.8,148.0,133.9,120.9,111.6,107.2,78.2,67.3,65.6,56.3,54.9,52.4,37.4,29.0,18.4,-1.24；ir(atr,chcl3)2957,1763,1685,1644,1606,1516,1457,1434,1360,1247,1209,1098,1066,1023cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)881([m+29]+.,38),853([m+h]+.,100),707(8),542(12)；hrms[m+h]+理論值c41h56n4o12si2m/z853.3506，實測值(es+)m/z853.3502。(f)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二[(11as)-11-磺基-7-甲氧基-2-氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)1,2,3,10,11,11a-六氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11-二酮]](7b)按照方法c由6b制備產生產物，為白色泡沫(10.5g，76％)。分析數據：ms(es+)m/z(相對強度)882([m+h]+.,30),735(100),(es-)m/z(相對強度)925([m+45]-.,100),880([m-h]-.,70)。(g)1,1’-[[(丙烷-1,3-二基)二氧]二(11as)-7-甲氧基-2-[[(三氟甲基)磺酰基]氧]-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,10,11,11a-四氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](8a)在-45℃(干冰/乙腈冷卻浴)下在氮氣氛下，將無水2,6-二甲基吡啶(5.15ml，4.74g，44.2mmol)一次性注入處于干燥dcm(180ml)中的雙酮7a(6.08g，7.1mmol)的劇烈攪拌的溶液中。快速逐滴注射從剛剛打開的安瓿中取出的無水三氟甲磺酸酐(tirflicanhydride)(7.2ml，12.08g，42.8mmol)，同時保持溫度為-40℃或以下。在-45℃下攪拌反應混合物1小時，此時，tlc(50/50v/v正己烷/etoac)顯示起始原料完全消耗。在劇烈搖動下用dcm(200ml)立即稀釋冷反應混合物，用水(1x100ml)、5％檸檬酸溶液(1x200ml)、飽和的nahco3(200ml)、鹽水(100ml)洗滌，并干燥(mgso4)。真空過濾和蒸發溶劑提供了粗產物，通過快速柱層析法(梯度洗脫：90:10v/v正己烷/etoac至70:30v/v正己烷/etoac)對其進行純化，從而提供雙烯醇三氟甲磺酸(bis-enoltriflate)8a，為黃色泡沫(5.5g，70％)。分析數據：[α]24d＝+271°(c＝0.18,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(s,2h),7.26(s,2h),7.14(t,2h,j＝1.97hz),5.51(d,2h,j＝10.1hz),4.76(d,2h,j＝10.1hz),4.62(dd,2h,j＝11.0,3.69hz),4.32-4.23(m,4h),3.94-3.90(m,8h),3.81-3.64(m,4h),3.16(ddd,2h,j＝16.3,11.0,2.36hz),2.43(p,2h,j＝5.85hz),1.23-0.92(m,4h),0.02(s,18h)；13cnmr(100mhz,cdcl3)δ167.1,162.7,151.9,148.0,138.4,133.6,120.2,118.8,111.9,107.4,78.6,67.5,65.6,56.7,56.3,30.8,29.0,18.4,-1.25；ir(atr,chcl3)2958,1690,1646,1605,1517,1456,1428,1360,1327,1207,1136,1096,1060,1022,938,913cm-1；ms(es+)m/z(相對強度)1144([m+28]+.,100),1117([m+h]+.,48),1041(40),578(8)；hrms[m+h]+.理論值c43h54n4o16si2s2f6m/z1117.2491，實測值(es+)m/z1117.2465。(g)1,1’-[[(戊烷-1,5-二基)二氧]二(11as)-7-甲氧基-2-[[(三氟甲基)磺酰基]氧]-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1,10,11,11a-四氫-5h-吡咯并[2,1-c][1,4]-苯并二氮雜卓-5,11-二酮](8b)按照上述方法由7b制備產生雙烯醇三氟甲磺酸，為淡黃色泡沫(6.14g，82％)。分析數據：(es+)m/z(相對強度)1146([m+h]+.,85)。實施例1(a)(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(三氟甲基磺酰基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(9)將固體pd(pph3)4(20.18mg，17.46mmol)加入處于甲苯(13ml)、etoh(6.5ml)和h2o(6.5ml)中的三氟甲磺酸鹽8a(975mg，0.87mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷(dioxaboralane)-2-基)苯胺(172mg，0.79mmol)和na2co3(138mg，3.98mol)的攪拌溶液中。在氮氣氛下攪拌深色溶液24小時，此后，通過tlc(etoac)和lc/ms分析顯示形成希望的單耦合產物以及存在未反應的起始原料。在減壓下通過旋轉蒸發來去除溶劑并且得到的殘余物分配在h2o(100ml)與etoac(100ml)之間，在最終分離層之后，再次用etoac(2x25ml)萃取水相。用h2o(50ml)、鹽水(60ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗suzuki產物。對粗suzuki產物進行快速色譜法(40％etoac/60％己烷→70％etoac，30％己烷)。在減壓下，通過旋轉蒸發去除過量的洗脫液，從而提供希望的產物9(399mg)，產率43％。1h–nmr:(cdcl3,400mhz)δ7.40(s,1h),7.33(s,1h),7.27(bs,3h),7.24(d,2h,j＝8.5hz),7.15(t,1h,j＝2.0hz),6.66(d,2h,j＝8.5hz),5.52(d,2h,j＝10.0hz),4.77(d,1h,j＝10.0hz),4.76(d,1h,j＝10.0hz),4.62(dd,1h,j＝3.7,11.0hz),4.58(dd,1h,j＝3.4,10.6hz),4.29(t,4h,j＝5.6hz),4.00-3.85(m,8h),3.80–3.60(m,4h),3.16(ddd,1h,j＝2.4,11.0,16.3hz),3.11(ddd,1h,j＝2.2,10.5,16.1hz),2.43(p,2h,j＝5.9hz),1.1-0.9(m,4h),0.2(s,18h)。13c-nmr:(cdcl3,100mhz)δ169.8,168.3,164.0,162.7,153.3,152.6,149.28,149.0,147.6,139.6,134.8,134.5,127.9(次甲基),127.5,125.1,123.21,121.5,120.5(次甲基),120.1(次甲基),116.4(次甲基),113.2(次甲基),108.7(次甲基),79.8(亞甲基),79.6(亞甲基),68.7(亞甲基),68.5(亞甲基),67.0(亞甲基),66.8(亞甲基),58.8(次甲基),58.0(次甲基),57.6(甲氧基),32.8(亞甲基),32.0(亞甲基),30.3(亞甲基),19.7(亞甲基),0.25(甲基)。(b)(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(10)在室溫下，將固體pd(pph3)4(10mg，8.69μmol)加入處于甲苯(3ml)、etoh(10ml)中的單三氟甲磺酸鹽9(230mg，0.22mmol)、以及處于h2o(1.5ml)中的4-甲氧基苯基硼酸(43mg，0.28mmol)、na2co3(37mg，0.35mmol)的攪拌溶液中。在氮氣氛下攪拌反應混合物20h，此時如通過lc/ms和tlc(etoac)所判斷的，認為反應完成。在真空下在減壓下通過旋轉蒸發去除溶劑并且得到的殘余物分配在etoac(75ml)與h2o(75ml)之間。用etoac(3x30ml)萃取水相并用h2o(30ml)、鹽水(40ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)，過濾并蒸發，從而提供粗產物。通過快速色譜法(60％己烷：40％etoac→80％etoac：20％己烷)對粗產物進行純化從而提供純二聚體，為橙色泡沫。在減壓下去除過量的洗脫液從而提供希望的產物10(434mg)，產率74％。1h–nmr:(cdcl3,400mhz)δ7.38(s,2h),7.34(d,2h,j＝8.8hz),7.30(bs,1h),7.26-7.24(m,3h),7.22(d,2h,j＝8.5hz),6.86(d,2h,j＝8.8hz),6.63(d,2h,j＝8.5hz),5.50(d,2h,j＝10.0hz),4.75(d,1h,j＝10.0hz),4.74(d,1h,j＝10.0hz),4.56(td,2h,j＝3.3,10.1hz),4.27(t,2h,j＝5.7hz),4.00-3.85(m,8h),3.80(s,3h),3.77-3.60(m,4h),3.20-3.00(m,2h),2.42(p,2h,j＝5.7hz),0.96(t,4h,j＝8.3hz),0.00(s,18h)。13c-nmr:(cdcl3,100mhz)δ169.8,169.7,162.9,162.7,160.6,152.7,152.6,149.0,147.5,134.8,127.8(次甲基),127.4,126.8,125.1,123.1,123.0,121.5(次甲基),120.4(次甲基),116.4(次甲基),115.5(次甲基),113.1(次甲基),108.6(次甲基),79.6(亞甲基),68.5(亞甲基),66.9(亞甲基),58.8(次甲基),57.6(甲氧基),56.7(甲氧基),32.8(亞甲基),30.3(亞甲基),19.7(亞甲基),0.0(甲基)。(c)(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮(11)在室溫下，將新鮮libh4(183mg，8.42mmol)加入處于thf(5ml)和etoh(5ml)中的sem-雙內酰胺10(428mg，0.42mmol)的攪拌溶液中。在10分鐘之后，觀測到延遲的劇烈泡騰，這需要將反應容器放置在冰浴中。在去除冰浴之后，在室溫下攪拌混合物1小時。此時lc/ms分析顯示起始原料完全消耗，帶有非常少的單還原產物。將反應混合物倒在冰上(100ml)并在攪拌下升溫至室溫。用dcm(3x30ml)萃取混合物水溶液并用h2o(20ml)、鹽水(30ml)洗滌合并的有機層，然后真空濃縮。用dcm(5ml)、etoh(14ml)、h2o(7ml)和硅膠(10g)處理得到的殘余物。在室溫下攪拌粘性混合物3天。通過燒結漏斗緩慢過濾混合物并用90％chcl3:10％meoh(～250ml)洗滌硅石殘余物，直至uv活性從洗脫液中完全消失。用h2o(50ml)、鹽水(60ml)洗滌有機相，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗物質。通過快速色譜法(97％chcl3:3％meoh)對粗產物進行純化，從而提供純c2/c2’芳基pbd二聚體11(185mg)，產率61％。1h–nmr:(cdcl3,400mhz)δ7.88(d,1h,j＝4.0hz),7.87(d,1h,j＝4.0hz),7.52(s,2h),7.39(bs,1h),7.37-7.28(m,3h),7.20(d,2h,j＝8.5hz),6.89(d,2h,j＝8.8hz),6.87(s,1h),6.86(s,1h),6.67(d,2h,j＝8.5hz),4.40-4.20(m,6h),3.94(s,6h),3.82(s,3h),3.61-3.50(m,2h),3.40-3.30(m,2h),2.47-2.40(m,2h)。13c-nmr:(cdcl3,100mhz)δ162.5(亞胺次甲基),161.3,161.1,159.3,156.0,151.1,148.1,146.2,140.3,126.2(次甲基),123.2,122.0,120.5(次甲基),119.4,115.2(次甲基),114.3(次甲基),111.9(次甲基),111.2(次甲基),65.5(亞甲基),56.2(甲氧基),55.4(甲氧基),53.9(次甲基),35.6(亞甲基),28.9(亞甲基)。實施例2(a)(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(5-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(12)在30℃下，將固體pd(pph3)4(32mg，27.7μmol)加入處于甲苯(10ml)、etoh(5ml)中的雙三氟甲磺酸鹽8b(1.04g，0.91mmol)、以及處于h2o(5ml)中的4-甲氧基苯基硼酸(0.202g，1.32mmol)、na2co3(0.169g，1.6mmol)的攪拌溶液中。在氮氣氛下攪拌反應混合物20小時。添加另外的固體4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺(0.203g，0.93mmol)和na2co3(0.056g，0.53mmol)，接著添加固體pd(pph3)4(10mg，8.6μmol)。在氮氣氛下攪拌反應混合物另外20小時。lc/ms表明形成希望的產物。添加etoac(100ml)和h2o(100ml)，分離水層并用etoac(3x30ml)萃取。用h2o(100ml)、鹽水(100ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)，過濾并蒸發，從而提供深棕色油。將油溶解于dcm中并加載到10g用dcm(1體積)預平衡的scx-2套筒上。用dcm(3體積)、meoh(3體積)洗滌套筒，并用處于meoh中的2mnh3(2體積)洗脫粗產物。快速色譜法(50％正己烷:50％etoac→20％正己烷:80％etoac)提供了純二聚體12，為黃色泡沫(0.16g，34％)。分析數據：[α]23d＝+388°(c＝0.22,chcl3)；1h–nmr:(cdcl3,400mhz)δ7.39(s,2h),7.35(d,2h,j＝12.8hz),7.32(bs,1h),7.26-7.23(m,5h),6.89(d,2h,j＝8.8hz),6.66(d,2h,j＝8.5hz),5.55(d,2h,j＝10.0hz),4.73(d,1h,j＝10.0hz),4.72(d,1h,j＝10.0hz),4.62(td,2h,j＝3.2,10.4hz),4.15-4.05(m,4h),4.00-3.85(m,8h),3.82(s,3h),3.77-3.63(m,4h),3.20-3.05(m,2h),2.05-1.95(m,4h),1.75-1.67(m,2h)1.01-0.95(m,4h),0.03(s,18h)；ms(es+)m/z(相對強度)1047([m+h]+.,45)。