本發(fā)明涉及農(nóng)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其涉及一種含桃金娘乳液的制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：目前植物病原真菌的防治以有機合成的化學藥劑為主，大量使用化學農(nóng)藥對生態(tài)環(huán)境造成一定的影響，因此從植物中篩選新的抑菌活性物質(zhì)是當今開發(fā)無公害殺菌劑的中藥研究方向之一。在桃金娘果實中具有豐富的間苯三酚等酚類、黃酮類及蒽醌類等對植物病原菌有較好抑制作用的成分。然而酚類物質(zhì)在空氣中容易被氧化，在空氣中暴露會導致其被氧化而導致結(jié)構(gòu)發(fā)生異構(gòu)化而導致變質(zhì)。這類化合物在桃金娘植物細胞中的穩(wěn)定性給我們提示，利用水包油的表面活性劑乳液對酚類物質(zhì)進行提取，從而避免酚類物質(zhì)與空氣接觸。這種提取方式，可以大大提高酚類物質(zhì)的有效利用率。技術(shù)實現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明提供了一種含桃金娘乳液的制備方法，實現(xiàn)了充分提取的提取物有效的抑制病原真菌及美白防曬的效果。本發(fā)明采用的技術(shù)手段如下：一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將桃金娘果和葡桃果洗凈，烘干粉碎；s2、用甲醇溶液進行提取，蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過濾，得第一濾渣和濾液；s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得液體液相；s4、將十二烷基硫酸鈉或硬脂酸中的至少一種配制成水溶液；s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.1～0.3:1的比例稱取，加熱至60～70℃，得混合液；s6、按質(zhì)量比為0.5～1.5:1～2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速攪拌，得乳化液；s7、將乳化液保溫15～20min，降溫調(diào)節(jié)ph值至4.5～6.5，得成品。優(yōu)選地，所述步驟s1中桃金娘果和葡桃果的質(zhì)量比為3:1～5:1。優(yōu)選地，所述步驟s2中，用體積分數(shù)為60～80％的甲醇溶液在水浴搖床45℃～60℃下振蕩提取1～2h。優(yōu)選地，所述步驟s3中液體液相的質(zhì)量濃度為0.1～10％。優(yōu)選地，所述步驟s4中十二烷基硫酸鈉或硬脂酸的質(zhì)量濃度為0.1～15％。優(yōu)選地，所述步驟s6中按質(zhì)量比為0.5～0.8:1～1.2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中。優(yōu)選地，所述步驟s6中在高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌。優(yōu)選地，所述步驟s7中降溫至30～40℃時調(diào)節(jié)ph值。本發(fā)明還提供了一種含桃金娘乳液在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。采用本發(fā)明所提供的一種含桃金娘乳液的制備方法，其制備過程中易于操作。通過甲醇和氯仿的結(jié)合使用對桃金娘果和葡桃果進行提取，且通過反復溶解提取，充分提取出酚類、黃酮類及蒽醌類多種活性化合物成分；加入十二烷基硫酸鈉至提取物中，得到液體液相，預乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸鈉或硬脂酸或結(jié)合配置成穩(wěn)定性較好的混合液，使得混合液對初步乳化的提取物進行進一步乳化的作用，制備的成品充分對酚類化合物、酮類等具有保護作用，使其不被空氣氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防曬化妝品中，具有很好療效的作用，具有穩(wěn)定性。該方法簡化了中間步驟，使制備過程更加高效和環(huán)保，成本也相應(yīng)降低。具體實施方式以下對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。實施例1一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將300g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分數(shù)為60％的甲醇溶液在水浴搖床45℃下振蕩提取1h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為0.1％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為0.1％的十二烷基硫酸鈉配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.1:1的比例稱取，加熱至60℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.5:1的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫15min，降溫至30℃時調(diào)節(jié)ph值至4.