本發(fā)明總體上涉及制備經(jīng)工程化以表達(dá)嵌合抗原受體(car)的免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如，t細(xì)胞或nk細(xì)胞)的方法，包含這些免疫效應(yīng)細(xì)胞的組合物，以及其用于治療自身免疫性疾病或障礙的治療用途。

背景技術(shù)：

1、目前用于重度自身免疫性疾病(如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle))的療法包括常規(guī)免疫調(diào)節(jié)和抗炎劑，例如抗瘧藥、糖皮質(zhì)激素、和免疫抑制劑(例如氨甲蝶呤、硫唑嘌呤、霉酚酸酯和環(huán)磷酰胺)和生物制劑(例如，貝利木單抗以及最近常用的阿尼魯單抗(anifrolumab)、以及利妥昔單抗(常用于疾病的嚴(yán)重階段))。重度難治性sle(srsle)患者(伴有或不伴有腎臟受累)，在免疫抑制療法和生物療法失敗后，治療選擇非常有限?？梢赃M(jìn)行自體干細(xì)胞移植(asct)；然而，它仍然是實(shí)驗(yàn)性的，并且與重大毒性(包括死亡)相關(guān)。

2、因此，對于重度自身免疫性疾病(包括srsle)的新治療存在尚未滿足的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本披露關(guān)于制備經(jīng)工程化以表達(dá)car的免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如t細(xì)胞或nk細(xì)胞)的方法，以及使用這樣的方法產(chǎn)生的組合物。還披露了使用這樣的組合物用于治療受試者的疾病的方法，該疾病是例如，自身免疫性疾病或障礙，例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎，例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化。

2、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的方法，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎、例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化，該方法包括向該受試者施用表達(dá)cd19嵌合抗原受體(car)或包含經(jīng)配置以表達(dá)cd19?car的核酸的細(xì)胞(例如，t細(xì)胞)群體，其中該細(xì)胞群體通過包括以下的方法來制備：

3、(i)使細(xì)胞(例如t細(xì)胞，例如從冷凍的或新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物中分離的t細(xì)胞)群體與刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑和/或刺激細(xì)胞表面上共刺激分子的藥劑接觸(例如結(jié)合)；

4、(ii)使細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體與編碼car的核酸分子(例如dna或rna分子)接觸，從而提供包含該核酸分子的細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，其中該car包含cd19抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(“cd19?car”)；以及

5、(iii)收獲該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，以用于儲存(例如在冷凍保存培養(yǎng)基中重新配制該細(xì)胞群體)或施用，其中：

6、(a)步驟(ii)與步驟(i)一起進(jìn)行或在步驟(i)開始后不晚于20小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于12、13、14、15、16、17、或18小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于18小時(shí)進(jìn)行，并且

7、步驟(iii)在步驟(i)開始后不晚于30(例如26)小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于22、23、24、25、26、27、28、29、或30小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于24小時(shí)進(jìn)行，

8、(b)步驟(ii)與步驟(i)一起進(jìn)行或在步驟(i)開始后不晚于20小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于12、13、14、15、16、17、或18小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于18小時(shí)進(jìn)行，并且

9、步驟(iii)在步驟(ii)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(ii)開始后不晚于22、23、24、25、26、27、28、29、或30小時(shí)進(jìn)行，或

10、(c)例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增，或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％，

11、任選地其中步驟(ii)中的核酸分子在病毒載體上，任選地其中步驟(ii)中的核酸分子是病毒載體上的rna分子，任選地其中步驟(ii)包括用病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，該病毒載體包含編碼該car的核酸分子。

12、在一些實(shí)施例中，刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑是刺激cd3的藥劑(例如抗cd3抗體)，并且其中該刺激共刺激分子的藥劑是刺激cd28、icos、cd27、hvem、light、cd40、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、cd2、cd226、或其任何組合的藥劑；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑或該刺激共刺激分子的藥劑選自抗體(例如單結(jié)構(gòu)域抗體(例如重鏈可變結(jié)構(gòu)域抗體)、肽體、fab片段、或scfv)、小分子、或配體(例如天然存在的配體、重組配體、或嵌合配體)；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑或該刺激共刺激分子的藥劑不包含珠；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑包含抗cd3抗體，并且該刺激共刺激分子的藥劑包含抗cd28抗體；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑包含與膠體聚合物納米基質(zhì)共價(jià)附接的抗cd3抗體，并且該刺激共刺激分子的藥劑包含與膠體聚合物納米基質(zhì)共價(jià)附接的抗cd28抗體；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑和該刺激共刺激分子的藥劑包含t細(xì)胞transacttm。

13、在一些實(shí)施例中，與通過除不包括步驟(i)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，步驟(i)增加來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的細(xì)胞的百分比，例如來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的表達(dá)car的細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、40％、50％、或60％)。

14、在一些實(shí)施例中：

15、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相同或相差不超過5％或10％；

16、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比增加例如至少1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍；

17、(c)該細(xì)胞群體中表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比在步驟(ii)持續(xù)時(shí)間的過程中增加，例如在步驟(ii)開始后的18-24小時(shí)之間增加例如至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、或60％；或者

18、(d)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比不降低，或降低不超過5％或10％。

19、在一些實(shí)施例中：

20、(a)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、或40％)；

21、(b)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍)；

22、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高4、6、8、10、或12倍)；

23、(d)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、或40％)；

24、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍)；或者

25、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高4、6、8、10、或12倍)。

26、在一些實(shí)施例中：

27、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞的百分比與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞的百分比相同或相差不超過5％或10％；

28、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比降低至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、或50％；

29、(c)在步驟(ii)持續(xù)時(shí)間的過程中表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+細(xì)胞的百分比降低，例如在步驟(ii)開始后的18-24小時(shí)之間降低例如至少8％、10％、12％、14％、16％、18％、或20％；或者

30、(d)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比不增加或增加不超過5％或10％。

31、在一些實(shí)施例中：

32、(a)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更低百分比的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

33、(b)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低20％、30％、40％、或50％)；

34、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

35、(d)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更低百分比的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