(b)(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(5-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮(13)在0℃(冰浴)下，將新鮮libh4(66mg，3.04mmol)加入處于thf(3ml)和etoh(3ml)中的sem-雙內酰胺12(428mg，0.42mmol)的攪拌溶液中。移開冰浴并使反應混合物達到室溫(劇烈泡騰)。在2小時之后，lc/ms分析表明起始原料完全消耗。將反應混合物倒在冰上(50ml)并在攪拌下升溫至室溫。用dcm(3x50ml)萃取混合物水溶液并用h2o(50ml)、鹽水(50ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)并真空濃縮。用dcm(2ml)、etoh(5ml)、h2o(2.5ml)和硅膠(3.7g)處理得到的殘余物。在室溫下攪拌粘性混合物3天。通過燒結漏斗過濾混合物并用90％chcl3:10％meoh(～250ml)洗滌硅石殘余物，直至uv活性從洗脫液中完全消失。對有機相進行干燥(mgso4)，過濾和真空蒸發，從而提供粗物質。通過快速色譜法(99.5％chcl3:0.5％meoh至97.5％chcl3:2.5％meoh，0.5％增量))來純化粗產物，從而提供純c2/c2’芳基pbd二聚體13(59mg，52％)。分析數據：[α]28d＝+760°(c＝0.14,chcl3)；1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.89(d,1h,j＝4.0hz),7.87(d,1h,j＝4.0hz),7.52(s,2h),7.39(bs,1h),7.37-7.28(m,3h),7.22(d,2h,j＝8.4hz),6.91(d,2h,j＝8.8hz),6.815(s,1h),6.81(s,1h),6.68(d,2h,j＝8.4hz),4.45-4.35(m,2h),4.2-4.0(m,4h),3.94(s,6h),3.85-3.7(s,3h),3.65-3.50(m,2h),3.45-3.3(m,2h),2.05-1.9(m,4h),1.75-1.65(m,2h)；ms(es+)(相對強度)754.6([m+h]+.,100),(es-)(相對強度)752.5([m-h]-.,100)。實施例3(a)(s)-2-(噻吩-2-基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(三氟甲磺酰氧基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(14)將固體pd(pph3)4(41mg，0.036mmol)加入處于甲苯(10ml)、etoh(5ml)中的雙三氟甲磺酸鹽8a(1g，0.9mmol)、以及處于h2o(5ml)中的噻吩-2-基硼酸(149mg，1.16mmol)、na2co3(152mg，1.43mmol)的攪拌溶液中。在室溫下在氮氣氛下，攪拌反應混合物過夜。通過真空蒸發來去除溶劑并且得到的殘余物分配在h2o(100ml)與etoac(100ml)之間。用etoac(2x30ml)萃取水層，并用h2o(50ml)、鹽水(50ml)洗滌合并的有機層，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物，通過快速色譜法(80己烷:20etoac→50己烷:50etoac)對其進行純化，從而提供二聚體14(188mg，產率20％)。分析數據：lc-msrt4.27分鐘，1051(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.36(s,1h),7.31(bs,1h),7.27(bs,1h),7.26-7.23(m,2h),7.22-7.17(m,1h),7.12(bs,1h),7.02–6.96(m,2h),5.50(d,j＝10.0hz,2h),7.75(d,j＝10.0hz,2h),4.65-4.55(m,2h),4.37-4.13(m,4h),4.00-3.85(m,8h),3.8-3.6(m,4h),3.20-3.10(m,2h),2.50-2.35(m,2h),1.0-0.9(m,4h),0(s,18h)。(b)(s)-2-(噻吩-2-基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(三氟甲磺酰氧基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(15)在室溫下，將固體pd(pph3)4(7.66mg，6.63μmol)加入處于甲苯(2-5ml)、etoh(1.25ml)和h2o(125ml)中的14(174mg，0.17mmol)、na2co3(28mg，0.22mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯胺(47mg，0.22mmol)的攪拌的混濁溶液中。在氮氣氛下，攪拌反應混合物24小時，此時通過lc/ms主峰(@3.97分鐘，fw＝1016,m+na)和tlc(etoac)，認為反應完成。通過真空蒸發來去除溶劑并且得到的殘余物分配在etoac(60ml)與h2o(30ml)之間。對層加以分離并用h2o(20ml)、鹽水(30ml)洗滌有機相，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物(123mg，產率75％)。分析數據：lc-msrt3.98分鐘，100％面積，994(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d，j＝5.3hz,2h),7.30(t,j＝1.70hz,1h),7.29-7.27(m,3h),7.25(d,j＝8.5hz,2h),7.21(dd,j＝1.4,4.73hz,1h),7.03-6.97(m,2h),6.66(d,j＝8.5hz,2h),5.52(d,j＝10.0hz,2h),4.78(d,j＝10.0hz,1h),4.77(d,j＝10.0hz,1h),4.62(dd,j＝3.4,10.5hz,1h),4.59(dd,j＝3.40,10.6hz,1h),4.30(t,j＝5.85hz,4h),3.85-4.03(m,8h),3.84-3.64(m,6h),3.18(ddd,j＝2.2,10.5,16.0hz,1h),3.11(ddd,j＝2.2,10.5,16.0hz,1h),2.44(p,j＝5.85hz,2h),0.98(t,j＝1.5hz,4h),0(s,18h)。(c)(s)-2-(噻吩-2-基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-氨基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮(16)在0℃(冰浴)下，將新鮮libh4(47mg，2,22mmol)加入處于無水thf(3ml)和etoh(3ml)中的sem-雙內酰胺15(110mg，0.11mmol)的攪拌溶液中。移開冰浴并在氮氣氛下攪拌反應混合物1小時。通過lc/ms分析進行的反應分析顯示顯著地形成希望的產物(pk@2.57分鐘)(i＝69.32)、fw＝702,m+h)和半亞胺。攪拌反應混合物持續另外1小時，此后，通過lc/ms未觀測到進一步的反應進展。將反應混合物倒在冰上，攪拌并允許升溫至室溫。在dcm(50ml)與水(50ml)之間分配之后，用dcm(3x20ml)萃取水相。用h2o(50ml)、鹽水(50ml)洗滌合并的有機層并在減壓下通過真空蒸發來去除溶劑。將得到的殘余物溶解于dcm(5ml)、etoh(15ml)和h2o(7ml)中，然后用硅膠(5g)處理。在室溫下攪拌反應48h。通過燒結漏斗通過過濾來去除硅石，并用90:10chcl3:meoh(100ml)沖洗殘余物。將h2o(50ml)加入濾液中并對層進行分離(在搖動之后)。用chcl3(2x30ml)和h2o(50ml)、鹽水(50ml)萃取水層，干燥(mgso4)，過濾并真空蒸發，從而提供粗產物。快速色譜法(chcl3→98％chcl3:2％meoh)提供了產物(41mg，53％)。分析數據：lc-msrt2.55分鐘，702(m+h)實施例4(a)(s)-2-(4-甲氧基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(三氟甲基磺酰基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(17)將固體4-甲氧基苯硼酸(0.388g，2.55mmol)加入處于甲苯(54.8ml)、乙醇(27ml)和水(27ml)中的sem保護的雙三氟甲磺酸鹽(8a)(3.0g，2.69mmol)、碳酸鈉(426mg，4.02mmol)和四(三苯基)膦鈀(0.08mmol)的溶液中。在室溫下攪拌反應混合物3小時。然后在乙酸乙酯與水之間分配反應混合物。用水和鹽水洗滌有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑并對得到的殘余物進行快速柱層析法(硅膠；梯度洗脫etoac/己烷30/70→35/65→40/60→45/55)從而去除未反應的雙三氟甲磺酸鹽(0.6g)。從選擇的餾分中去除過量的洗脫液提供了4-甲氧基苯基耦合產物(1.27g，1.18mmol，41％)。lc-msrt4.30分鐘，1076(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.41(s,1h),7.39(d,j＝8.8hz,2h),7.35(s,1h),7.34(bs,1h),7.29(s,1h),7.16(t,j＝1.9hz,1h),6.90(d,j＝8.8hz,2h),5.53(d,j＝10.0hz,2h),4.79(d,j＝10.0hz,1h),4.78(d,j＝10.0hz,1h),4.66–4.60(m,2h),4.30(t,j＝5.7hz,4h),4.0–3.94(m,2h),3.93(s,3h),3.92(s,3h),3.84(s,3h),3.83–3.60(m,4h),3.22–3.10(m,2h),2.45(t,j＝5.9hz,2h),1.05–0.94(m,4h),0(s,18h)。(b)(s)-2-(3-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(18)將固體3-氨基苯硼酸(0.143g，0.92mmol)加入處于甲苯(10ml)、乙醇(5ml)和水(5ml)中的單三氟甲磺酸鹽(17)(0.619g，0.58mmol)、碳酸鈉(195mg，1.84mmol)和四(三苯基)膦鈀(26.6mg，0.023mmol)的溶液中。在30℃下在室溫下攪拌反應混合物過夜。然后在乙酸乙酯與水之間分配反應混合物。用水和鹽水洗滌有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑并對得到的殘余物進行快速柱層析法(硅膠；梯度洗脫etoac/己烷70/30→85/15)。從選擇的餾分中去除過量的洗脫液提供了希望的產物(0.502g，0.49mmol，85％)。lc-msrt4.02分鐘，1019(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.38–7.35(m,4h),7.33(bs,1h),7.30(bs,1h),7.25(s,2h),7.10(t,j＝7.8hz,1h),6.88–6.80(m,3h),6.72(bs,1h),6.57(dd,j＝7.9,1.8hz,1h),5.50(d,j＝10.0hz,2h),4.75(d,10.0hz,2h),4.58(dd,j＝10.6,3.3hz,2h),4.27(t,j＝5.8hz,4h),3.95–3.91(m,2h),3.90(s,6h),3.80(s,3h),3.77–3.60(m.6h),3.15–3.05(m,2h),2.41(p,j＝5.8hz,2h),0.95(t,＝8.25hz,4h),0(s,18h)。(c)(s)-2-(3-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮(19)在-78℃下在氮氣氛下，將超氫化物溶液(0.56ml，0.56mmol，1.0m，在thf中)逐滴加入處于無水thf(10ml)中的sem雙內酰胺(18)(0.271g，0.27mmol)的溶液中。在1小時之后，添加另外等分部分的超氫化物溶液(0.13ml，0.13mmol)并攪拌反應混合物持續另外0.5小時，此時，lc-ms表明還原完成。用水稀釋反應混合物并允許升溫至室溫。在氯仿與水之間分配反應混合物，對層進行分離，并用另外的氯仿(乳狀液)萃取水層。最后，用鹽水洗滌合并的有機相并在硫酸鎂上干燥。將還原產物溶解于甲醇、氯仿和水中，并在硅膠存在下攪拌72小時。在從選擇的餾分中去除過量的洗脫液之后，對粗產物進行快速柱層析法(甲醇/氯仿梯度)從而提供希望的亞胺產物(150mg，0.21mmol，77％)。lc-msrt2.63分鐘，97％面積，726(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(d,j＝3.9hz,1h),7.84(d,j＝3.9hz,1h),7.50(s,1h),7.49(s,1h),7.42(s,1h),7.36(s,1h),7.32(d,j＝7.3hz,2h),7.11(t,(d,j＝7.8hz,1h),6.90-6.80(m,4h),6.77(d,j＝7.9hz,1h),4.40-4.20(m,6h),3.92(s,6h),3.80(s,3h),3.60-3.27(m,6h),2.48-2.29(m,2h)實施例5(a)11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-5-氧代-2-(三氟甲基磺酰氧基)-11,11a-二氫-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯21將固體4-甲氧基苯硼酸(59mg，0.39mmol)加入處于甲苯(10.8ml)、乙醇(5.4ml)和水(5.4ml)中的troc保護的雙三氟甲磺酸鹽(化合物44，wo2006/111759)(600mg，0.41mmol)、碳酸鈉(65mg，0.61mmoml)和四(三苯基)膦鈀(0.012mmol)的溶液中。在室溫下攪拌反應混合物過夜。然后在乙酸乙酯與水之間分配反應混合物。用水和鹽水洗滌有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑并對得到的殘余物進行快速柱層析法(硅膠；梯度洗脫etoac/己烷20/80→30/70→40/60→60/40)從而去除未反應的雙三氟甲磺酸鹽。從選擇的餾分中去除過量的洗脫液提供了4-甲氧基苯基耦合產物(261mg，0.18mmol，46％)。lc-msrt4.17分鐘，1427(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.38(s,1h),7.33(s,1h),7.31(s,1h),7.30(s,1h),7.25(s,1h),7.20(bs,1h),6.92(d,j＝8.6hz,2h),6.77(d,j＝8.7hz,2h),6.0–5.90(m,2h),5.25(d,j＝12.0hz,1h),5.24(d,j＝12.0hz,1h),4.24(d,j＝12.0hz,1h),4.22(d,j＝12.0hz,1h),4.18-4.08(m,2h),4.07–3.89(m,10h),3.81(s,3h),3.44–3.25(m,2h),2.85(d,j＝16.6hz,2h),2.05–1.90(m,4h),1.76–1.64(m,2h),0.93(s,9h),0.90(s,9h),0.30(s,6h),0.26(s,6h)。