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實施例2一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將500g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分數(shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為10％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為15％的硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.3:1的比例稱取，加熱至70℃，得混合液；s6、按質(zhì)量比為1.5:2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫20min，降溫至40℃時調(diào)節(jié)ph值至6.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實施例3一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將400g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分數(shù)為70％的甲醇溶液在水浴搖床50℃下振蕩提取1.5h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為5％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度均為5％的十二烷基硫酸鈉和硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.2:1的比例稱取，加熱至65℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.8:1.2的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫17min，降溫至35℃時調(diào)節(jié)ph值至5.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。實施例4一種含桃金娘乳液的制備方法，包括如下步驟：s1、將300g桃金娘果和100g葡桃果洗凈，烘干粉碎。s2、用體積分數(shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h。蒸發(fā)溶劑得濾渣，再用氯仿溶解濾渣，過濾，得第一濾渣和濾液。s3、將步驟s2的第一濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸鈉，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為8％的十二烷基硫酸鈉和硬脂酸配制成水溶液。s5、將步驟s4的水溶液和去離子水按質(zhì)量比為0.2:1的比例稱取，加熱至70℃，得混合液。s6、按質(zhì)量比為0.8:1的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。s7、將乳化液保溫20min，降溫至30℃時調(diào)節(jié)ph值至5.5，得成品。本發(fā)明還在植物病原真菌和美白防曬中的應(yīng)用。為了驗證本發(fā)明的有益效果，本發(fā)明做了以下實驗：對比例1該對比例與實施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分數(shù)為80％的甲醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h，過濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用甲醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。對比例2該對比例與實施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h，過濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用乙醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。對比例3該對比例與實施例4的區(qū)別在于：s2、用體積分數(shù)為80％的乙醇溶液在水浴搖床60℃下振蕩提取2h過濾，得濾渣和濾液。s3、將步驟s2的濾渣用乙醇溶解，減壓蒸餾溶劑，得第一提取物，濾液進行減壓蒸餾，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得質(zhì)量濃度為8％的液體液相。s4、將質(zhì)量濃度為8％的聚甘油脂肪酸酯配制成水溶液。對比例4該對比例與實施例4的區(qū)別在于：s6、按質(zhì)量比為2:3的比例將步驟s5配制的混合液加入s3液體液相中，高速20000轉(zhuǎn)/分下均勻攪拌，得乳化液。1材料與方法1.1供試菌種主要為甘藍黑斑、煙草黑脛、辣椒炭疽、水稻胡麻葉、金桔沙皮、甘蔗鳳梨、玉米大斑、茶輪斑以及貢柑鏈格等病原真菌。