36、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低20％、30％、40％、或50％)；或者

37、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低10％、20％、30％、或40％)。

38、在一些實(shí)施例中：

39、(a)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比增加；

40、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比增加；

41、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；或者

42、(d)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；

43、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；或者

44、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高。

45、在一些實(shí)施例中：

46、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、75％、100％、或125％；

47、(b)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)相比更低(例如，至少低約100％、150％、200％、250％、或300％)：

48、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

49、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

50、(c)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、或200％；

51、(d)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)相比更低(例如，至少低約50％、100％、125％、150％、或175％)：

52、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

53、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

54、(e)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、200％、或250％；

55、(f)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)與以下的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)相比更低(例如，至少低約50％、100％、或125％)：

56、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

57、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

58、(g)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約125％、150％、175％、或200％；

59、(h)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)相比更低(例如，至少低約40％、50％、60％、70％、或80％)：

60、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

61、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

62、(j)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約180％、190％、200％、或210％；或者

63、(k)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)相比更低(例如，至少低約20％、30％、或40％)：

64、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

65、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞。

66、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在與表達(dá)由car識別的抗原的細(xì)胞一起孵育后以更高的水平(例如至少高2、4、6、8、10、12、或14倍)分泌il-2。

67、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在體內(nèi)施用于受試者后持續(xù)更長時(shí)間或以更高的水平擴(kuò)增。

68、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在體內(nèi)施用于受試者后顯示出更強(qiáng)的活性(例如在低劑量下具有更強(qiáng)的活性，例如不超過0.15?x?106、0.2?x?106、0.25?x?106、或0.3?x?106個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量)。

69、在一些實(shí)施例中，例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增，或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如，不超過10％，任選地其中來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的活細(xì)胞數(shù)目較在步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體中的活細(xì)胞數(shù)目減少。

70、在一些實(shí)施例中，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增少于2小時(shí)，例如少于1或1.5小時(shí)。

71、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和/或(ii)在包含il-2、il-15(例如hetil-15(il15/sil-15ra))、il-7、il-21、il-6(例如il-6/sil-6ra)、lsd1抑制劑、malt1抑制劑、或其組合的細(xì)胞培養(yǎng)基(例如無血清培養(yǎng)基)中進(jìn)行。

72、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和/或(ii)在包含血清替代物的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，血清替代物是ctstm免疫細(xì)胞血清替代物(icsr)。

73、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：

74、(iv)(任選地)接受來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如新鮮的全血產(chǎn)物、新鮮的骨髓產(chǎn)物、或新鮮的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的新鮮的產(chǎn)物))，以及

75、(v)從新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如新鮮的全血產(chǎn)物、新鮮的骨髓產(chǎn)物、或新鮮的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的新鮮的產(chǎn)物))中分離在步驟(i)中接觸的細(xì)胞(例如t細(xì)胞，例如cd8+和/或cd4+?t細(xì)胞)群體，任選地其中：

76、步驟(iii)在步驟(v)開始后不晚于35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于27、28、29、30、31、32、33、34、或35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，或

77、例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(v)結(jié)束時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％。

78、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：接受從來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如從全血、骨髓、或器官活檢物或摘除物(例如胸腺切除術(shù))中分離的冷凍保存的t細(xì)胞)中分離的冷凍保存的t細(xì)胞。

79、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：

80、(iv)(任選地)接受來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的冷凍保存的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，例如冷凍保存的全血產(chǎn)物、冷凍保存的骨髓產(chǎn)物、或冷凍保存的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的冷凍保存的產(chǎn)物))，以及

81、(v)從冷凍保存的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，例如冷凍保存的全血產(chǎn)物、冷凍保存的骨髓產(chǎn)物、或冷凍保存的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的冷凍保存的產(chǎn)物))中分離在步驟(i)中接觸的細(xì)胞(例如t細(xì)胞，例如cd8+和/或cd4+?t細(xì)胞)群體，任選地其中：

82、步驟(iii)在步驟(v)開始后不晚于35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于27、28、29、30、31、32、33、34、或35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，或

83、例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(v)結(jié)束時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％。

84、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括步驟(vi)：

85、將來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的一部分培養(yǎng)至少2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、或7天，例如至少2天且不超過7天，并且測量在該部分中的car表達(dá)水平(例如測量該部分中表達(dá)car的活細(xì)胞的百分比)，任選地其中：

86、步驟(iii)包括收獲和冷凍該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，并且步驟(vi)包括將來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的一部分解凍，將該部分培養(yǎng)至少2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、或7天，例如至少2天且不超過7天，并且測量該部分中的car表達(dá)水平(例如測量該部分中表達(dá)car的活細(xì)胞的百分比)。

87、在一些實(shí)施例中，在步驟(i)或步驟(1)開始時(shí)的細(xì)胞群體已經(jīng)富集了表達(dá)il6r的細(xì)胞(例如對il6rα和/或il6rβ呈陽性的細(xì)胞)。在一些實(shí)施例中，在步驟(i)或步驟(1)開始時(shí)的細(xì)胞群體包含不少于50％、60％或70％的表達(dá)il6r的細(xì)胞(例如對il6rα和/或il6rβ呈陽性的細(xì)胞)。

88、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和(ii)或步驟(1)和(2)在包含il-15(例如hetil-15(il15/sil-15ra))的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，例如10、15、20、或25天后，il-15增加細(xì)胞群體擴(kuò)增的能力。在一些實(shí)施例中，il-15增加在細(xì)胞群體中表達(dá)il6rβ的細(xì)胞的百分比。

89、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的方法，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎、例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化，該方法包括向該受試者施用經(jīng)工程化以表達(dá)cd19?car的細(xì)胞群體(“表達(dá)car的細(xì)胞群體”)，所述群體包含：

90、(a)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，約相同百分比的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，如cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞；

91、(b)例如如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，變化在約5％至約10％內(nèi)的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，如cd45ro-ccr7+t細(xì)胞；

92、(c)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，百分比增加的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，如cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞，例如增加至少1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍；

93、(d)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)的百分比相比，約相同百分比的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)；

94、(e)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)的百分比相比，變化在約5％至約10％內(nèi)的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)；