(b)11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-11,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯22將在步驟(a)中描述的suzuki偶合步驟應用于化合物21的合成。在30℃下用1當量的4-羥基苯硼酸(10mg)處理化合物20(62.5mg，0.044mmol)過夜從而在通過硅膠墊過濾之后提供所希望的化合物(40mg，0.029mmol，66％產率)。該化合物直接用于隨后的步驟中。lc-msrt4.27分鐘，1371(m+h)(c)(s)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-8-(5-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮23將鎘/鉛對(100mg，qdongetal.tetrahedronlettersvol36,issue32,5681-5682,1995)加入處于thf(1ml)和乙酸銨(1n，1ml)中的21(40mg，0.029mmol)的溶液中并攪拌反應混合物1小時。在氯仿與水之間分配反應混合物，對相進行分離并用氯仿萃取水相。用鹽水洗滌合并的有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下旋轉蒸發產生粗產物，對其進行柱層析法(硅膠，0→4％meoh/chcl3)。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量的洗脫液提供了希望的亞胺產物(17mg，0.023mmol，79％)。lc-msrt2.20分鐘，755(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.89(d,j＝3.94hz,1h),7.89(d,j＝4.00hz,1h),7.53(s,1h),7.52(s,1h),7.38(d,j＝8.7hz,2h),7.33(d,j＝8.6hz,2h),7.28(s,1h),6.90(d,j＝8.7hz,2h),6.84(d,j＝8.6hz,2h),6.82(s,1h),6.81(s,1h),5.68(bs,1h),4.50-4.30(m,2h),4.22-4.00(m,4h),3.93(s,6h),3.82(s,3h),3.69-3.45(m,2h),3.44-3.28(m,2h),2.64-1.88(m,4h),1.77-1.62(m,2h)。實施例6(a)11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-(4-甲酰苯基)-7-甲氧基-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-11,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯24將在實施例5步驟(a)中描述的suzuki偶合步驟應用于化合物24的合成。在室溫下用1當量的4-甲酰苯硼酸(10.5mg)處理化合物21(62.5mg，0.044mmol)過夜從而在通過硅膠墊過濾之后提供所希望的化合物(45mg，0.033mmol，75％產率)。該化合物直接用于隨后的步驟中。lc-msrt4.42分鐘，1383(m+h)(b)4-((s)-7-甲氧基-8-(5-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯甲醛25通過在實施例5步驟(c)中描述的方法，對化合物24進行脫保護，從而產生希望的化合物(18mg，0.023mmol，79％)。lc-msrt3.18分鐘，768(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ9.98(s,1h),7.91(d,j＝3.90hz,1h),7.90-7.80(m,3h),7.68(s,1h),7.60-7.45(m,4h),7.39(s,1h),7.33(d,j＝8.7hz,1h),6.90(d,j＝8.7hz,2h),6.83(s,1h),6.82(s,1h),4.55-4.44(m,1h),4.43-4.36(m,1h),4.23-4.00(m,4h),3.95(s,3h),3.94(s,3h),3.82(s,3h),3.66-3.51(m,2h),3.50-3.34(m,2h),2.05-1.87(m,4h),1.76-164(m,2h)。實施例7(a)2-(3-氨基苯基)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-2-(三氟甲基磺酰氧基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯26使用3-氨基苯硼酸將在實施例5步驟(a)中描述的suzuki偶合步驟應用于化合物26的合成，從而提供所希望的化合物(230mg，0.163mmol)，產率為41％。lc-msrt4.28分鐘，1411(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.44(bs,1h),7.29(s,1h),7.25(s,1h),7.20(s,1h),7.16(t,j＝7.9hz,1h),6.84-6.73(m,3h),6.70(bs,1h),6.62(dd,j＝7.9,1.7hz,1h),6.66-6.58(m,2h),5.25(d,j＝12.0hz,1h),5.24(d,j＝12.0hz,1h),4.24(d,j＝12.0hz,1h),4.22(d,j＝12.0hz,1h),4.17-4.07(m,2h),4.08-3.89(m,10h),3.43-3.28(m,2h),2.85(d,j＝1.65hz,2h),2.07-1.90(m,4h),1.78-1.63(m,2h),0.94(s,9h),0.90(s,9h),0.30(s,6h),0.27(s,6h)。(b)2-(3-氨基苯基)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-2-(4-(3-(二甲基氨基)丙氧基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯27將固體4-[3-(二甲基氨基)丙氧基苯硼酸頻哪醇酯(25mg，0.082mmol)加入處于甲苯(1ml)、乙醇(0.5ml)和水(0.5ml)中的26(73mg，0.052mmol)、碳酸鈉(18mg，0.17mmol)和四(三苯基)膦鈀(3mg)的溶液中。在室溫下攪拌反應混合物過夜。然后在乙酸乙酯與水之間分配反應混合物。用水和鹽水洗滌有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑并用氯仿/甲醇通過硅膠塞來洗脫得到的殘余物。從選擇的餾分中去除過量的洗脫液提供了4-甲氧基苯基耦合產物(50mg，0.035mmol，67％)。lc-msrt4.12分鐘，1440(m+h)(c)(s)-2-(3-氨基苯基)-8-(5-((s)-2-(4-(3-(二甲基氨基)丙氧基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮28通過在實施例5步驟(c)中描述的方法對化合物27進行脫保護，從而產生希望的化合物。在dcm與碳酸氫鈉水溶液(乳狀液)之間分配反應混合物并在硅膠上通過梯度柱層析法(5％甲醇/氯仿→35％甲醇/氯仿)來純化粗產物，從而提供希望的非對稱pbd亞胺(50mg，0.018mmol，58％)。lc-msrt2.55分鐘，826(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.92-7.82(m,2h),7.52(bs,2h),7.45(bs,1h),7.39(bs,1h),7.31(d,j＝8.6hz,2h),7.14(t,j＝7.8hz,1h),6.89(d,j＝8.6hz,2h),6.85–6.75(m,3h),6.72(bs,1h),6.60(d,j＝8.0hz,1h),4.46-4.33(m,2h),4.21-3.98(m,6h),3.94(s,6h),3.63-3.50(m,2h),3.43-3.29(m,2h),2.64-2.48(m,2h),2.34(s,6h),2.10-1.89(m,6h),1.57(m,2h)。實施例8(a)2-(3-氨基苯基)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-8-(5-((11s,11as)-11-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-10-((2,2,2-三氯乙氧基)羰基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-7-甲氧基-5-氧代-11,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-10(5h)-羧酸(11s,11as)-2,2,2-三氯乙基酯29實施實施例7步驟(b)的方法，從而在通過硅膠塞過濾(使用1/3甲醇/氯仿)并且在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑之后提供希望的產物(58mg，.0.040mmol，78％)。lc-msrt4.08分鐘，1439(m+h)(b)(s)-2-(3-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(5-((s)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)戊氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮30使用實施例7步驟(c)的方法來脫保護化合物29。通過硅膠梯度層析法(2％甲醇/氯仿→35％甲醇/氯仿)來純化粗產物從而提供希望的非對稱pbd亞胺(18mg，0.022mmol，59％)。lc-msrt2.52分鐘，823(m+h)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.80(d,j＝3.8hz,2h),7.45(s,2h),7.38(s,1h),7.30(s,1h),7.23(d,j＝8.6hz,2h),7.07(t,j＝7.8hz,1h),6.83(d,j＝8.6hz,2h),6.79-6.89(m,3h),6.65(s,1h),6.54(d,j＝7.9hz,1h),4.40-4.24(m,2h),4.15-3.93(m,4h),3.87(s,6h),3.56-3.42(m,2h),3.37-3.23(m,2h),3.22-3.08(m,4h),2.61-2.41(m,4h),2.29(s,3h),1.98-1.80(m,4h),1.67-1.54(m,2h)。實施例9(a)(s)-2-(4-(氨基甲基)苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮31將固體4-氨基甲基苯硼酸鹽酸鹽(0.111g，0.59mmol)加入處于甲苯(10ml)、乙醇(5ml)和水(5ml)中的17(0.394g，0.37mmol)、碳酸鈉(175mg，1.654mmol)和四(三苯基)膦鈀(28.0mg，0.024mmol)的溶液中。在30℃下攪拌反應混合物過夜。第二天，在70℃下加熱反應混合物持續另外3小時。然后在乙酸乙酯與水之間分配反應混合物。用水和鹽水洗滌有機層并在硫酸鎂上干燥。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量溶劑并對得到的殘余物進行快速柱層析法(硅膠；梯度洗脫etoac/己烷2/98→15/85)。從選擇的餾分中去除過量的洗脫液提供了所希望的產物(0.230mg，0.22mmol，61％)。lc-msrt3.63分鐘，1034(m+2h)；1h-nmr(400mhz,dmsod6)δ11.7(s,2h),7.52(d,j＝8.2hz,2h),7.48(d,j＝8.7hz,2h),7.40(s,1h),7.50(d,j＝8.1hz,2h),7.38-7.19(m,5h)6.93(d,j＝8.7hz,2h),5.40(d,j＝2.13hz,1h),5.38(d,j＝2.12hz,1h),5.32(d,j＝10.6hz,2h),5.25(d,j＝10.6hz,2h),4.87-4.72(m,2h),4.35-4.15(m,4h),3.85(s,6h),3.79(s,3h),3.73-3.56(m,2h),3.55-3.39(m,4h),3.22-3.02(m,2h),2.39-2.23(m,2h),0.94-0.67(m,4h),-0.06(s,18h)。(b)(s)-2-(4-(氨基甲基)苯基)-7-甲氧基-8-(3-((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮32按照實施例1步驟(c)的方法對化合物31進行脫保護。通過梯度柱層析法(5/95→30/70meoh/chcl3)來純化粗產物從而提供產物，為亞胺和甲醇胺甲醚的混合物。lc-msrt2.58分鐘，740(m+h)。實施例10(s)-2-(4-氨基苯基)-7-甲氧基-11(s)-磺基-8-(3-((s)-7-甲氧基-11(s)-磺基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,10,11,11a-四氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基氧基)丙氧基)-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮二鈉鹽33將亞硫酸氫鈉(8.5mg，3.1當量)加入處于異丙醇(4ml)和水(2ml)中的二亞胺11(20mg，0.036mmol)的攪拌懸浮液中。劇烈攪拌反應混合物并最終變得清澈(約1小時)。將反應混合物轉移到漏斗中并通過棉壁(cottonwall)進行過濾(然后用2ml水洗滌)。快速冷凍濾液(液體并且至水浴)并冷凍干燥，從而以定量產率提供希望的產物33。lc-msrt11.77分鐘，727.2(m+h)(母體化合物的質量，亞硫酸氫鹽加合物，在質譜儀中不穩定)；1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.66-7.55(m,5h),7.43(s,1h),7.39(d,j＝8.66hz,2h),7.06(m,2h),6.93(d,j＝8.84hz,2h),6.54(m,2h),5.29-5.21(m,2h),4.32-4.28(m,2h),4.14-4.20(m,4h),3.96-3.83(m,2h),3.77(s,3h),3.73(m,6h),3.52-3.43(m,2h),3.30-3.08(m,2h),2.24-2.21(m,2h)。