1.2抑制活性測試將培養(yǎng)好的致病菌用培養(yǎng)液進行稀釋，稀釋度為1:500-1:1000，將稀釋后的含菌培養(yǎng)液分別定量加至96孔板的各個孔中，將實施例4的乳液配制成1mg/ml，分別取定量加至各個孔中。加完后置于恒溫培養(yǎng)箱中28℃恒溫培養(yǎng)48h，而后用酶標儀在630nm下測各孔吸光度，計算生長抑制率。2結(jié)果與分析2.1含桃金娘乳液抑菌活性見表1：含桃金娘果和葡桃果的提取物制備的乳液對孢子萌發(fā)抑制率和菌絲生長抑制率大都在80％以上，表明該乳液對病原菌孢子萌發(fā)和菌絲生長均表現(xiàn)較好的抑制效果。2.2病原真菌(甘藍黑斑)抑制活性測試：計算實施例1～4和對比例1～4的病原真菌的生長抑制率，見表2：組別孢子萌發(fā)抑制率/％菌絲生長抑制率/％實施例183.685.4實施例285.489.7實施例386.390.8實施例489.392.4對比例170.272.3對比例271.675.3對比例365.468.7對比例472.373.5由上表可知，本發(fā)明乳液具有很好的抑制真菌的效果，通過本發(fā)明的制備步驟，使得桃金娘果和葡桃果的多種提取物充分提取出來，不同溶劑制備的提取物中，含量也會不同，主要是因為通過其操作步驟、溶劑的極性與其活性物質(zhì)相匹配，通過預乳化和乳化的作用，使多種提取物不易被氧化，使得制備得的乳液具有抑制真菌的效果。本發(fā)明還做了以下實驗：一、依據(jù)實施例4的制備方法，采用不同極性溶劑提取物對真菌的生長抑制情況如下表3所示：植物病原真菌甲醇乙醇氯仿乙醚乙酸乙酯甲醇+氯仿甘藍黑斑80.175.470.460.262.385.9煙草黑脛76.778.173.172.170.386.7辣椒炭疽76.572.473.668.070.586.4水稻胡麻葉82.176.475.171.368.590.1金桔沙皮80.778.270.272.470.688.3甘蔗鳳梨82.176.373.868.673.592.8玉米大斑80.570.571.570.962.990.8茶輪斑73.770.674.165.365.893.4貢柑鏈格74.975.176.562.772.894.2由上表可知，在甲醇和氯仿溶解劑制備的乳液對植物病原真菌具有較好的抑制作用，抑制率達85％以上，而其它溶劑提取物制備的乳液抑制效果差，表明抑制菌絲生長的活性物質(zhì)可能只集中溶解在甲醇和氯仿極性成分中。二、乳液的抗紫外線性能根據(jù)能量的大小，紫外線分為3個區(qū)域，為uv-a區(qū)域，波長為320～400nm，日光能量最低，一般只會使皮膚曬黑；二是能量較高的uvb區(qū)域，波長290～320nm，它會曬黑曬傷皮膚；三是波長為200～290nm的uvc區(qū)域，日光能量最高，所以對皮膚的殺傷力也很大。設(shè)置空白例1：將未涂抹桃金娘乳液的實驗組為空白實驗1。將實施例1～4、對比例3涂抹在載玻片上，掃描基線后，掃描樣品在uva、uvb、uvc內(nèi)的紫外吸收平均值。檢測結(jié)果見表4：通過表4的結(jié)果顯示，實施例1～4制得的乳液對紫外線吸收效果好，具備較好的防曬功效，對比例3只采用單一的乙醇進行提取，且沒有對提取物進行預乳化和乳化的作用，通過比較本發(fā)明較實施例3對紫外線的吸收效果較好。三、乳液對酪氨酸酶抑制活性測定酪氨酸酶是一種氧化還原酶，酪氨酸酶氧化可以促進l-酪氨酸生成黑色素，在酪氨酸形成黑色素的過程中，酪氨酸酶能促使l-酪氨酸生產(chǎn)l-多巴并進一步作用使l-多巴形成巴醌，多巴醌最終生成黑色素。抑制率的計算公式：[1-(t2-t1)/(c2-c1)]*100％c1是緩沖溶液和酪氨酸酶提取液的吸光度值，c2表示生成的黑色素的吸光度值，以c1為參比測c2的吸光度值即為c2-c1，表示在扣除酪氨酸酶提取液的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。t1是加入樣品、酪氨酸酶提取液和緩沖溶液的吸光度值，t2是經(jīng)過樣品抑制后生成的黑色素的吸光度值，同樣的以t1為參比測t2的吸光度值得到t2-t1，表示在扣除樣品和酪氨酸酶提取液吸光度的影響下，經(jīng)過樣品的抑制后的黑色素的吸光度值。實施例1至實施例4以及對比例1至對比例4獲得的樣品溶液在酪氨酸酶抑制活性測定中的抑制率結(jié)果如表5所示：實施例1至實施例4獲得的含桃金娘和葡桃提取物的乳液對酪氨酸酶抑制能力強，可以用于皮膚美白。綜上所述，采用本發(fā)明所提供的本發(fā)明公開了一種含桃金娘乳液的制備方法，其制備過程中易于操作。通過甲醇和氯仿的結(jié)合使用對桃金娘果和葡桃果進行提取，且通過反復溶解提取，充分提取出酚類、黃酮類及蒽醌類多種活性化合物成分；加入十二烷基硫酸鈉至提取物中，得到液體液相，預乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸鈉或硬脂酸或結(jié)合配置成穩(wěn)定性較好的混合液，使得混合液對初步乳化的提取物進行進一步乳化的作用，制備的成品充分對酚類化合物、酮類等具有保護作用，使其不被空氣氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防曬化妝品中，具有很好療效的作用，具有穩(wěn)定性。該方法簡化了中間步驟，使制備過程更加高效和環(huán)保，成本也相應(yīng)降低。避免了其它化學物質(zhì)農(nóng)藥的使用對環(huán)境造成的污染，農(nóng)作物對其生物利用率高，效果顯著；原料來源廣泛，環(huán)保易降解。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明保護的范圍之內(nèi)。當前第1頁12