95、(f)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)的百分比相比，百分比降低的中樞記憶細(xì)胞(例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞)，例如降低至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、或50％；

96、(g)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞(例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞)的百分比相比，約相同百分比的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞(例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞)；

97、(h)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞(例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞)的百分比相比，變化在約5％至約10％內(nèi)的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞(例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞)；或者

98、(i)如與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，增加百分比的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞。

99、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的方法，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎、例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化，該方法包括向該受試者施用經(jīng)工程化以表達(dá)cd19?car的細(xì)胞群體(“表達(dá)car的細(xì)胞群體”)，其中：

100、(a)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的相同細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、75％、100％、或125％；

101、(b)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、或200％；

102、(c)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、200％、或250％；

103、(d)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約125％、150％、175％、或200％；或者

104、(e)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)與經(jīng)工程化以表達(dá)car之前的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約180％、190％、200％、或210％。

105、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的方法，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎、例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化，該方法包括向該受試者施用瑞達(dá)基奧侖賽(rapcabtagene?autoleucel)。

106、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有重度難治性自身免疫性疾病的受試者的方法，該方法包括向該受試者施用瑞達(dá)基奧侖賽。

107、在一些實(shí)施例中，重度難治性自身免疫性疾病選自系統(tǒng)性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、特發(fā)性炎癥性肌病、系統(tǒng)性硬化病和anca相關(guān)性血管炎。

108、在一些實(shí)施例中，狼瘡是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在一些實(shí)施例中，sle是重度難治性sle(srsle)。

109、在一些實(shí)施例中，cd19?car包含cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

110、在一些實(shí)施例中：

111、(a)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含選自t細(xì)胞受體的α、β或ζ鏈，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137和cd154的蛋白質(zhì)的跨膜結(jié)構(gòu)域，

112、(b)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含cd8的跨膜結(jié)構(gòu)域，

113、(c)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:6的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

114、(d)該核酸分子包含編碼該跨膜結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?idno:17的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

115、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)的受試者的方法，該方法包括以足以治療所述srsle的量向該受試者施用包含cd19嵌合抗原受體(cd19?car)的細(xì)胞群體，或包含編碼該cd19?car的核酸的細(xì)胞群體，

116、其中該car包含cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，并且其中該跨膜結(jié)構(gòu)域包含cd8蛋白的跨膜結(jié)構(gòu)域；

117、從而治療該srsle。

118、在一些實(shí)施例中：

119、(a)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:6的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

120、(a)該核酸分子包含編碼該跨膜結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?idno:17的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

121、在一些實(shí)施例中，將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按約0.5x106至50x?106個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞，例如約5x106個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如，表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按5x?106個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用。

122、在一些實(shí)施例中，將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按約2.5x106至2.5x?108個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞，例如約1.25x?107個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如，表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按1.25x?107個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用。

123、在一些實(shí)施例中，將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按約1.25x107至1.25x?109個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞，例如約1.25x?108個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如，表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按1.25x?108個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用。

124、在一些實(shí)施例中，將該表達(dá)car的細(xì)胞(例如表達(dá)cd19?car的細(xì)胞)群體按約2.5x106至2.5x?108個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞，例如約1x107或5x?107個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量施用。

125、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)的受試者的方法，該方法包括以足以治療該srsle的量向該受試者施用瑞達(dá)基奧侖賽，

126、從而治療該srsle。

127、在一些實(shí)施例中，將瑞達(dá)基奧侖賽按約0.5x?106至50x?106個(gè)car陽性活細(xì)胞，例如，約5x?106個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將瑞達(dá)基奧侖賽按5x?106個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用。

128、在一些實(shí)施例中，將瑞達(dá)基奧侖賽按約2.5x?106至2.5x?108個(gè)car陽性活細(xì)胞，例如，約1.25x?107個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將瑞達(dá)基奧侖賽按1.25x?107個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用。

129、在一些實(shí)施例中，將瑞達(dá)基奧侖賽按約1.25x?107至1.25x?109個(gè)car陽性活細(xì)胞，例如，約1.25x?108個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用，任選地其中將瑞達(dá)基奧侖賽按1.25x?108個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用。

130、在一些實(shí)施例中，將瑞達(dá)基奧侖賽按約2.5x?106至2.5x?108個(gè)car陽性活細(xì)胞，例如，約1x?107或5x?107個(gè)car陽性活細(xì)胞的劑量施用。

131、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)的受試者的方法，該方法包括向該受試者施用表達(dá)cd19嵌合抗原受體(cd19?car)或包含經(jīng)配置以表達(dá)cd19?car的核酸的細(xì)胞群體，其中將這些細(xì)胞按0.5–50x?106個(gè)car+?t活細(xì)胞(例如，5-12.5x?106個(gè)car+?t活細(xì)胞)的劑量施用。

132、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)的受試者的方法，該方法包括向該受試者施用瑞達(dá)基奧侖賽，其中將瑞達(dá)基奧侖賽按0.5–50x?106個(gè)car+?t活細(xì)胞(例如，5-12.5x106個(gè)car+?t活細(xì)胞)的劑量施用。

133、在一些實(shí)施例中，狼瘡是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在一些實(shí)施例中，sle是重度難治性sle(srsle)，其中任選地該受試者具有腎臟受累。

134、在一些實(shí)施例中，car包含cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

135、在一些實(shí)施例中：

136、(a)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含選自t細(xì)胞受體的α、β或ζ鏈，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137和cd154的蛋白質(zhì)的跨膜結(jié)構(gòu)域，

137、(b)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含cd8的跨膜結(jié)構(gòu)域，

138、(c)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:6的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

139、(d)該核酸分子包含編碼該跨膜結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?idno:17的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

140、在一些實(shí)施例中，cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hc?cdr1)、hc?cdr2、hccdr3、輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(lc?cdr?1)、lc?cdr2和lc?cdr3，其中：