實施例11(a)(s)-2-(2-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5,11-二氧代-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-5,10,11,11a-四氫-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-10-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5,11(10h,11ah)-二酮(103)將催化量的四(三苯基)膦鈀(0)(11.2mg)加入處于乙醇(5ml)、甲苯(5ml)和水(5ml)中的單三氟甲磺酸鹽17(380mg)、2-氨基苯基硼酸的頻哪醇酯(124mg)和碳酸鈉(120mg)的混合物中。在室溫下以及在40℃下攪拌反應混合物過夜，直至反應完成(約2小時)。用乙酸乙酯稀釋反應混合物并用水和鹽水洗滌有機層。在硫酸鎂上干燥乙酸乙酯溶液并在真空下過濾。在減壓下通過旋轉蒸發來去除乙酸乙酯提供了粗產物，對其進行快速色譜法(硅膠，乙酸乙酯/己烷)。收集并且合并純餾分。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量的洗脫液提供了純產物103(330mg，產率86％)。lc/msrt:4.17分鐘，es+1018.48。(b)(s)-2-(2-氨基苯基)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-5(11ah)-酮(104)在-78℃下在惰性氣氛下，將處于干燥四氫呋喃中的超氫化物的溶液(1.0m，4.4當量)加入處于干燥四氫呋喃(5ml)中的2-苯胺化合物103(300mg)的溶液中。當緩慢地進行還原時，將添加等分部分的硼氫化鋰(20當量)并允許反應混合物返回到室溫。將水/冰加入反應混合物中用來淬滅未反應的氫化物并用二氯甲烷稀釋反應。用水(兩次)、檸檬酸和鹽水順序地洗滌有機層。在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量的二氯甲烷并將殘余物再溶解于乙醇和水中，然后用硅膠處理96小時。真空過濾反應混合物并蒸發濾液至干燥。對殘余物進行快速柱層析法(硅膠，梯度氯仿/甲醇)。收集并合并純餾分并在減壓下通過旋轉蒸發來去除過量的洗脫液，從而提供純產物104(30mg，14％產率)。lc/msrt:2.90分鐘，es+726.09。實施例12：代表性的pbd化合物的體外細胞毒性的確定k562測定在37℃下在包含5％co2的加濕氣氛中將k562人慢性骨髓性白血病細胞保持在補充有10％胎牛血清和2mm谷氨酰胺的rpm11640培養基中，并在37℃下在黑暗中用特定劑量的藥物孵化1小時或96小時。通過離心法(5分鐘，300g)來終止孵化并用不含藥物的培養基洗滌細胞一次。在適當藥物處理之后，將細胞轉移到96孔微量滴定板中(104個細胞/孔，8孔/樣品)。然后在37℃下在黑暗中將這些板保持在包含5％co2的加濕氣氛中。該測定法是基于活細胞將黃色可溶性四唑鹽，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2h-四唑溴化物(mtt，aldrich-sigma)，還原成不溶性紫色甲臢沉淀物的能力。在將這些板孵化4天(從而允許對照細胞的數目增加大約10倍)之后，將20μl的mtt溶液(5mg/ml，在磷酸鹽緩沖鹽水中)加入每個孔中并將這些板進一步孵化5小時。然后在300g下將這些板離心5分鐘并從細胞球粒中移出大量的培養基，從而留下10-20μl/孔。將dmso(200μl)加入每個孔中并攪拌樣品以確保完全混合。然后在titertekmultiscanelisa酶標儀上在550nm的波長下讀取光密度，并構建劑量-反應曲線。對于每條曲線，將ic50值讀作將最終光密度降低至對照值的50％所需要的劑量。在此測定中，化合物13具有30pm的ic50。a2780測定a2780親代細胞系生長在包含～10％胎牛血清(fcs)和～1％200mml-谷氨酰胺溶液的dulbecco改良型eagle培養基(dmem)中，并且生長在corningcellbind75cm2燒瓶中。將190μl細胞懸液(以1x104)加入96孔板(nunc96f平底tc板)的第2列至第11列的每個孔中。將190μl培養基加入第1列和第12列的每個孔中。培養基是dulbecco改良型eagle培養基(dmem)(它包括～10％胎牛血清(fcs)和～1％200mml-谷氨酰胺溶液)。如果細胞是附著的，在添加藥物之前，在37℃下將這些板孵化過夜。橫過96孔板，連續稀釋200μm測試化合物溶液(在100％dmso中)。然后將每個得到的點進一步稀釋1/10到無菌蒸餾水(sdw)中。以5％v/v向細胞陰性空白和化合物陰性對照孔，添加10％dmso。在37℃下在5％co2中在加濕培養箱中孵化測定板持續以下時間：持續72小時。在孵化之后，將終濃度1.5μm的mtt溶液加入每個孔。然后在37℃下在5％co2中在加濕培養箱中孵化這些板持續另外4小時。然后去除培養基，并將染料溶解于200μldmso(99.99％)中。使用envision酶標儀在540nm下讀取平板的吸光度。使用microsoftexcel和graphpadprism來分析數據并獲得ic5值。在此測定中，化合物11具有11.7pm的ic50。腎細胞和aml細胞系測定在腎細胞癌細胞系、786-o、霍奇金淋巴瘤細胞系、l428和兩種aml細胞系、hl60和hel上測試各種自由藥物化合物的細胞毒性。對于96小時測定，在包含補充有20％fbs的150μlrpmi1640的96孔板中接種在對數期生長中培養的細胞持續24小時。以4x工作濃度制備在細胞培養基中測試物品(即，自由藥物)的連續稀釋；將50μl的每種稀釋物加入96孔板中。在添加測試物品之后，在37℃下，將細胞與測試物品一起孵化4天。然后將刃天青加入每個孔中以實現50μm終濃度，并在37℃下將這些板孵化另外4小時。然后在fusionht酶標儀(packardinstruments,meridien,ct,usa)上，分別地用530nm和590nm的激發波長和發射波長，針對染料還原程度讀取平板。重復三次確定的ic50值在本文中定義為相對于未處理的對照導致細胞生長50％減少的濃度。參考下面表1，在此測定中，與間-苯胺化合物19相比較，在這些細胞系上對-苯胺化合物11顯示顯著增加的活性。表1：自由藥物的ic50總結[nm]自由藥物l428786-ohl60hel化合物11<0.00001<0.00001<0.00001<0.00001化合物1910.50.60.2參考下面表2，顯示了在l428、786-o、hel、hl-60和mcf-7細胞上化合物28、30和32的活性，以及在mcf-7細胞上化合物19的活性。表2：自由藥物的ic50總結[nm]自由藥物l428786-ohelhl-60mcf-7化合物28<0.00001<0.00001<0.00001<0.00001<0.00001化合物30<0.00001<0.00001<0.00001<0.000010.01化合物32<0.00001<0.00001<0.00001<0.000011.0化合物195參考下面表3，在786-o、caki-1、mcf-7、hl-60、thp-1、hel、和tf1細胞上，將化合物23、25的活性與化合物11的活性進行比較。以150μl生長培養基/孔將細胞平板接種到黑色側面透明底96孔板中(costar,corning)，并允許在生物學工作櫥中沉降1小時，然后放入37℃、5％co2的培養箱中。第二天，制備4x濃度的藥物儲備溶液，然后滴定為10倍連續稀釋物，從而產生8點劑量曲線并以50μl/孔加入(重復兩次)。然后在37℃、5％co2下，將細胞孵化48小時。通過用100μlcelltiterglo(promega)溶液孵化1小時來測量細胞毒性，然后在fusionht酶標儀上(perkinelmer)測量發光。用excel(microsoft)和graphpad(prism)處理數據從而產生劑量-反應曲線，然后產生ic50值并收集數據。表3：自由藥物的ic50總結[nm]自由藥物786-ocaki-1mcf-7hl-60thp-1heltf1a化合物110.40.210.0110.031化合物230.060.020.70.0050.40.0090.2化合物250.090.060.80.010.90.020.9在實施例13至16中，如下所示通過化合物編號來指示以下化合物：化合物替代指定11371357194225952850304910466實施例13：pbd藥物接頭化合物的合成一般信息。在以下實施例中，所有可商購的無水溶劑無需進一步純化即可使用。在硅膠60f254鋁板(emdchemicals,gibbstown,nj)上進行分析型薄層色譜法。在chromatotron儀器(harrisresearch,paloalto,ca)上進行徑向色譜法。在配置有varianprostar330pda檢測器的varianprostar210溶劑遞送系統上進行分析型hplc。在c12phenomenexsynergi2.0x150mm、4μm、反相柱上洗脫樣品。酸性流動相由乙腈和水組成，兩者均包含0.05％三氟乙酸或0.1％甲酸(表示每種化合物)。用線性梯度的酸性乙腈(從5％(在注射后1分鐘)至95％(在11分鐘))，接著用等濃度95％乙腈至15分鐘(流量＝1.0ml/分鐘)，來洗脫化合物。在聯接到裝備有c12phenomenexsynergi2.0x150mm，4μm，反相柱的hpagilent1100hplc儀器上的zmdmicromass質譜儀上進行lc-ms。酸性洗脫液由線性梯度的乙腈組成，從5％至95％(處于0.1％甲酸水溶液中)，持續10分鐘，接著等濃度95％乙腈持續5分鐘(流量＝0.4ml/分鐘)。在配置有varianprostar330pda檢測器的varianprostar210溶劑遞送系統上進行制備型hplc。在c12phenomenexsynergi10.0x250mm，4μm，反相柱上，用處于水中的0.1％甲酸(溶劑a)和處于乙腈中的0.1％甲酸(溶劑b)進行洗脫，來純化產物。純化方法由以下梯度的溶劑a相對于溶劑b組成：90:10，從0至5分鐘；90:10至10:90，從5分鐘至80分鐘；接著等濃度10:90，持續5分鐘。流量為4.6ml/分鐘，在254nm下監測。在varianmercury400mhz分光計上收集nmr譜數據。以hertz為單位報告偶合常數(j)。方案1(s)-2-((s)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(36):向溶解于10.6ml無水dmf中的val-ala二肽34(200mg，1.06mmol)的溶液中添加馬來酰亞氨基己酰基nhs酯35(327mg，1.06mmol)。然后添加二異丙基乙胺(0.92ml，5.3mmol)，并在氮氣下在環境溫度下攪拌反應18小時，此時，tlc和分析型hplc顯示起始原料消耗。用0.1mhcl(100ml)稀釋反應，并用乙酸乙酯(100ml，3x)萃取水層。用水和鹽水洗滌合并的有機層，然后在硫酸鈉上干燥，過濾并且濃縮。將粗產物溶解于最少的二氯甲烷中并在2mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化，用ch2cl2/meoh混合物(95:5至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供36(158mg，39％)，為油狀殘余物。tlc：rf＝0.26，處于ch2cl2中的10％meoh。1hnmr(cdcl3)δ(ppm)0.95(d,j＝17hz,3h),0.98(d,j＝17hz,3h),1.30(m,2h),1.40(d,j＝17hz,3h),1.61(m,4h),2.06(m,1h),2.25(dt,j＝4,19hz,2h),3.35(s,1h),3.49(t,j＝17hz,2h),4.20(d,j＝18hz,1h),4.38(m,1h),6.80(s,2h)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr9.05分鐘。lc-ms：tr11.17分鐘，m/z(es+)實測值381.9(m+h)+，m/z(es-)實測值379.9(m-h)-。6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-(((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(38)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入酸36(3.6mg，9.5μmol)、eedq(2.8mg，11.4μmol)、和0.33ml無水ch2cl2。添加甲醇(4滴，～80μl)以促進溶解，然后在氮氣下攪拌混合物1小時。然后添加pbd二聚體37(5.7mg，7.9μmol)，并在室溫下攪拌反應6小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。對反應進行濃縮，溶解于最少的ch2cl2中，然后在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法進行純化，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供藥物接頭38(3.9mg，45％)。tlc：rf＝0.06，處于ch2cl2中的5％meoh。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr11.51分鐘。lc-ms：tr12.73分鐘，m/z(es+)實測值1089.6(m+h)+，m/z(es-)實測值1087.3(m-h)-。方案26-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-(4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)己酰胺(40)：向火焰干燥的10ml燒瓶添加pbd二聚體37(25mg，34.4μmol)，將其溶解于1.4ml處于chcl3溶劑混合物中的10％meoh中。添加馬來酰亞氨基己酸(39)(7.3mg，34.4μmol)，接著添加eedq(10.2mg，41.3μmol)和吡啶(6μl，68.8μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應14小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。對反應進行濃縮，溶解于最少的ch2cl2中，并在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法進行純化，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供藥物接頭40(14.1mg，45％)。lc-ms：tr12.81分鐘，m/z(es+)實測值918.9(m+h)+，m/z(es-)實測值917.0(m-h)-。方案32-溴-n-(4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)乙酰胺(41)：向火焰干燥的10ml燒瓶中加入pbd二聚體37(16.5mg，22.7μmol)，將其溶解于0.9ml處于chcl3溶劑混合物中的10％meoh中。添加溴乙酸(3.2mg，22.7μmol)，接著添加eedq(6.8mg，27.2μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應4小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。