在一些實(shí)施方案中，本文提供了用于產(chǎn)生生物工程化自然殺傷(nk)細(xì)胞或t細(xì)胞，例如，表達(dá)嵌合抗原受體的nk細(xì)胞或t細(xì)胞(car-nk細(xì)胞或car-t細(xì)胞)的方法及其用途。在一些實(shí)施方案中，本文還提供了包含car-nk細(xì)胞或car-t細(xì)胞的組合物及該組合物用于治療疾病或障礙的用途。

背景技術(shù)：

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、在一個(gè)方面，本文提供了一種用于制備用于轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫效應(yīng)細(xì)胞的方法，該方法包括用于增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的步驟。

2、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是自體的或同種異體的。

3、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是胞毒細(xì)胞，并且其中任選地胞毒細(xì)胞是自然殺傷細(xì)胞。

4、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是γ-δt細(xì)胞。

5、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是α-βt細(xì)胞。

6、在一些實(shí)施方案中，用于增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的步驟包括：使免疫效應(yīng)細(xì)胞與斯達(dá)汀接觸。

7、在一些實(shí)施方案中，斯達(dá)汀是羅蘇伐他汀。

8、在一些實(shí)施方案中，斯達(dá)汀是阿托伐他汀。

9、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括用于抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的步驟。

10、在一些實(shí)施方案中，用于抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的步驟包括：使免疫效應(yīng)細(xì)胞與3-磷酸肌醇依賴(lài)性激酶1(pdk1)抑制劑接觸。

11、在一些實(shí)施方案中，pdk1抑制劑是bx795。

12、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括提供一種或多種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子。

13、在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是vectofusin。

14、在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是retronectin。

15、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括將核酸引入免疫效應(yīng)細(xì)胞中。

16、在一些實(shí)施方案中，核酸包含啟動(dòng)子。

17、在一些實(shí)施方案中，啟動(dòng)子選自由cag啟動(dòng)子、pgk啟動(dòng)子、ef1a啟動(dòng)子和efs啟動(dòng)子組成的組。

18、在一些實(shí)施方案中，核酸經(jīng)由慢病毒顆粒遞送。

19、在一些實(shí)施方案中，慢病毒顆粒用水泡性口炎病毒g(vsv-g)假型化。

20、在一些實(shí)施方案中，核酸編碼外源功能性受體。

21、在一些實(shí)施方案中，外源功能性受體是嵌合抗原受體(car)或tcr。

22、在一個(gè)方面，本文提供了一種用于制備用于轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫效應(yīng)細(xì)胞的方法，該方法包括使免疫效應(yīng)細(xì)胞與增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的藥劑接觸。

23、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是自體的或同種異體的。

24、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是胞毒細(xì)胞，并且其中任選地胞毒細(xì)胞是自然殺傷細(xì)胞。

25、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是γδt細(xì)胞。

26、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是αβt細(xì)胞。

27、在一些實(shí)施方案中，用于增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的步驟包括：使免疫效應(yīng)細(xì)胞與斯達(dá)汀接觸。

28、在一些實(shí)施方案中，斯達(dá)汀是羅蘇伐他汀。

29、在一些實(shí)施方案中，斯達(dá)汀是阿托伐他汀。

30、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括用于抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的步驟。

31、在一些實(shí)施方案中，用于抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的步驟包括：使免疫效應(yīng)細(xì)胞與3-磷酸肌醇依賴(lài)性激酶1(pdk1)抑制劑接觸。

32、在一些實(shí)施方案中，pdk1抑制劑是bx795。

33、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括提供一種或多種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子。

34、在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是vectofusin。

35、在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是retronectin。

36、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括將核酸引入免疫效應(yīng)細(xì)胞中。

37、在一些實(shí)施方案中，核酸包含啟動(dòng)子。

38、在一些實(shí)施方案中，啟動(dòng)子選自由cag啟動(dòng)子、pgk啟動(dòng)子、ef1a啟動(dòng)子和efs啟動(dòng)子組成的組。

39、在一些實(shí)施方案中，核酸經(jīng)由慢病毒顆粒遞送。

40、在一些實(shí)施方案中，慢病毒顆粒用水泡性口炎病毒g(vsv-g)假型化。

41、在一些實(shí)施方案中，核酸編碼外源功能性受體。

42、在一些實(shí)施方案中，外源功能性受體是嵌合抗原受體(car)或tcr。

43、在一個(gè)方面，本文提供了一種用于制備用于轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫效應(yīng)細(xì)胞的方法，該方法包括：

44、i.用于增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的第一步；以及

45、ii.用于抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的第二步；

46、其中第一步可以在第二步之前、與第二步同時(shí)或者在第二步之后進(jìn)行。

47、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是自體的或同種異體的。

48、在一些實(shí)施方案中，免疫效應(yīng)細(xì)胞是胞毒細(xì)胞，并且其中任選地胞毒細(xì)胞是自然殺傷細(xì)胞。

49、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括提供一種或多種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子。

50、在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是vectofusin。在一些實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)子是retronectin。

51、在一些實(shí)施方案中，該方法還包括將核酸引入免疫效應(yīng)細(xì)胞中。在一些實(shí)施方案中，核酸包含啟動(dòng)子。在一些實(shí)施方案中，啟動(dòng)子選自由cag啟動(dòng)子、pgk啟動(dòng)子、ef1a啟動(dòng)子和efs啟動(dòng)子組成的組。

52、在一些實(shí)施方案中，核酸經(jīng)由慢病毒顆粒遞送。在一些實(shí)施方案中，慢病毒顆粒用水泡性口炎病毒g(vsv-g)假型化。在一些實(shí)施方案中，核酸編碼外源功能性受體。

53、在一些實(shí)施方案中，外源功能性受體是嵌合抗原受體(car)或tcr。

54、在一些實(shí)施方案中，第一步包括使免疫效應(yīng)細(xì)胞與斯達(dá)汀接觸。在一些實(shí)施方案中，斯達(dá)汀是羅蘇伐他汀。

55、在一些實(shí)施方案中，第二步包括使免疫效應(yīng)細(xì)胞與3-磷酸肌醇依賴(lài)性激酶1(pdk1)抑制劑接觸。在一些實(shí)施方案中，pdk1抑制劑是bx795。

56、另一方面，本文提供了一種用于制備用于轉(zhuǎn)導(dǎo)的免疫效應(yīng)細(xì)胞的方法，該方法包括：

57、i.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的第一藥劑接觸；

58、ii.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的第二藥劑接觸；以及

59、iii.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與增強(qiáng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的第三藥劑接觸。

60、在另一方面，本文提供了一種方法，該方法包括：

61、i.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與增加低密度脂蛋白受體(ldlr)的表達(dá)的第一藥劑接觸；

62、ii.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與抑制免疫效應(yīng)細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)抗病毒防御機(jī)制的第二藥劑接觸；

63、iii.使免疫效應(yīng)細(xì)胞與增強(qiáng)轉(zhuǎn)導(dǎo)的第三藥劑接觸；以及

64、iv.將核酸引入免疫效應(yīng)細(xì)胞中。