141、(a)該hc?cdr1包含seq?id?no:295的氨基酸序列；

142、(b)該hc?cdr2包含seq?id?no:296的氨基酸序列；

143、(c)該hc?cdr3包含seq?id?no:297的氨基酸序列；

144、(d)該lc?cdr1包含seq?id?no:298的氨基酸序列；

145、(e)該lc?cdr2包含seq?id?no:299的氨基酸序列；并且

146、(f)該lc?cdr3包含seq?id?no:300的氨基酸序列。

147、在一些實(shí)施例中，cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含vh和vl，其中該vh和vl通過接頭連接，任選地其中該接頭包含seq?id?no:63或104的氨基酸序列。

148、在一些實(shí)施例中，cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過鉸鏈區(qū)與跨膜結(jié)構(gòu)域連接，任選地其中：

149、(a)該鉸鏈區(qū)包含seq?id?no:2、3、或4的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

150、(b)該核酸分子包含編碼該鉸鏈區(qū)的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:13、14、或15的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

151、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fcεri、dap10、dap12、或cd66d的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中：

152、(a)該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自cd3ζ的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，

153、(b)該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:9或10的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

154、(c)該核酸分子包含編碼該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:20或21的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

155、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自mhc?i類分子、tnf受體蛋白、免疫球蛋白樣蛋白、細(xì)胞因子受體、整聯(lián)蛋白、信號傳導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子(slam蛋白)、激活性nk細(xì)胞受體、btla、toll配體受體、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、4-1bb(cd137)、b7-h3、icos(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、ly108)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a、cd28-ox40、cd28-4-1bb、或與cd83特異性結(jié)合的配體的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中：

156、(a)該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自4-1bb的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，

157、(b)該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:7的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

158、(c)該核酸分子包含編碼該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:18的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

159、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自4-1bb的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和源自cd3ζ的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno:7的氨基酸序列(或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列)和seq?id?no:9或10的氨基酸序列(或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列)，任選地其中該細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:7的氨基酸序列和seq?id?no:9或10的氨基酸序列。

160、在一些實(shí)施例中，car進(jìn)一步包含含有seq?id?no:1的氨基酸序列的前導(dǎo)序列。

161、在一些實(shí)施例中，cd19?car包含seq?id?no:301的氨基酸序列，或與其具有至少80％、85％、90％、95％、或99％同一性的序列。

162、在一些實(shí)施例中，編碼該cd19?car的該核酸分子包含seq?id?no:302的核苷酸序列，或與其具有至少80％、85％、90％、95％、或99％同一性的序列。

163、在一些實(shí)施例中，受試者先前已經(jīng)用以下中的一種或多種治療，或者同時(shí)用以下中的一種或多種治療：抗瘧藥(例如，羥氯喹或奎納克林)、糖皮質(zhì)激素(例如，潑尼松)、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，氨甲蝶呤、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、環(huán)磷酰胺或他克莫司)、生物藥劑(例如，貝利木單抗、利妥昔單抗、改善疾病的抗風(fēng)濕藥(dmard)(例如，來氟米特)。

164、在一些實(shí)施例中，受試者已被鑒定對包括兩種或更多種免疫抑制療法(例如，霉酚酸酯或環(huán)磷酰胺)與糖皮質(zhì)激素的組合)和一種生物藥劑的治療沒有應(yīng)答。

165、在一些實(shí)施例中，受試者先前沒有接受包括cd19?car(例如，瑞達(dá)基奧侖賽)、過繼性t細(xì)胞療法或基因療法產(chǎn)物的療法。

166、在一些實(shí)施例中，在施用該cd19?car(例如，瑞達(dá)基奧侖賽)之前，該受試者接受淋巴細(xì)胞耗減療法。

167、在一些實(shí)施例中，在施用該cd19?car(例如，瑞達(dá)基奧侖賽)之前約兩周，該受試者接受淋巴細(xì)胞耗減療法。

168、在一些實(shí)施例中，該淋巴細(xì)胞耗減療法包括氟達(dá)拉濱(例如，25mg/m2?iv，每天三劑)和環(huán)磷酰胺(例如，250mg/m2?iv，每天三劑)。

169、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括向受試者施用第二治療劑。

170、在一些實(shí)施例中，將該第二治療劑在施用該表達(dá)car的細(xì)胞群體或瑞達(dá)基奧侖賽之前、同時(shí)或之后施用。

171、在一些實(shí)施例中，監(jiān)測該受試者的細(xì)胞因子釋放綜合征的跡象，例如持續(xù)至少2、2.5、3、3.5、或4天，例如持續(xù)約3天。

172、在一些實(shí)施例中，(i)在施用皮質(zhì)類固醇之前和/或(ii)當(dāng)絕對t細(xì)胞計(jì)數(shù)≥300/mm3時(shí)進(jìn)行白細(xì)胞單采。

173、在一個(gè)方面，本披露提供了制備表達(dá)嵌合抗原受體(car)的細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體的方法，該方法包括：

174、(i)使細(xì)胞群體(例如，t細(xì)胞，例如，從冷凍的或新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物中分離的t細(xì)胞)與刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑和/或刺激該細(xì)胞表面上共刺激分子的藥劑接觸(例如，結(jié)合)，其中該細(xì)胞群體來自患有自身免疫性疾病或障礙的受試者，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎，例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化；

175、(ii)使該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體與編碼該car的核酸分子(例如dna或rna分子)接觸，從而提供包含該核酸分子的細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，其中任選地該car包含cd19抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；以及

176、(iii)收獲該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，以用于儲存(例如在冷凍保存培養(yǎng)基中重新配制該細(xì)胞群體)或施用，其中：

177、(a)步驟(ii)與步驟(i)一起進(jìn)行或在步驟(i)開始后不晚于20小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于12、13、14、15、16、17、或18小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于18小時(shí)進(jìn)行，并且

178、步驟(iii)在步驟(i)開始后不晚于30(例如26)小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于22、23、24、25、26、27、28、29、或30小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于24小時(shí)進(jìn)行，

179、(b)步驟(ii)與步驟(i)一起進(jìn)行或在步驟(i)開始后不晚于20小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于12、13、14、15、16、17、或18小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后不晚于18小時(shí)進(jìn)行，并且