對反應進行濃縮，溶解于最少的ch2cl2中，并在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法進行純化，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至95:5ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供藥物接頭41(9.9mg，52％)。tlc：rf＝0.09，處于ch2cl2中的5％meoh。lc-ms：tr12.44分鐘，m/z(es+)實測值848.1(m+h)+，m/z(es-)實測值845.7(m-h)-。方案46-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-(((s)-1-((3-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(43)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入酸36(3.6mg，9.4μmol)、eedq(2.8mg，11.3μmol)、和0.38ml包含1％甲醇的無水ch2cl2。在氮氣下攪拌反應1小時；然后添加pbd二聚體42(6.8mg，9.4μmol)，并在室溫下攪拌反應2小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。對反應進行濃縮，溶解于最少的ch2cl2中，并在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法進行純化，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供藥物接頭43(3.1mg，30％)。tlc：rf＝0.31，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr11.49分鐘。lc-ms：tr12.28分鐘，m/z(es+)實測值1089.5(m+h)+，m/z(es-)實測值1087.3(m-h)-。方案56-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-(3-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)己酰胺(44)：在火焰干燥的10ml燒瓶中添加pbd二聚體42(8.0mg，11μmol)，將其溶解于0.44ml處于ch2cl2溶劑混合物中的10％meoh中。添加馬來酰亞氨基己酸(39)(2.3mg，11μmol)，接著添加eedq(3.3mg，13.2μmol)和吡啶(1.8μl，22μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應3小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供藥物接頭化合物44(1.2mg，12％)。tlc：rf＝0.45，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.05％三氟乙酸)：tr11.71分鐘。lc-ms：tr12.63分鐘，m/z(es+)實測值919.1(m+h)+，m/z(es-)實測值917.1(m-h)-。方案6(2s,3r,4s,5r,6r)-2-(2-(3-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)丙酰氨基)-4-((((3-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯氧基)-6-甲基四氫-2h-吡喃-3,4,5-三基三乙酸酯(46)：在火焰干燥的燒瓶中加入葡糖苷酸接頭中間體45(參考文獻：jeffreyetal.,bioconjugatechemistry,2006,17,831-840)(15mg，20μmol)、1.4ml無水ch2cl2、吡啶(20μl，240μmol)，然后在氮氣下冷卻至-78℃。然后添加雙光氣(3.0μl，24μmol)并在-78℃下攪拌反應2小時，此后，用甲醇淬滅較小的等分部分并通過lc-ms來分析碳酸甲酯的形成，這證實了葡糖苷酸氯甲酸酯的形成。然后將pbd二聚體42(15mg，20μmol)溶解于0.7ml無水ch2cl2中并逐滴加入反應容器中。在2小時內，加熱反應至0℃，然后用50mlch2cl2稀釋。用水(50ml)、鹽水(50ml)洗滌有機層，在硫酸鈉上干燥，過濾并濃縮。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化粗反應產物，用處于ch2cl2中的10％meoh進行洗脫，從而提供46(5.7mg，19％)。tlc：rf＝0.47，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr12.09分鐘。lc-ms：tr14.05分鐘，m/z(es+)實測值1500.3(m+h)+。(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(2-(3-氨基丙酰氨基)-4-((((3-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-羧酸(47)：將包含溶解于各自0.2ml的meoh、四氫呋喃、和水的溶劑混合物中的46(5.7mg，3.8μmol)的燒瓶冷卻至0℃。向攪拌溶液中添加氫氧化鋰單水合物(0.8mg，19μmol)并在室溫下攪拌反應4小時，此時，lc-ms指示轉化成產物。添加冰醋酸(1.1μl，19μmol)并濃縮反應從而提供47，無需進一步純化即可使用。lc-ms：tr11.59分鐘，m/z(es+)實測值1138.4(m+h)+。(2s,3s,4s,5r,6s)-6-(2-(3-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)丙酰氨基)-4-((((3-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2h-吡喃-2-羧酸(48)：向溶解于0.38ml無水dmf中的47(4.3mg，3.8umol)的溶液中添加馬來酰亞氨基己酰基nhs酯35(1.2mg，3.8umol)，接著添加二異丙基乙胺(4.0ul，22.8umol)。在室溫下在氮氣下攪拌反應2小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。用乙腈(0.5ml)、dmso(1ml)、水(0.5ml)的混合物稀釋反應，然后通過制備型hplc加以純化。流動相由a＝水和b＝乙腈組成，兩者均包含0.1％甲酸。使用90:10a:b至10:90a:b的線性洗脫梯度持續75分鐘并冷凍干燥包含希望的產物的餾分，從而提供藥物接頭化合物48(1.2mg，24％，經兩個步驟)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr10.85分鐘。lc-ms：tr12.12分鐘。m/z(es+)實測值1331.4(m+h)+，m/z(es-)實測值1329.5(m-h)-。方案76-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-(((s)-1-((3-((s)-7-甲氧基-8-((5-(((s)-7-甲氧基-2-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(51)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入酸36(2.7mg，7.1μmol)、eedq(2.1mg，8.5μmol)、和0.28ml包含1％甲醇的無水ch2cl2。在氮氣下攪拌反應1小時；然后添加pbd二聚體49(5.8mg，7.1μmol)并在室溫下攪拌反應20小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。濃縮反應，然后通過制備型hplc進行純化并冷凍干燥包含希望的產物的餾分，從而提供藥物接頭化合物51(2.7mg，32％)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr9.17分鐘。lc-ms：tr11.25分鐘，m/z(es+)實測值1185.3(m+h)+，m/z(es-)實測值1182.9(m-h)-。n-((s)-1-(((s)-1-((3-((s)-8-((5-(((s)-2-(4-(3-(二甲基氨基)丙氧基)苯基)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-7-甲氧基-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰胺(52)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入酸36(3.7mg，9.7μmol)、eedq(2.9mg，11.6μmol)、和0.4ml包含1％甲醇的無水ch2cl2。在氮氣下攪拌反應1小時；然后添加pbd二聚體50(8.0mg，9.7μmol)并在室溫下攪拌反應6小時，此時，lc-ms顯示出現產物。濃縮反應，然后通過制備型hplc加以純化并冷凍干燥包含希望的產物的餾分，從而提供藥物接頭化合物52(3.1mg，25％)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr9.45分鐘。lc-ms：tr11.75分鐘，m/z(es+)實測值1188.4(m+h)+，m/z(es-)實測值1186.0(m-h)-。方案84-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-(((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)苯甲酰胺(54)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入接頭片段53(7.7mg，20μmol)，將其溶解于0.33ml處于ch2cl2溶劑混合物中的5％meoh中。添加eedq(6.1mg，25μmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應15分鐘，此時，添加pbd二聚體37(12mg，16.5μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應持續另外3小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供54(2.4mg，13％)。tlc：rf＝0.44，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.05％三氟乙酸)：tr11.53分鐘。lc-ms：tr12.61分鐘，m/z(es+)實測值1095.4(m+h)+，m/z(es-)實測值1093.9(m-h)-。(s)-2-(2-碘乙酰氨基)-n-((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)-3-甲基丁酰胺(56)：在火焰干燥的燒瓶中加入接頭55(7.8mg，22μmol)，將其溶解于0.37ml處于ch2cl2溶劑混合物中的5％meoh中。添加eedq(6.8mg，27.5μmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應15分鐘，此時添加pbd二聚體37(13mg，18μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應持續另外4小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至80:20ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供56(3.5mg，18％)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr11.43分鐘。lc-ms：tr12.49分鐘，m/z(es+)實測值1064.6(m+h)+，m/z(es-)實測值1098.9(m+2h2o-h)-。方案96-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-(((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-((5-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(58)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入接頭片段36(19mg，50μmol)，將其溶解于0.33ml處于ch2cl2溶劑混合物中的5％meoh中。添加eedq(12.4mg，50μmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應15分鐘，此時添加pbd二聚體57(12.5mg，16.6μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應持續另外5小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至80:20ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供58(2.1mg，11％)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr12.19分鐘。lc-ms：tr12.58分鐘，m/z(es+)實測值1117.8(m+h)+，m/z(es-)實測值1133.7(m+h2o-h)-。方案10(r)-2-((r)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(60)：在火焰干燥的燒瓶中加入fmoc-d-纈氨酸(200mg，0.59mmol)和5.9ml無水thf。添加n-羥基琥珀酰亞胺(75mg，0.65mmol)，接著添加二異丙基碳二亞胺(0.1ml，0.65mmol)，并在環境溫度下攪拌反應過夜，此時，lc-ms顯示轉化成產物。用ch2cl2稀釋反應混合物并用水(50ml)、鹽水(50ml)洗滌，在硫酸鈉上干燥并濃縮至干燥。該物質無需進一步純化即可使用。lc-ms：tr13.89分鐘，m/z(es+)實測值437.0(m+h)+。將粗fmoc-d-val-osu(0.59mmol)溶解于二甲氧基乙烷(1.5ml)和thf(0.8ml)中。將d-丙氨酸(73mg，0.89mmol)溶解于2.3ml水中并加入反應混合物中，緊接著加入碳酸氫鈉(99mg，1.2mmol)。在室溫下攪拌產生的淤漿過夜，此時，反應澄清并且lc-ms顯示完成。將反應倒入50mlch2cl2中并用50ml0.1mhcl、然后用鹽水洗滌有機層，在硫酸鈉上干燥，然后濃縮至干燥。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化粗產物，用ch2cl2進行洗脫，從而提供60(128mg，54％)。tlc：rf＝0.18，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr9.47分鐘。lc-ms：tr13.09分鐘，m/z(es+)實測值411.1(m+h)+，m/z(es-)實測值409.2(m-h)-。(r)-2-((r)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(61)：將保護的二肽60(70mg，0.37mmol)懸浮于6ml無水ch2cl2中，在氮氣下在冰上冷卻，然后逐滴添加2ml二乙胺。