180、步驟(iii)在步驟(ii)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(ii)開始后不晚于22、23、24、25、26、27、28、29、或30小時(shí)進(jìn)行，或

181、(c)例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增，或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％，

182、任選地其中步驟(ii)中的核酸分子在病毒載體上，任選地其中步驟(ii)中的核酸分子是病毒載體上的rna分子，任選地其中步驟(ii)包括用病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，該病毒載體包含編碼該car的核酸分子。

183、在一些實(shí)施例中，刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑是刺激cd3的藥劑(例如抗cd3抗體)，并且其中該刺激共刺激分子的藥劑是刺激cd28、icos、cd27、hvem、light、cd40、4-1bb、ox40、dr3、gitr、cd30、tim1、cd2、cd226、或其任何組合的藥劑；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑或該刺激共刺激分子的藥劑選自抗體(例如單結(jié)構(gòu)域抗體(例如重鏈可變結(jié)構(gòu)域抗體)、肽體、fab片段、或scfv)、小分子、或配體(例如天然存在的配體、重組配體、或嵌合配體)；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑或該刺激共刺激分子的藥劑不包含珠；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑包含抗cd3抗體，并且該刺激共刺激分子的藥劑包含抗cd28抗體；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑包含與膠體聚合物納米基質(zhì)共價(jià)附接的抗cd3抗體，并且該刺激共刺激分子的藥劑包含與膠體聚合物納米基質(zhì)共價(jià)附接的抗cd28抗體；任選地其中該刺激cd3/tcr復(fù)合物的藥劑和該刺激共刺激分子的藥劑包含t細(xì)胞transacttm。

184、在一些實(shí)施例中，與通過除不包括步驟(i)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，步驟(i)增加來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的細(xì)胞的百分比，例如來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的表達(dá)car的細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、40％、50％、或60％)。

185、在一些實(shí)施例中：

186、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相同或相差不超過5％或10％；

187、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比增加例如至少1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍；

188、(c)該細(xì)胞群體中表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比在步驟(ii)持續(xù)時(shí)間的過程中增加，例如在步驟(ii)開始后的18-24小時(shí)之間增加例如至少30％、35％、40％、45％、50％、55％、或60％；或者

189、(d)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比不降低，或降低不超過5％或10％。

190、在一些實(shí)施例中：

191、(a)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、或40％)；

192、(b)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍)；

193、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高4、6、8、10、或12倍)；

194、(d)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更高百分比的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞(例如至少高10％、20％、30％、或40％)；

195、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的初始細(xì)胞，例如初始t細(xì)胞，例如cd45ra+cd45ro-ccr7+t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高1.2、1.4、1.6、1.8、2.0、2.2、2.4、2.6、2.8、或3倍)；或者

196、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的初始t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd45ro-ccr7+?t細(xì)胞的百分比更高(例如至少高4、6、8、10、或12倍)。

197、在一些實(shí)施例中：

198、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞的百分比與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞的百分比相同或相差不超過5％或10％；

199、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比降低至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、或50％；

200、(c)在步驟(ii)持續(xù)時(shí)間的過程中表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+細(xì)胞的百分比降低，例如在步驟(ii)開始后的18-24小時(shí)之間降低例如至少8％、10％、12％、14％、16％、18％、或20％；或者

201、(d)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比不增加或增加不超過5％或10％。

202、在一些實(shí)施例中：

203、(a)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更低百分比的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

204、(b)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低20％、30％、40％、或50％)；

205、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

206、(d)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體顯示出更低百分比的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如cd95+中樞記憶t細(xì)胞(例如至少低10％、20％、30％、或40％)；

207、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的中樞記憶細(xì)胞，例如中樞記憶t細(xì)胞，例如ccr7+cd45ro+t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低20％、30％、40％、或50％)；或者

208、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的中樞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的ccr7+cd45ro+?t細(xì)胞的百分比更低(例如至少低10％、20％、30％、或40％)。

209、在一些實(shí)施例中：

210、(a)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比增加；

211、(b)如與在步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比增加；

212、(c)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；或者

213、(d)與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；

214、(e)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高；或者

215、(f)與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的表達(dá)car的干細(xì)胞記憶t細(xì)胞，例如表達(dá)car的cd45ra+cd95+il-2受體β+ccr7+cd62l+?t細(xì)胞的百分比更高。

216、在一些實(shí)施例中：

217、(a)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、75％、100％、或125％；

218、(b)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上tem對比向下tscm)相比更低(例如，至少低約100％、150％、200％、250％、或300％)：

219、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

220、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

221、(c)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、或200％；

222、(d)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上treg對比向下teff)相比更低(例如，至少低約50％、100％、125％、150％、或175％)：

223、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

224、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

225、(e)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約25％、50％、100％、150％、200％、或250％；

226、(f)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)與以下的中位數(shù)基因集評分(向下干細(xì)胞性)相比更低(例如，至少低約50％、100％、或125％)：

227、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

228、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

229、(g)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約125％、150％、175％、或200％；

230、(h)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上缺氧)相比更低(例如，至少低約40％、50％、60％、70％、或80％)：

231、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

232、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞；

233、(j)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)與來自步驟(i)開始時(shí)細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)大約相同或相差不超過(例如，增加不超過)約180％、190％、200％、或210％；或者

234、(k)來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)與以下的中位數(shù)基因集評分(向上自噬)相比更低(例如，至少低約20％、30％、或40％)：

235、通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞，或

236、通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天，例如5、6、7、8、或9天外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞。

237、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在與表達(dá)由car識別的抗原的細(xì)胞一起孵育后以更高的水平(例如至少高2、4、6、8、10、12、或14倍)分泌il-2。

238、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在體內(nèi)施用于受試者后持續(xù)更長時(shí)間或以更高的水平擴(kuò)增。