將反應升溫至室溫并在氮氣下攪拌2小時，此時，hplc顯示起始原料消耗。用6ml氯仿稀釋反應并濃縮。將粗反應殘余物再溶解于6ml氯仿中并濃縮兩次，接著在真空管線上干燥2小時。然后將脫保護的二肽溶解于3.7ml無水dmf中。然后添加mc-osu(138mg，0.44mmol)，接著添加二異丙基乙胺(0.32ml，1.9mmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應過夜。通過將反應倒入50ml0.1mhcl中并用乙酸乙酯(50ml，3x)萃取來完成后處理(workup)。用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌合并的有機層，在硫酸鈉上干燥，并濃縮。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化粗產物，用ch2cl2/meoh混合物(99:1至95:5ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供61(14mg，22％)。1hnmr(cd3od)δ(ppm)0.94(d,j＝14hz,3h),0.98(d,j＝14hz,3h),1.29(m,2h),1.39(d,j＝7.4hz,3h),1.61(m,4h),2.05(m,1h),2.25(dt,j＝1.2,7.4hz,2h),3.48(t,j＝7hz,2h),4.19(m,1h),4.37(m,1h),6.78(s,2h)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr10.04分鐘。lc-ms：tr11.22分鐘，m/z(es+)實測值382.1(m+h)+，m/z(es-)實測值380.0(m-h)-。6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((r)-1-(((r)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)己酰胺(62)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入接頭61(9.5mg，25μmol)，將其溶解于0.33ml處于ch2cl2溶劑混合物中的5％meoh中。添加eedq(7.3mg，30μmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應15分鐘，此時，添加pbd二聚體37(12mg，16.5μmol)。在室溫下在氮氣氛下，攪拌反應持續另外3小時，此時，lc-ms顯示轉化成產物。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至80:20ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供62(2.8mg，16％)。tlc：rf＝0.39，處于ch2cl2中的10％meoh。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr11.50分鐘。lc-ms：tr12.50分鐘，m/z(es+)實測值1089.7(m+h)+，m/z(es-)實測值1088.0(m-h)-。方案11(s)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)丙酸(64)：將l-丙氨酸(58mg，0.65mmol)懸浮于6.5ml無水dmf中，然后添加mc-osu35(100mg，0.324mmol)。添加二異丙基乙胺(0.28ml，1.6mmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應過夜。然后用50ml0.1mhcl稀釋反應，然后用乙酸乙酯(50ml，3x)萃取水層。然后用水(50ml)和鹽水(50ml)洗滌合并的有機層，在硫酸鈉上干燥，然后濃縮至干燥。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(97.5:2.5至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供64(25mg，27％)。tlc：rf＝0.25，處于ch2cl2中的10％meoh。1hnmr(cd3od)δ(ppm)1.30(m,2h),1.37(d,j＝7.4hz,3h),1.60(m,4h),2.21(t,j＝7.4hz,2h),3.48(t,j＝7hz,2h),4.35(q,j＝7.4hz,1h),6.78(s,2h)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr9.06分鐘。6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)己酰胺(65)：在火焰干燥的10ml燒瓶中加入接頭64(14mg，50μmol)，將其溶解于0.66ml處于ch2cl2溶劑混合物中的5％meoh中。添加eedq(15mg，60μmol)并在室溫下在氮氣下攪拌反應15分鐘，此時，添加pbd二聚體37(24mg，33μmol)。在室溫下在氮氣氛下攪拌反應持續另外4小時。在1mmchromatotron板上通過徑向色譜法來純化反應，用ch2cl2/meoh混合物(100:0至90:10ch2cl2/meoh)進行洗脫，從而提供65(3.5mg，11％)。分析型hplc(0.1％甲酸)：tr11.40分鐘。lc-ms：tr12.39分鐘，m/z(es+)實測值990.6(m+h)+，m/z(es-)實測值989.0(m-h)-。方案12直接通過馬來酰亞氨基己酰基間隔物連接的pbd二聚體57(方案14)：使用方案2中所述的化學作用，將pbd二聚體57偶聯到馬來酰亞氨基己酸39上。方案136-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-(2-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)己酰胺(68)：在處于ch2cl2(300μl)中的66(10mg，0.013mmol)的混合物中加入dipea和mc-cl(67)(3mg，0.013mmol)。在1小時之后，添加另外3當量的dipea(7μl)和2當量的酰基氯(6mg，0.026mmol)。在1小時之后，添加另外量的dipea(7μl)和酰基氯(6mg，0.026mmol)。在另外3小時之后，將反應混合物直接抽吸到1mm徑向chromatotron板上，并用二氯甲烷，緊接著處于二氯甲烷中的甲醇梯度(1％至5％)進行洗脫。將包含餾分的產物(作為與起始苯胺的混合物)，濃縮至殘余物，并溶解于0.5mldmso、0.5ml乙腈和0.5ml去離子水的混合物中，然后通過制備型hplc進一步純化。收集主峰并合并餾分，冷凍并且冷凍干燥，從而產生2.1mg(18％)：ms(es+)m/z919.2[m+h]+。注意：通過將100mg39溶解于草酰氯(5ml)中來制備酰基氯67。在減壓濃縮之前，添加一滴dmf并在環境溫度下攪拌混合物數小時。添加二氯甲烷并第二次濃縮混合物，從而提供直接使用的灰白色固體：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ6.70(s,2h),3.46(t,j＝7hz,2h),2.82(t,j＝7.2hz,2h),1.72(五重峰,j＝7.6hz,2h),1.61(五重峰，j＝7.4hz,2h),1.35(五重峰，j＝7.6hz,2h)。方案142-(2-氨基乙酰氨基)乙酸叔丁基酯(69)：在處于二氯甲烷(25ml)中的甘氨酸叔丁酯鹽酸鹽(70)(484mg，2.9mmol)的混合物中加入fmoc-gly-oh(71)(0.861mg，2.99mmol)、dipea(756mg，4.35mmol)和hatu(1.3g，3.5mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物16小時，然后倒入乙酸乙酯中并用水(3x)和鹽水(1x)洗滌。在mgso4上干燥有機相，過濾并在減壓下濃縮。在2mm平板上通過徑向色譜法來純化得到的殘余物，用5％甲醇/二氯甲烷洗脫。在減壓下濃縮包含餾分的產物并用20％哌啶/二氯甲烷(10ml)處理1小時，然后在減壓下濃縮，然后在2mm平板上通過徑向色譜法純化兩次，用5％至10％甲醇/二氯甲烷的梯度進行洗脫，從而提供(200mg，37％)：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.62(s,1h),4.00(s,2h),3.39(s,2h),1.47(s,9h)。2-(2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)乙酰氨基)乙酸(72)：在處于dmf(1ml)中的胺69(200mg，0.11mmol)的溶液中加入35(350mg，0.11mmol)，并在環境溫度下攪拌反應混合物2小時。在減壓下濃縮混合物并在1mm平板上通過徑向色譜法進行純化，用二氯甲烷以及處于二氯甲烷中的甲醇梯度(1％至5％)進行洗脫。在減壓下濃縮包含餾分的產物，溶解于二氯甲烷(4ml)中并用三氟乙酸(4ml)處理。在40分鐘之后，在減壓下濃縮混合物并將得到的殘余物溶解于二氯甲烷中，然后濃縮，從而產生22.5mg(19％)的72，為白色固體：1h-nmr(400mhz,cd3od)δ6.79(s,2h),3.93(s,2h),3.89(s,2h),3.49(t,j＝6.8hz,2h),2.26(t,j＝6.8hz,2h),1.61(m,4h),1.34(m,2h)；ms(es+)m/z326.21[m+h]+。6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n-(2-((2-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)氨基)-2-氧代乙基)己酰胺(73)：在處于5％甲醇/二氯甲烷(0.5ml)中的72(15mg，0.046mmol)的混合物中加入eedq(11mg，0.046mmol)，并在環境溫度下攪拌混合物30分鐘，此時，添加37(16mg，0.023mmol)。攪拌反應混合物3小時并在1mm徑向chromatotron板上直接進行純化，用1％至4％甲醇/二氯甲烷梯度進行洗脫，從而產生6.8mg(29％)的73，為黃色固體：ms(es+)m/z1033.57[m+h]+。方案151-((s)-吡咯烷-2-羰基)吡咯烷-2-羧酸(s)-叔丁基酯(74)：在處于二氯甲烷(50ml)中的l-脯氨酸-叔丁酯鹽酸鹽75(0.5g，2.9mmol)的混合物中加入76(0.98g，2.99mmol)、dipea(756mg，4.35mmol)和hatu(1.3g，3.5mmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物16小時。將混合物倒入乙酸乙酯(100ml)中并用0.2nhcl(50ml)、水(50ml)、鹽水(50ml)洗滌，然后在mgso4上干燥。在2mm徑向chromatotron板上進行層析法，用處于己烷中的10％乙酸乙酯進行洗脫。在減壓下濃縮包含產物的餾分，溶解于二氯甲烷(8ml)中，并用哌啶(2ml)處理。攪拌混合物1小時，在減壓下濃縮，并在2mm徑向chromatotron板上進行純化，用5％甲醇/二氯甲烷進行洗脫。這產生200mg(26％)的二肽74：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ4.41(m,1h),4.17(m,1h),3.82(m,1h),3.57(m,4h),3.2(m,1h),2.82(m,1h),2.83-1.65(m,5h),1.44(m,9h)。1-((s)-1-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基)吡咯烷-2-羰基)吡咯烷-2-羧酸(s)-叔丁基酯(77)：在胺74(200mg，0.75mmol)、39(190mg，0.9mmol)和dipea(0.32ml，1.8mmol)的混合物中加入hatu(342mg，0.9mmol)，并在環境溫度下攪拌混合物5小時。將混合物倒入乙酸乙酯(100ml)中并用水(3x100ml)和鹽水(1x100ml)洗滌地。在硫酸鎂上干燥有機相，過濾并濃縮。在2mm徑向chromatotron板上對得到的殘余物進行徑向色譜法，用二氯甲烷、接著處于二氯甲烷中的1％至5％甲醇的逐漸增加的梯度進行洗脫。進行兩次另外的純化，均用處于二氯甲烷中的1％至5％甲醇梯度進行洗脫，首先在2mm平板上，然后在1mm平板上，從而提供113mg(33％)的77，為白色固體：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ4.63(m,1h),4.41(m,1h),3.82(m,1h),3.63(m,1h),3.55(m,1h),3.45(m,3h),2.38-1.83(m,10h),1.70-1.50(m,5h),1.45(m,9h),1.35(m,2h)；ms(es+)m/z462.33[m+h]+。(s)-1-((s)-1-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基)吡咯烷-2-羰基)吡咯烷-2-羧酸(78)：在處于二氯甲烷(4ml)中的叔丁酯77的混合物中加入三氟乙酸(4ml)。在40分鐘之后，通過hplc分析，確定反應完成。在減壓下濃縮混合物并將得到的殘余物溶解于二氯甲烷中，然后第二次濃縮，從而產生37mg(100％)的78，為白色固體：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ6.68(s,2h),4.62(m,2h),3.81(m,1h),3.70(m,1h),3.57(m,2h),3.45(m,2h),2.40-1.91(m,10h),1.70-1.45(m,4h),1.33(m,2h)；ms(es+)m/z406.2[m+h]+。1-(1-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰基)吡咯烷-2-羰基)-n-(4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)吡咯烷-2-羧酰胺(79)：在處于5％甲醇/二氯甲烷(0.4ml)中的78(9.3mg，0.023mmol)的混合物中加入eedq(7mg，0.027mmol)。在環境溫度下攪拌混合物15分鐘，然后添加37(15mg，0.021mmol)。攪拌混合物4小時，用二氯甲烷(2ml)稀釋反應混合物，并直接抽吸到1mm徑向chromatotron板上。用處于二氯甲烷中的1％至5％甲醇梯度洗脫產物，從而提供6.8mg(29％)的79，為黃色固體：ms(es+)m/z1113.51[m+h]+。方案16(s)-5-(烯丙氧基)-2-((s)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-氧代戊酸(80)：在2-氯三苯甲基樹脂(1.0g，1.01mmol)懸浮在二氯甲烷(10ml)中的混合物中加入fmoc-glu-(oallyl)-oh(81)(409mg，1.0mmol)和dipea(173μl，1.0mmol)。搖動反應混合物5分鐘，并添加另外部分的dipea(260μl，1.5mmol)，然后搖動混合物1小時。添加甲醇(0.8ml)并搖動混合物5分鐘，然后過濾并用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、二乙醚(6x)洗滌，并且在減壓下干燥。使產生的樹脂經受處于二氯甲烷(10ml)中的20％哌啶持續1小時，然后過濾并用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、二乙醚(6x)洗滌，并且在減壓下干燥。向處于dmf(7ml)中的fmoc-val-oh(82)(1.03g，3.30mmol)混合物中加入dipea(1.0ml)和hatu(1.1g，3.03mmol)。在充分混合之后，將溶液抽吸到包含前面制備的樹脂的10ml注射器中。將混合物蓋上蓋子并搖動16小時。用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)和醚(6x)洗滌樹脂。分離小部分(10mg)并用20％tfa/二氯甲烷處理，通過lc-ms分析得到的溶液，顯示一個高純度峰，該峰顯示正確的質量(ms(es+)m/z509.28[m+h]+)。然后，用20％哌啶/dmf(8ml)處理剩余樹脂持續2小時，然后用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、二乙醚(6x)洗滌并在減壓下干燥。制備處于二氯甲烷(10ml)中的氯甲酸烯丙酯(529μl，5.05mmol)、dipea(1.7ml，10mmol)的混合物，并抽吸到包含上述樹脂的注射器中。將混合物蓋上蓋子并且搖動。在大約2小時之后，排出反應混合物，并用二氯甲烷(6x)洗滌。用20％tfa/二氯甲烷切割小部分的樹脂(～10mg)并通過lc-ms分析起始原料和產物的質量。主要成分仍然是未反應的胺，所以使樹脂再次經受上述條件。在4小時之后，用二氯甲烷(6x)洗滌樹脂，然后用處于二氯甲烷中的5％tfa(4x7ml)重復處理。在減壓下濃縮得到的溶液。在2mm徑向chromatotron板上純化混合物，用5％甲醇/二氯甲烷進行洗脫，從而產生107mg的80：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.05(s,1h),5.90(m,2h),5.57(d,1h),5.29(d,j＝14.7hz,2h),5.22(t,j＝10.9hz,2h),4.59(m,5h),4.02(m,1h),2.60-2.40(m,2h),2.37-2.18(m,1h),2.17-2.02(m,2h),0.96(d,j＝6.4hz,3h),0.93(d,j＝6.6hz,3h)；ms(es+)m/z371.12[m+h]+。4-((s)-2-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(s)-烯丙基酯(83)：在處于5％甲醇/二氯甲烷(1ml)中的酸80(30，0.04mmol)的混合物中加入eedq(20mg，0.082mmol)。在環境溫度下拌攪混合物30分鐘，然后添加37(30mg，0.04mmol)，并攪拌混合物大約5小時。通過直接抽吸到1mm徑向chromatotron板上進行部分純化并用1％至5％甲醇/二氯甲烷梯度進行洗脫，從而提供所希望的產物和37的混合物(26mg；分別～3:1)，它無需進一步純化即可使用。(s)-4-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)-5-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(84)：在處于無水二氯甲烷(3ml)中的83和37(26mg)的混合物中加入ph3p(0.3mg，0.0012mmol)、吡咯烷(4μl，0.048mmol)和四鈀(tetrakispalladium)(0.7mg，0.6μmol)。在2小時之后，添加另外量(0.7mg，0.6μmol)的四鈀，并攪拌反應持續另外1小時，然后在減壓下濃縮。將殘余物溶解于dmso(1ml)、含有0.05％甲酸的乙腈(1ml)和含有0.05％甲酸的水(1ml)中，并通過制備型反相hplc進行純化。收集產物的單個餾分并冷凍干燥，從而產生6mg(14％，兩個步驟)的84：ms(es+)m/z1078.6[m+h]+。(s)-4-((s)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(85)：在處于dmf(200μl)中的84(6mg，6μmol)和35(2mg，6μmol)的混合物中加入dipea(3μl，18μmol)并在環境溫度下攪拌反應混合物。在1小時之后，添加另外當量的35(2mg，6μmol)并在環境溫度下繼續攪拌反應3小時。添加第三當量的35(2mg，6μmol)并攪拌混合物大約1小時，在減壓下濃縮，溶解于二氯甲烷中，直接抽吸到1mm徑向chromatotron板上，然后用處于二氯甲烷中的5％甲醇進行洗脫。這產生2.5mg(36％)高純度85：ms(es+)m/z1147.49[m+h]+。(21s,24s)-1-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-21-異丙基-24-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基甲酰基)-3,19,22-三氧代-7,10,13,16-四氧雜-4,20,23-三氮雜二十七-27-酸(86)：在處于dmf(200μl)中的84(8mg，8.4μmol)和mal-peg4-nhs(87)(6.5mg，12.6μmol)的混合物中添加dipea(4.3μl，25μmol)。在環境溫度下攪拌反應混合物2小時，并在減壓下濃縮。將得到的殘余物溶解于二氯甲烷中并抽吸到1mm徑向chromatotron板上。該物質是極性的并且在硅膠基chromatotron板上并不進行層析。用甲醇洗脫平板用來回收在減壓下分離的混合物。通過制備型反相hplc來純化殘余物質。洗脫單主峰并合并餾分，冷凍并且冷凍干燥成殘余0.9mg(8％)的86：ms(es+)m/z1353.04[m+h]+。方案17(s)-6-(二甲基氨基)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)己酸(88)：在處于ch2cl2(10ml)中的2-氯三苯甲基樹脂(1g，1.01mmol)的混合物中添加fmoc-lys(me)2-oh(89)(432mg，1.0mmol)和dipea(433μl，2.5mmol)。搖動反應混合物1小時。添加甲醇(0.8ml)并搖動混合物持續另外5分鐘，然后過濾并用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、二乙醚(6x)洗滌，并且在減壓下干燥。使干燥的樹脂經受處于dmf(10ml)中的20％哌啶持續1小時，然后過濾并用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、二乙醚(6x)洗滌。在處于dmf(7ml)中的39(3.0mmol，633mg)的混合物中添加dipea(1.0ml)和hatu(1.1g，3.03mmol)。在充分混合之后，將溶液抽吸到包含上述樹脂的10ml注射器中。將混合物蓋上蓋子，搖動16小時，過濾并用dmf(6x)、二氯甲烷(6x)、和乙醚(6x)洗滌樹脂。用5％tfa/二氯甲烷(6mlx5)重復處理樹脂，搖動1分鐘，然后過濾。在減壓下并且在高真空下濃縮得到的溶液。通過制備型反相hplc來純化物質從而產生208mg的88：1h-nmr(400mhz,cd3oh/cdcl31:1混合物)δ6.73(s，2h)，4.41(m，1h)，3.48(t，2h)，3.31(s,1h),3.03(m,2h),2.84(s,6h),2.22(m,2h),1.87(m,2h),1.78-1.52(m,6h),1.43(m,2h),1.31(五重峰，2h)；ms(es+)m/z386.28[m+h]+。(s)-6-(二甲基氨基)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)己酰氨基)-n-(4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)己酰胺(90)：在處于5％甲醇/二氯甲烷(400μl)中的88(9.3mg，0.023mmol)的混合物中加入eedq(7mg，0.027mmol)。在環境溫度下攪拌混合物30分鐘然后添加37(15mg，0.021mmol)。在4小時之后，在減壓下濃縮混合物，溶解于dmso(1ml)、乙腈(2ml，包含0.05％甲酸)和水(1ml，包含0.05％甲酸)的混合物中，然后通過反相hplc(方法a)加以純化。包含產物的餾分被37污染，所以冷凍干燥這些餾分成為殘余物并如上所述再純化，從而產生0.5mg(2％)純90：ms(es+)m/z537.46[m+h]/2+。方案18((s)-1-(((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸烯丙基酯(91)：在處于5％甲醇/二氯甲烷(1ml)中的92(45mg，0.123mmol)的混合物中加入eedq(30.4mg，0.123mmol)。在環境溫度下攪拌混合物30分鐘，然后添加37(30mg，0.041mmol)。攪拌反應混合物大約5小時，然后在1mm徑向chromatotron板上進行純化，用5％甲醇/二氯甲烷進行洗脫，從而產生22mg(55％)的91，它未進行表征而直接地使用。1-(3-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)丙酰氨基)-n-((s)-1-(((s)-1-((4-((s)-7-甲氧基-8-(3-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)丙氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)-3,6,9,12-四氧雜十五烷-15-酰胺(93)：在處于無水二氯甲烷(3ml)中的91(22mg，0.022mmol)的溶液中加入ph3p(0.3mg，0.0012mmol)、吡咯烷(4μl，0.048mmol)和四鈀(0.7mg，6μmol)。在大約2小時之后，在1mm徑向chromatotron板上純化反應混合物，用5％至10％甲醇/二氯甲烷進行洗脫。收集主帶并濃縮成殘余物，將其溶解于dmf(0.2ml)中并與nhs酯87(10mg，0.19mmol)反應。攪拌反應30分鐘，濃縮并在1mm平板上通過徑向色譜法進行純化，用5％甲醇/二氯甲烷進行洗脫，從而產生3.2mg(11％)的93：ms(es+)m/z1294.7[m+h]+。方案19(e)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)-n'-(4-((s)-7-甲氧基-8-((5-(((s)-7-甲氧基-2-(4-甲氧基苯基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-8-基)氧基)戊基)氧基)-5-氧代-5,11a-二氫-1h-吡咯并[2,1-c][1,4]苯并二氮雜卓-2-基)苯亞甲基)己烷酰肼(94)：在0℃下在處于5％甲醇/二氯甲烷中的醛95(5.4mg，7μmol)的混合物中加入酰肼-tfa鹽96(4.5mg，14μmol)。將反應混合物升溫至環境溫度并攪拌5小時，然后在減壓下濃縮，并且在硅膠柱上純化，用3％甲醇/二氯甲烷進行洗脫，從而產生2.2mg(32％)的94：ms(es+)m/z974.49[m+h]+。方案202-((s)-2-氨基-3-甲基丁酰氨基)丙酸(s)-叔丁基酯(97)：在處于二氯甲烷(5ml)中的丙氨酸-o-叔丁酯鹽酸鹽(98)(500mg，2.76mmol)的混合物中加入fmoc-val-osu(99)(1.09g，2.51mmol)。添加dipea(0.96ml，5.5mmol)并在環境溫度下攪拌反應混合物16小時。將混合物倒入二氯甲烷(100ml)中并用1nhcl(50ml)和水(50ml)洗滌，然后在硫酸鎂上干燥。在2mm徑向chromatotron板上對該物質進行層析，用1％至5％的甲醇/二氯甲烷梯度進行洗脫，合并包含產物的餾分并濃縮。將得到的殘余物溶解于二氯甲烷(16ml)中并添加哌啶(4ml)。在減壓濃縮之前，攪拌混合物10分鐘。在2mm平板上對得到的殘余物進行層析，首先用氨飽和的二氯甲烷，接著用處于氨飽和的二氯甲烷中的5％甲醇進行洗脫，從而產生494mg(2.02mmol，81％，兩個步驟)的97：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.78(bs,1h),4.47(m,1h),3.30(d,1h),2.30(m,1h),1.38(d,3h),1.47(s,9h),1.00(d,j＝7.0hz,3h),0.84(d,j＝6.9hz,3h)。2-((s)-2-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(s)-叔丁基酯(100)：在97(100mg，0.41mmol)和4-馬來酰亞氨基苯甲酸(101)(98mg，0.45mmol)的混合物中加入二氯甲烷(5ml)，接著加入tbtu(157mg，0.49mmol)和dipea(212ul，1.23mmol)。在環境溫度下攪拌混合物16小時，然后在2mm徑向chromatotron板上進行純化，用處于己烷中的50％乙酸乙酯進行洗脫，從而產生95mg(51％)的100：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.85(d,j＝6.6hz,2h),7.42(d,j＝6.6hz,2h),6.81(s,2h),6.38(bs,1h),4.43(m,2h),2.14(sept,j＝6.6hz,1h),1.41(s,9h),1.31(d,j＝7.0hz,3h),0.98(m,6h)；ms(es-)m/z441.90[m-h]-。(r)-2-((s)-2-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(53)：在處于二氯甲烷(5ml)中的100(47mg，0.11mmol)的混合物中加入三氟乙酸(5ml)并通過tlc(處于己烷中的50％乙酸乙酯，在高真空下在向下泵送tlc平板持續5分鐘之后)來監測反應混合物。在75分鐘之后，通過tlc不能檢測出起始物質。使用相同條件第二次進行反應并合并來自兩個反應的物質，然后在2mm徑向chromatotron板上純化，用處于二氯甲烷中5-10％甲醇的梯度進行洗脫。產率是42mg(49％)的53：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ7.92(d,j＝6.6hz,2h),7.51(d,j＝6.6hz,2h),7.0(m,1h),6.89(s,2h),6.70(s,1h),4.60m,1h),2.22(m,1h),1.18(d,j＝6.6hz,3h),1.04(m,6h)；ms(es+)m/z388.02[m+h]+。(s)-2-((s)-2-(2-碘乙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(102)：在處于二氯甲烷中的97(100mg，0.41mmol)的混合物中加入碘乙酰胺-nhs酯(103)(115mg，0.41mmol)，并在環境溫度下攪拌混合物。在30分鐘之后，將混合物抽吸到1mmchromototron平板上，并用處于己烷中的乙酸乙酯(1:1)進行洗脫。