239、在一些實(shí)施例中，與通過除步驟(iii)在步驟(i)開始后超過26小時(shí)(例如在步驟(i)開始后超過5、6、7、8、9、10、11、或12天)進(jìn)行外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，或與通過除進(jìn)一步包括在步驟(ii)之后和在步驟(iii)之前在體外擴(kuò)增細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體超過3天(例如5、6、7、8、或9天)外其他方面類似的方法制備的細(xì)胞相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體在體內(nèi)施用于受試者后顯示出更強(qiáng)的活性(例如在低劑量下具有更強(qiáng)的活性，例如不超過0.15x?106、0.2x?106、0.25x?106、或0.3x?106個(gè)表達(dá)car的活細(xì)胞的劑量)。

240、在一些實(shí)施例中，例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增，或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如，不超過10％，任選地其中來自步驟(iii)的細(xì)胞群體中的活細(xì)胞數(shù)目較在步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體中的活細(xì)胞數(shù)目減少。

241、在一些實(shí)施例中，與步驟(i)開始時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增少于2小時(shí)，例如少于1或1.5小時(shí)。

242、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和/或(ii)在包含il-2、il-15(例如hetil-15(il15/sil-15ra))、il-7、il-21、il-6(例如il-6/sil-6ra)、lsd1抑制劑、malt1抑制劑、或其組合的細(xì)胞培養(yǎng)基(例如無血清培養(yǎng)基)中進(jìn)行。

243、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和/或(ii)在包含血清替代物的無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，血清替代物是ctstm免疫細(xì)胞血清替代物(icsr)。

244、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：

245、(iv)(任選地)接受來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如新鮮的全血產(chǎn)物、新鮮的骨髓產(chǎn)物、或新鮮的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的新鮮的產(chǎn)物))，以及

246、(v)從新鮮的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如新鮮的全血產(chǎn)物、新鮮的骨髓產(chǎn)物、或新鮮的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的新鮮的產(chǎn)物))中分離在步驟(i)中接觸的細(xì)胞(例如t細(xì)胞，例如cd8+和/或cd4+?t細(xì)胞)群體，任選地其中：

247、步驟(iii)在步驟(v)開始后不晚于35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于27、28、29、30、31、32、33、34、或35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，或

248、例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(v)結(jié)束時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％。

249、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：接受從來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，如從全血、骨髓、或器官活檢物或摘除物(例如胸腺切除術(shù))中分離的冷凍保存的t細(xì)胞)中分離的冷凍保存的t細(xì)胞。

250、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在步驟(i)之前：

251、(iv)(任選地)接受來自實(shí)體，例如實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)院或醫(yī)療保健提供者的冷凍保存的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，例如冷凍保存的全血產(chǎn)物、冷凍保存的骨髓產(chǎn)物、或冷凍保存的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的冷凍保存的產(chǎn)物))，以及

252、(v)從冷凍保存的白細(xì)胞單采產(chǎn)物(或造血組織的替代性來源，例如冷凍保存的全血產(chǎn)物、冷凍保存的骨髓產(chǎn)物、或冷凍保存的器官活檢物或摘除物(例如來自胸腺切除術(shù)的冷凍保存的產(chǎn)物))中分離在步驟(i)中接觸的細(xì)胞(例如t細(xì)胞，例如cd8+和/或cd4+?t細(xì)胞)群體，任選地其中：

253、步驟(iii)在步驟(v)開始后不晚于35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于27、28、29、30、31、32、33、34、或35小時(shí)進(jìn)行，例如在步驟(v)開始后不晚于30小時(shí)進(jìn)行，或

254、例如，如通過活細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行評估，與步驟(v)結(jié)束時(shí)的細(xì)胞群體相比，來自步驟(iii)的細(xì)胞群體不擴(kuò)增或擴(kuò)增不超過5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、或40％，例如不超過10％。

255、在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括步驟(vi)：

256、將來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的一部分培養(yǎng)至少2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、或7天，例如至少2天且不超過7天，并且測量在該部分中的car表達(dá)水平(例如測量該部分中表達(dá)car的活細(xì)胞的百分比)，任選地其中：

257、步驟(iii)包括收獲和冷凍該細(xì)胞(例如t細(xì)胞)群體，并且步驟(vi)包括將來自步驟(iii)的細(xì)胞群體的一部分解凍，將該部分培養(yǎng)至少2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、或7天，例如至少2天且不超過7天，并且測量該部分中的car表達(dá)水平(例如測量該部分中表達(dá)car的活細(xì)胞的百分比)。

258、在一些實(shí)施例中，在步驟(i)或步驟(1)開始時(shí)的細(xì)胞群體已經(jīng)富集了表達(dá)il6r的細(xì)胞(例如對il6rα和/或il6rβ呈陽性的細(xì)胞)。在一些實(shí)施例中，在步驟(i)或步驟(1)開始時(shí)的細(xì)胞群體包含不少于50％、60％或70％的表達(dá)il6r的細(xì)胞(例如對il6rα和/或il6rβ呈陽性的細(xì)胞)。

259、在一些實(shí)施例中，步驟(i)和(ii)或步驟(1)和(2)在包含il-15(例如hetil-15(il15/sil-15ra))的細(xì)胞培養(yǎng)基中進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，例如10、15、20、或25天后，il-15增加細(xì)胞群體擴(kuò)增的能力。在一些實(shí)施例中，il-15增加在細(xì)胞群體中表達(dá)il6rβ的細(xì)胞的百分比。

260、在一些實(shí)施例中，狼瘡是系統(tǒng)性紅斑狼瘡。在一些實(shí)施例中，sle是重度難治性sle(srsle)。

261、在一些實(shí)施例中，car包含抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、和細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

262、在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域與狼瘡相關(guān)的b細(xì)胞抗原(例如，cd19)結(jié)合。

263、在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含本文披露的cdr、vh、vl、scfv或car序列。

264、在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該cd19結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hc?cdr1)、hc?cdr2、hc?cdr3、輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(lc?cdr?1)、lc?cdr2和lc?cdr3，其中：

265、(a)該hc?cdr1包含seq?id?no:295的氨基酸序列；

266、(b)該hc?cdr2包含seq?id?no:296的氨基酸序列；

267、(c)該hc?cdr3包含seq?id?no:297的氨基酸序列；

268、(d)該lc?cdr1包含seq?id?no:298的氨基酸序列；

269、(e)該lc?cdr2包含seq?id?no:299的氨基酸序列；并且

270、(f)該lc?cdr3包含seq?id?no:300的氨基酸序列。

271、在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包含vh和vl，其中該vh和vl通過接頭連接，任選地其中該接頭包含seq?id?no:63或104的氨基酸序列。

272、在一些實(shí)施例中：

273、(a)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含選自t細(xì)胞受體的α、β或ζ鏈，cd28，cd3ε，cd45，cd4，cd5，cd8，cd9，cd16，cd22，cd33，cd37，cd64，cd80，cd86，cd134，cd137和cd154的蛋白質(zhì)的跨膜結(jié)構(gòu)域，

274、(b)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含cd8的跨膜結(jié)構(gòu)域，

275、(c)該跨膜結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:6的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

276、(d)該核酸分子包含編碼該跨膜結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?idno:17的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

277、在一些實(shí)施例中，抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域通過鉸鏈區(qū)與跨膜結(jié)構(gòu)域連接，任選地其中：

278、(a)該鉸鏈區(qū)包含seq?id?no:2、3、或4的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

279、(b)該核酸分子包含編碼該鉸鏈區(qū)的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:13、14、或15的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

280、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自cd3ζ、tcrζ、fcrγ、fcrβ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b、cd278(icos)、fcεri、dap10、dap12、或cd66d的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中：

281、(a)該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自cd3ζ的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，

282、(b)該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:9或10的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

283、(c)該核酸分子包含編碼該初級信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:20或21的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

284、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自mhc?i類分子、tnf受體蛋白、免疫球蛋白樣蛋白、細(xì)胞因子受體、整聯(lián)蛋白、信號傳導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子(slam蛋白)、激活性nk細(xì)胞受體、btla、toll配體受體、ox40、cd2、cd7、cd27、cd28、cd30、cd40、cds、icam-1、4-1bb(cd137)、b7-h3、icos(cd278)、gitr、baffr、light、hvem(lightr)、kirds2、slamf7、nkp80(klrf1)、nkp44、nkp30、nkp46、cd19、cd4、cd8α、cd8β、il2rβ、il2rγ、il7rα、itga4、vla1、cd49a、itga4、ia4、cd49d、itga6、vla-6、cd49f、itgad、cd11d、itgae、cd103、itgal、cd11a、lfa-1、itgam、cd11b、itgax、cd11c、itgb1、cd29、itgb2、cd18、itgb7、nkg2d、nkg2c、tnfr2、trance/rankl、dnam1(cd226)、slamf4(cd244、2b4)、cd84、cd96(tactile)、ceacam1、crtam、ly9(cd229)、cd160(by55)、psgl1、cd100(sema4d)、cd69、slamf6(ntb-a、ly108)、slam(slamf1、cd150、ipo-3)、blame(slamf8)、selplg(cd162)、ltbr、lat、gads、slp-76、pag/cbp、cd19a、cd28-ox40、cd28-4-1bb、或與cd83特異性結(jié)合的配體的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中：

285、(a)該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自4-1bb的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，

286、(b)該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:7的氨基酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列，或

287、(c)該核酸分子包含編碼該共刺激信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的核酸序列，其中該核酸序列包含seq?id?no:18的核酸序列，或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的核酸序列。

288、在一些實(shí)施例中，細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含源自4-1bb的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和源自cd3ζ的功能性信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，任選地其中該細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?idno:7的氨基酸序列(或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列)和seq?id?no:9或10的氨基酸序列(或與其具有至少約85％、90％、95％、或99％序列同一性的氨基酸序列)，任選地其中該細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seq?id?no:7的氨基酸序列和seq?id?no:9或10的氨基酸序列。

289、在一些實(shí)施例中，car進(jìn)一步包含含有seq?id?no:1的氨基酸序列的前導(dǎo)序列。

290、在一些實(shí)施例中，car包含cd19?car，該cd19?car包含seq?id?no:301的氨基酸序列，或與其具有至少80％、85％、90％、95％、或99％同一性的序列。

291、在一些實(shí)施例中，編碼該cd19?car的該核酸分子包含seq?id?no:302的核苷酸序列，或與其具有至少80％、85％、90％、95％、或99％同一性的序列。

292、在一些實(shí)施例中，受試者先前已經(jīng)用以下中的一種或多種治療：抗瘧藥(例如，羥氯喹或奎納克林)、糖皮質(zhì)激素(例如，潑尼松)、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑(例如，氨甲蝶呤、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、環(huán)磷酰胺或他克莫司)、生物藥劑(例如，貝利木單抗、利妥昔單抗、改善疾病的抗風(fēng)濕藥(dmard)(例如，來氟米特)。

293、在一些實(shí)施例中，受試者已被鑒定對包括兩種或更多種免疫抑制療法(例如，霉酚酸酯或環(huán)磷酰胺)與糖皮質(zhì)激素的組合)和一種生物藥劑的治療沒有應(yīng)答。

294、在一些實(shí)施例中，受試者先前沒有接受包括cd19?car、過繼性t細(xì)胞療法或基因療法產(chǎn)物的療法。

295、在一些實(shí)施例中，(i)在施用皮質(zhì)類固醇之前和/或(ii)當(dāng)絕對t細(xì)胞計(jì)數(shù)≥300/mm3時(shí)進(jìn)行白細(xì)胞單采。

296、在一個(gè)方面，本披露提供了表達(dá)car的細(xì)胞(例如，自體或同種異體表達(dá)car的t細(xì)胞或nk細(xì)胞)群體，該細(xì)胞群體通過本文所述的方法制備。

297、在一些實(shí)施例中，群體包含自身反應(yīng)性b細(xì)胞(例如，不表達(dá)car的自身反應(yīng)性b細(xì)胞)。

298、在一個(gè)方面，本披露提供了藥物組合物，該藥物組合物包含本文所述的表達(dá)car的細(xì)胞群體、以及藥學(xué)上可接受的載劑。

299、在一個(gè)方面，本披露提供了用于在調(diào)節(jié)患有狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)的受試者的免疫應(yīng)答的方法中使用的表達(dá)car的細(xì)胞群體或包含該表達(dá)car的細(xì)胞群體的藥物組合物，所述方法包括向該受試者施用有效量的表達(dá)car的細(xì)胞群體或有效量的藥物組合物。