收集單帶并證實結構：1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ6.70(d,j＝7.8hz,1h),6.27(d,j＝7.0hz,1h),4.45(m,1h),4.26(dd,j＝8.6,6.3hz,1h),3.72(四重峰，j＝11.3hz,2h),2.13(七重峰，j＝6.5hz,1h),1.47(s,9h),1.38(d,j＝7.1hz,3h),0.99(m,6h)；ms(es+)m/z412.87[m+h]+。(s)-2-((s)-2-(2-碘乙酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(55)：參見用于合成(r)-2-((s)-2-(4-(2,5-二氧代-2,5-二氫-1h-吡咯-1-基)苯甲酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)丙酸(53)的步驟。這產生22mg(15％，兩個步驟)：1h-nmr(400mhz,d6-dmso)δ8.27(d,j＝9.4hz,1h),4.24(m,2h),3.97(bs,2h),3.83(d,j＝9.4hz,1h),3.71(d,j＝9.6hz,1h),2.07(m,1h),1.33(d,j＝7.3hz,3h),0.93(d,j＝6.7hz,3h),0.89(d,j＝6.9hz,3h)；ms(es-)m/z354.84[m-h]-。方案21通過脂肪族胺連接的pbd二聚體(方案21)。用肽接頭、葡糖苷酸接頭、和/或取決于mab降解釋放的接頭(即，不可切割接頭)，來合成包含脂肪族胺(如芐胺(實施例9))的pbd二聚體。通過芐胺結合的藥物接頭可以包括：(1)使用類似于方案1的化學作用可切割的肽；(2)與馬來酰亞氨基己酰基直接附著(不可切割的接頭)(方案2)；(3)葡糖苷酸接頭，如在方案6中所述制備。方案22通用肽連接的2-、3-、和4-苯胺pbd二聚體(方案22)。使用在方案1中所述的化學作用，或如在方案2中舉例說明的，直接與馬來酰亞氨基己酸附連，將在2-、3-、和4-位置處具有苯胺的pbd二聚體結合到肽類接頭上。實施例14：pdb二聚體結合物的制備如前所述(參見doroninaetal.,naturebiotechnology,21,778-784(2003))或如下所述，制備抗體-藥物結合物。簡言之，對于馬來酰亞胺藥物-接頭，在37℃下，用三(羧乙基)膦鹽酸鹽(tcep)還原處于包含50mm硼酸鈉(ph7.4)的pbs中的mab(4-5mg/ml)。通過與5,5’-二硫代二(2-硝基苯甲酸)反應來監測反應進展(該反應還原鏈間二硫化物)，并允許進行直至實現希望水平的巰基/mab。然后將還原的抗體冷卻至0℃并用1.5當量的馬來酰亞胺藥物-接頭/抗體巰基進行烷基化。在1小時之后，通過添加5當量的n-乙酰基半胱氨酸來淬滅反應。在pd-10柱上通過凝膠過濾來去除淬滅的藥物-接頭。然后通過0.22μm注射器過濾器來無菌過濾adc。分別在280nm和329nm下通過光譜分析來確定蛋白濃度，在280nm下校正藥物吸光度的貢獻。使用尺寸排阻層析法來確定抗體聚集的程度并且rp-hplc證實了不存在剩余的nac淬滅的藥物-接頭。對于鹵素乙酰胺類藥物接頭，通常地如下進行結合：在處于10mmtris(ph7.4)、50mmnacl、和2mmdtpa中的還原和再氧化的抗體(已經通過s239c取代在重鏈中引入半胱氨酸，(見下文))的10mg/ml溶液中加入0.5體積的丙二醇。立即地在結合之前制備處于二甲基乙酰胺中的乙酰胺類藥物接頭的10mm溶液。將與加入抗體溶液中等量的丙二醇加入6倍摩爾過量的藥物接頭中。將稀釋的藥物-接頭溶液加入抗體溶液中并使用1mtris(ph9)將ph值調節至8.0-8.5。在37℃進行結合反應持續45分鐘。通過還原和變性反相plrp-s層析法來證實結合。用quadrasilmp樹脂(sigmaaldrich；product#679526)去除過量的藥物接頭并利用pd-10脫鹽柱(geheathcare；product#17-0851-01)將緩沖液交換為10mmtris(ph7.4)、50mmnacl和5％丙二醇。具有引入的半胱氨酸的工程化higg1抗體：通過添加10當量的tcep和1mmedta并用1mtris緩沖液(ph9.0)將ph值調節至7.4來完全還原在重鏈(h1f6d)的位置239處包含半胱氨酸殘基的cd70抗體。在37℃下1小時孵化之后，將反應冷卻至22℃并添加30當量的脫氫抗壞血酸，用來選擇性地再氧化天然二硫化物，同時留下處于還原狀態的半胱氨酸239。用1mtris緩沖液(ph3.7)將ph值調節至6.5并且在22℃下允許反應進行1小時。然后，通過添加1mtris緩沖液(ph9.0)，將溶液的ph值再次提高至7.4。將3.5當量的處于dmso中的pbd藥物接頭放置在適當的容器中，以便在加入反應之前用丙二醇稀釋。為了保持pbd藥物接頭的可溶性，用丙二醇首先稀釋抗體本身至33％的終濃度(例如，如果抗體溶液是在60ml反應體積中，則添加30ml丙二醇)。然后將相同體積的丙二醇(在這個實例中為30ml)加入pbd藥物接頭中，作為稀釋劑。在混合之后，將處于丙二醇中的pbd藥物接頭溶液加入抗體溶液中以進行結合；丙二醇的終濃度為50％。允許反應進行30分鐘，然后通過添加5當量n-乙酰基半胱氨酸來淬滅。然后通過30kd膜通過超濾來純化adc。(需要注意的是，對于任何特定的pbd，可以減小在反應中使用的丙二醇的濃度，因為它的唯一目的是保持藥物接頭在水性介質中的溶解度)。實施例15：確定選擇的結合物的體外活性使用刃天青(sigma,st.louis,mo,usa)還原測定法(參考文獻：doroninaetal.,naturebiotechnology,2003,21,778-784)來評估選擇的抗體藥物結合物的體外細胞毒性活性。如前面實施例13中所述，制備抗體藥物結合物。對于96小時測定，在包含補充有20％fbs的150μlrpmi1640的96孔板中接種在對數期生長下培養的細胞持續24小時。以4x工作濃度制備adc在細胞培養基中的連續稀釋物；將50μl每種稀釋物加入96孔板中。在添加adc之后，在37℃下，將細胞與測試物品一起孵化4天。然后將刃天青加入每個孔中以實現50μm的終濃度，并且在37℃下將平板孵化另外4小時。然后在fusionht酶標儀上(packardinstruments,meridien,ct,usa)，使用分別地530nm和590nm的激發波長和發射波長，針對染料還原程度讀取平板。ic50值(重復三次確定)在本文中定義為相對于未處理的對照，導致細胞生長減少50％的濃度。參考表4(下文)，顯示了使用96小時測定法得到的具有對-苯胺pbd二聚體的adc的體外細胞毒性。針對cd70+cd30-細胞系和對照cd70-cd30-細胞系測試了adc。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)、cd30抗體、嵌合ac10(參見公開的美國申請號2008-0213289)和在氨基酸重鏈位置239(按照eu編號系統)處具有引入的半胱氨酸殘基的cd70抗體(人源化1f6)(表示為h1f6d)。與具有馬來酰亞胺基或乙酰胺類接頭的結合物(分別為化合物40和41)相比較，具有馬來酰亞胺基-肽接頭的結合物(藥物接頭化合物38)具有更低的ic50。具有來自對-苯胺pbd二聚體37的藥物接頭的adc的體外細胞毒性活性：表4.在cd70+細胞系上的體外細胞毒性活性(ng/ml)，所有adc2藥物/mab參考表5，顯示了使用96小時測定得到的在cd30+細胞系上與pbd二聚體的adc結合物的體外細胞毒性。針對cd30+cd70+細胞系和cd70-cd30+細胞系測試了adc。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)和cd30抗體、嵌合ac10(參見公開的美國申請號2008-0213289)。與具有馬來酰亞胺基或乙酰胺類接頭的結合物(分別為化合物40和41)相比較，具有馬來酰亞胺基-肽接頭的結合物(藥物接頭化合物38)通常具有更低的ic50。表5.在cd30+細胞系上的體外細胞毒性活性(ng/ml)，所有adc2藥物/mab具有來自間-苯胺pbd二聚體42的藥物接頭的adc的體外細胞毒性活性：參考表6，顯示了使用96小時測定獲得在cd30+細胞系上包含pbd二聚體的adc的體外細胞毒性。針對cd30+cd70+細胞系和cd70-cd30+細胞系測試了活性。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)和在氨基酸重鏈位置239(按照eu編號系統)處具有引入的半胱氨酸殘基的cd70抗體(人源化1f6)(表示為h1f6d)。與具有馬來酰亞胺基類接頭的結合物(化合物44)相比較，具有馬來酰亞胺基-肽接頭(藥物接頭化合物43)和葡糖苷酸接頭(48)的結合物通常具有更低的ic50。表6.在cd70+細胞系上體外細胞毒性活性(ng/ml)具有來自對-和間-苯胺pbd二聚體38和42(分別地)的藥物接頭的adc的體外細胞毒性活性：參考表7，顯示了使用96小時測定獲得的在cd70+細胞系上包含pbd二聚體的adc的體外細胞毒性。針對cd70+細胞系l428和786o以及cd70-aml細胞系測試了活性。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)和在氨基酸重鏈位置239(按照eu編號系統)處具有引入的半胱氨酸殘基的cd70抗體(人源化1f6)(表示為h1f6d)。與具有帶有對-苯胺的馬來酰亞胺基-肽接頭的那些結合物(藥物接頭化合物38)并相比較，具有帶有間-苯胺的馬來酰亞胺基-肽接頭的結合物(藥物接頭化合物43)具有稍低的活性。將間-苯胺化合物的載藥量降低至2/抗體會降低活性。與具有馬來酰亞胺基類接頭的結合物(化合物39)相比較，具有對-苯胺化合物(48)的葡糖苷酸接頭的結合物通常具有更低的ic50。另外，對-苯胺化合物(54)的芳基馬來酰亞胺在這些細胞系上沒有活性。另外，與結合物h1f6-43相比較，具有直接結合到化合物42上的馬來酰亞胺基接頭的結合物具有降低的活性(數據未示出)。表7.在cd70+細胞系上的體外細胞毒性活性(ng/ml)具有來自苯胺連接的pbd二聚體的藥物接頭的adc的體外細胞毒性活性。參考表8，顯示了使用96小時測定獲得的在cd70+細胞系上包含pbd二聚體的adc的體外細胞毒性。針對cd70+細胞系caki-1和l428以及cd70-細胞系測試了活性。所使用的抗體是在氨基酸重鏈位置239(按照eu編號系統)處具有引入的半胱氨酸殘基的cd70抗體(人源化1f6)(表示為h1f6d)。與通過對-苯胺連接的可切割接頭連接的adc(化合物54)相比較，通過在鄰位的胺通過不可切割接頭連接pbd(化合物68)會顯著降低活性。具有可切割接頭的化合物73和85顯示與化合物54可比較的活性；這兩種化合物均通過對-苯胺連接。與化合物54相比較，具有需要更嚴格切割的可切割接頭的化合物，化合物79和90，顯示稍降低的活性。表8.在cd70+細胞系上體外細胞毒性活性(ng/ml)具有來自苯胺連接的pbd二聚體的藥物接頭的adc的體外細胞毒性活性。參考表9，顯示了使用96小時測定獲得的在cd70+細胞系上包含pbd二聚體的adc的體外細胞毒性。針對cd70+細胞系caki-1和l428以及兩種cd70-白血病細胞系測試了活性。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)和在氨基酸重鏈位置239(按照eu編號系統)處具有引入的半胱氨酸殘基的cd70抗體(人源化1f6)(表示為h1f6d)。具有通過乙酰胺連接到抗體上的可切割接頭的化合物56，顯示與化合物38可比較的活性。在此測定中，間-苯胺連接的pbd二聚體的葡糖苷酸連接形式，化合物48，顯示很少的活性。在pbd橋中具有5個亞甲基的化合物58，顯示出與在pbd橋中具有3個亞甲基的化合物38可比較的活性。表9：在cd70+細胞系上的體外細胞毒性活性(ng/ml)實施例16：確定選擇的結合物的體內細胞毒性按照動物管理和使用委員會規定在由實驗動物評估和認可管理協會完全授權的設施中進行所有研究。首先評估體內耐受性以確保在臨床相關劑量下結合物是耐受的。用在含有0.01％tween20的pbs中配制的不斷提高劑量的adc來治療balb/c小鼠。在藥物治療之后，針對重量減輕監測小鼠；將體重減輕20％或患病的其他跡象的那些小鼠安樂處死。所使用的抗體是cd70抗體、人源化1f6(參見公開的美國申請號2009-148942)和cd30抗體、嵌合ac10(參見公開的美國申請號2008-0213289)。參考圖1，顯示了使用cac10-val-ala-sg3132(2)(cac10-化合物38)體重減輕研究的結果(在iv或ip交錯開始之后的給藥方案)。以5mgip或iv給藥給予單劑量結合物導致很少的體重減輕。更高劑量的結合物(15mg/kg)在小鼠體內引起體重減輕。參考圖2，顯示了使用h1f6-val-ala-sg3132(2)(h1f6-化合物38)體重減輕研究的結果(在ip交錯開始之后的給藥方案)。以5mgip給藥給予單劑量結合物導致一定程度體重減輕。更高劑量的結合物(10mg/kg)在小鼠體內引起顯著體重減輕。在兩個cd70+腎細胞癌異種移植模型中進行治療研究。將腫瘤(786-o和caki-1)片段植入裸鼠的右側腹。在第8天(786-o)或第9天(caki-1)將小鼠隨機分配到研究組(n＝5)中，每組平均約100mm3。按照q4dx4時間表，ip給予adc或對照。使用公式(lxw2)/2來確定腫瘤體積(為時間的函數)。當腫瘤體積達到1000mm3時，將動物安樂處死。在植入后約100天終止顯示持久消退的小鼠。參考圖3，顯示了使用h1f6-val-ala-sg3132(2)(h1f6-化合物38)結合物獲得的治療研究結果(h1f6-val-ala-sg3132(2)對裸鼠體內786o腎細胞癌腫瘤的效力)。還使用對照結合物，cac10-val-ala-sg3132(2)(cac10-化合物38)。以0.1mg/kg給予h1f6結合物的小鼠顯示一定程度的腫瘤減小，而以0.3mg/kg和1mg/kg更高劑量給藥看起來顯示完全地腫瘤減小。與h1f6結合物相比較，對照結合物(未結合)具有較小活性。參見圖4，顯示了使用h1f6-mc-val-ala-sg3132(2)(h1f6-化合物38)結合物獲得的治療研究結果(h1f6-1902(2)對雌性裸鼠體內caki1(rcc)腫瘤的效力)。還使用對照結合物，cac10-mc-val-ala-sg3132(2)(cac10-化合物38)。以1mg/kg給予h1f6結合物的小鼠看起來顯示完全地腫瘤減小。分別地以0.3mg/kg和0.1mg/kg給予更低劑量的小鼠顯示較小的腫瘤減小。與以類似劑量給予h1f6結合物相比較，對照結合物(未結合)具有較少活性，雖然與以更低劑量給予h1f6結合物相比較，它顯示更高的活性。與以更高劑量給予h1f6-vc-mmae結合物(公開的美國申請號2009-0148942)相比較，h1f6結合物也具有更高的活性。參考圖5，顯示了與雙加載的未結合對照，結合到相同化合物上(h00d-38)的h00d相比較，使用連接到化合物38上的雙加載抗體h1f6d(h1f6d-38)獲得的治療研究結果(在患有皮下caki1腫瘤的裸鼠體內h1f6d-38adc的活性)。模型是裸鼠體內的caki皮下模型。劑量是0.1、0.3和1mg/kgq7dx2。h1f6結合物的最高的兩個劑量顯示完全消退(為1mg/kg)，并且在0.3mg/kg下顯示顯著的腫瘤延遲。在1mg/kg劑量下，未結合的對照顯示腫瘤延遲。參考圖6，顯示了與雙加載的未結合對照，結合到相同化合物上的h00d(h00d-38)相比較，使用連接到化合物38上的雙加載抗體h1f6d(h1f6d-38)的治療研究結果(在患有皮下786-o腫瘤的裸鼠體內h1f6d-38adc的活性)。模型是裸鼠體內的786-o皮下模型。劑量是0.1、0.3和1mg/kgq7dx2。h1f6結合物的所有三種劑量都顯示完全消退或腫瘤延遲，而未結合的對照顯示腫瘤延遲。當前第1頁12