300、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病的受試者的方法，該自身免疫性疾病是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)，該方法包括向該受試者施用：

301、表達(dá)cd19嵌合抗原受體(cd19?car)或包含經(jīng)配置以表達(dá)cd19car的核酸的細(xì)胞群體，以及

302、選自抗瘧藥劑或穩(wěn)定的免疫抑制劑的第二療法，

303、其中該第二療法和cd19?car細(xì)胞同時(shí)存在于該受試者中，例如，其中當(dāng)該cd19car細(xì)胞存在于該受試者中時(shí)施用該第二療法。

304、在一個(gè)方面，本披露提供了治療患有自身免疫性疾病的受試者的方法，該自身免疫性疾病是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)，該方法包括向該受試者施用：

305、瑞達(dá)基奧侖賽，以及

306、選自抗瘧藥劑或穩(wěn)定的免疫抑制劑的第二療法，

307、其中該第二療法和瑞達(dá)基奧侖賽同時(shí)存在于該受試者中，例如，其中當(dāng)瑞達(dá)基奧侖賽存在于該受試者中時(shí)施用該第二療法。

308、在一些方面，本披露提供了瑞達(dá)基奧侖賽，其由患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的自體細(xì)胞制備，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎，例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化。

309、在一個(gè)方面，本披露提供了藥物組合物，該藥物組合物包含瑞達(dá)基奧侖賽以及藥學(xué)上可接受的載劑。

310、在一個(gè)方面，本披露提供了用于在調(diào)節(jié)患有自身免疫性疾病或障礙的受試者的免疫應(yīng)答的方法中使用的瑞達(dá)基奧侖賽或包含瑞達(dá)基奧侖賽的藥物組合物，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎，例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化，所述方法包括向該受試者施用有效量的瑞達(dá)基奧侖賽群體或有效量的藥物組合物。

311、在一個(gè)方面，本披露提供了用于在調(diào)節(jié)患有狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)的受試者的免疫應(yīng)答的方法中使用的瑞達(dá)基奧侖賽或包含瑞達(dá)基奧侖賽的藥物組合物，所述方法包括向該受試者施用有效量的瑞達(dá)基奧侖賽或有效量的藥物組合物。

312、用于在治療患有自身免疫性疾病或障礙的受試者中使用的瑞達(dá)基奧侖賽，該自身免疫性疾病或障礙是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)、系統(tǒng)性硬化病(例如，快速進(jìn)展的系統(tǒng)性硬化病(ssc)伴有顯著的肺部受累(例如對于自體hsct而言))、特發(fā)性炎癥性肌病(例如，多肌炎、皮肌炎、抗合成酶綜合征、免疫介導(dǎo)的壞死性肌病、包涵體肌炎、重疊肌炎、癌癥相關(guān)性肌炎，例如抗合成酶綜合征伴有ild)、血管炎(例如，anca相關(guān)性血管炎)、重度難治性干燥綜合征、重度難治性神經(jīng)免疫性疾病(例如重癥肌無力(mg)、視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mog相關(guān)疾病(mogad)、多發(fā)性硬化(ms))、重度難治性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、抗體介導(dǎo)的神經(jīng)免疫性疾病(例如，achr+和musk+重癥肌無力(mg)、aqp4+視神經(jīng)脊髓炎(nmo)、mogad(抗mog相關(guān)疾病)、nmdar+腦炎、或抗體相關(guān)神經(jīng)副腫瘤性疾病)、艾迪生病、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺毒癥、慢性活動(dòng)性肝炎、復(fù)發(fā)性多軟骨炎、尋常型天皰瘡、或肌萎縮側(cè)索硬化。

313、用于在治療患有重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)的受試者中使用的瑞達(dá)基奧侖賽，其中將瑞達(dá)基奧侖賽配制用于以足以治療srsle的量進(jìn)行施用。

314、用于在治療患有狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)的受試者中使用的瑞達(dá)基奧侖賽，將瑞達(dá)基奧侖賽配制用于按0.5–50x?106個(gè)car+?t活細(xì)胞(例如，5-12.5x?106個(gè)car+?t活細(xì)胞)的劑量進(jìn)行施用。

315、用于在治療患有自身免疫性疾病的受試者中使用的瑞達(dá)基奧侖賽和第二療法，該自身免疫性疾病是例如，狼瘡(例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡(sle)，例如，重度難治性系統(tǒng)性紅斑狼瘡(srsle)，或狼瘡腎炎)，

316、其中該第二療法選自抗瘧藥劑或穩(wěn)定的免疫抑制劑，并且

317、其中該第二療法和瑞達(dá)基奧侖賽同時(shí)存在于該受試者中，例如，其中當(dāng)瑞達(dá)基奧侖賽存在于該受試者中時(shí)施用該第二療法。

318、雖然與本文所述的那些方法和材料類似或等同的方法和材料可以用于本發(fā)明的實(shí)踐或測試，但是以下描述合適的方法和材料。本文提及的所有出版物、專利申請、專利和其他參考(例如序列數(shù)據(jù)庫參考號)通過引用以其全文并入。例如本文提及的所有g(shù)enbank、unigene和entrez序列(例如在本文的任一表中)均通過引用并入。當(dāng)一個(gè)基因或蛋白質(zhì)參考多個(gè)序列登錄號時(shí)，涵蓋所有的序列變體。

319、此外，材料、方法和實(shí)例僅是說明性的而不旨在限制。標(biāo)題、小標(biāo)題或編號或字母元素，例如(a)、(b)、(i)等僅為了便于閱讀而呈現(xiàn)。在本文件中使用標(biāo)題或編號或字母元素不要求步驟或元素以字母順序執(zhí)行，或者步驟或元素必須彼此離散。根據(jù)說明書和附圖并且根據(jù)權(quán)利要求，本發(fā)明的其他特征、目標(biāo)和優(yōu)點(diǎn)將是顯而易見的。